本文關鍵詞：雌激素對髓鞘再生的影響及機制研究

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【摘要】：目的:評價雌激素對髓鞘再生的影響并探討其可能的機制,為脫髓鞘疾病損傷的治療提供新的思路。方法:66只雌性6周齡C57 BL/6小鼠適應性喂養(yǎng)一周后,隨機分為6組(n=11):正常組、脫髓鞘模型組、自然恢復組(脫髓鞘后自然恢復2周)、雌激素治療組(脫髓鞘后雌二醇E2(5mg/kg體重,治療2周)、卵巢去勢組(脫髓鞘后卵巢去勢,2周后觀察)和假手術組(脫髓鞘后假手術,2周后觀察)。小鼠脫髓鞘模型以0.2%Cuprizone(CPZ)混合飼料連續(xù)飼喂6周方式誘導。通過免疫組織化學染色方法檢測小鼠腦組織內髓鞘堿性蛋白MBP(Myelin basic protein)的表達,評價髓鞘脫失及再生的程度;以行為學實驗方法檢測激素治療對小鼠運動能力的影響;以western blot技術及免疫組化實驗方法檢測小鼠腦組織內MBP、少突膠質細胞前期細胞標記物NG2(nerve glial antigen 2)、少突膠質細胞轉錄因子2 Olig2(oligodendrocyte transcription factor 2)、星形膠質細胞標記物GFAP(glial fibrillary acidic protein)的表達情況,旨在探討雌激素對髓鞘再生的影響及其可能的機制。結果:1動物模型制作免疫組織化學檢測顯示,正常組小鼠胼胝體區(qū)MBP染色深,結構均勻致密(平均光密度值為0.18±0.05),而脫髓鞘模型組(平均光密度值為0.08±0.04)MBP染色較淺,結構松散、稀疏,塊狀不均勻,表達較正常組顯著降低(P0.05),證實脫髓鞘模型建立成功。脫髓鞘小鼠卵巢去勢后經連續(xù)陰道涂片(連續(xù)5天)HE染色,鏡下可見大量白細胞,無角化的上皮細胞,即小鼠處于發(fā)情間期,證實卵巢去勢模型建立成功。2體重變化正常組小鼠體重逐漸緩慢增長,CPZ誘導小鼠脫髓鞘過程中前2周小鼠體重急劇下降,之后緩慢增長,但體重始終低于同齡正常組;停止CPZ飼喂后給予E2治療組小鼠體重比自然恢復組小鼠及卵巢去勢組小鼠體重明顯增加(P0.05)。3運動能力檢測在旋轉棒實驗中,脫髓鞘模型組小鼠在旋轉棒上的維持時間明顯短于正常組小鼠(P0.05);自然恢復組較脫髓鞘模型組在棒上的時間延長(P0.05);給予雌激素治療后小鼠在棒上的維持時間較自然恢復組小鼠延長(P0.05);卵巢去勢組小鼠在棒上的維持時間與自然恢復組相比未見顯著差異(P0.05),假手術組小鼠在棒上的維持時間與自然恢復組相比未見顯著差異(P0.05)。4免疫組化結果正常組、脫髓鞘模型組、自然恢復組及卵巢去勢組在小鼠胼胝體區(qū)均僅可見NG2陽性細胞(在胞漿表達),即少突膠質細胞前體細胞。脫髓鞘模型組NG2陽性細胞數(shù)較正常組增多(P0.05);自然恢復組與脫髓鞘模型組NG2陽性細胞數(shù)組間未見明顯差異(P0.05);雌激素治療組NG2陽性細胞數(shù)量較自然恢復組明顯增多(P0.05),提示給予雌激素治療后少突膠質細胞前體細胞增殖;卵巢去勢組與自然恢復組之間未見明顯差異(P0.05),假手術組與自然恢復組之間未見明顯差異(P0.05)。正常組小鼠腦胼胝體區(qū)可見少量Olig2、GFAP陽性細胞(在胞漿表達),脫髓鞘模型組Olig2、GFAP陽性細胞數(shù)較正常組顯著增多(P0.05),自然恢復組及卵巢去勢組Olig2、GFAP陽性細胞較脫髓鞘組減少(P0.05),但仍比正常組多,給予雌激素治療2周后Olig2、GFAP陽性細胞數(shù)較脫髓鞘顯著減少(P0.05),已接近正常組陽性細胞數(shù)量;假手術組與自然恢復組之間未見明顯差異(P0.05)。5 western blot檢測結果正常組、脫髓鞘模型組、自然恢復組及卵巢去勢組均有NG2少量表達;脫髓鞘模型組較正常組NG2表達增多(P0.05);自然恢復組NG2與脫髓鞘模型組比較未見明顯差異(P0.05);雌激素治療組NG2表達較自然恢復組明顯增多(P0.05);卵巢去勢組NG2表達低于自然恢復組(P0.05)。正常組小鼠腦組織Olig2、GFAP有少量表達,脫髓鞘模型組Olig2、GFAP表達較正常組顯著增多(P0.05),給予雌激素治療后,Olig2、GFAP表達明顯下降(P0.05)。自然恢復組及卵巢去勢組Olig2、GFAP表達也較脫髓鞘組減少(P0.05);卵巢去勢組與自然恢復組比較無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:雌激素對髓鞘再生具有促進作用。其可能的機制是通過促進少突膠質細胞前體細胞的增殖,誘發(fā)少突膠質細胞成熟分化以增強髓鞘再生,并且通過抑制星形膠質細胞增殖來減少膠質瘢痕形成,減少瘢痕屏障,使髓鞘再生能夠順利進行。
【關鍵詞】：Cuprizone 雌激素 脫髓鞘模型 卵巢去勢 MBP GFAP NG2 Olig2
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-20
• 結果20-24
• 附圖24-37
• 附表37-40
• 討論40-43
• 結論43
• 參考文獻43-47
• 綜述 雌激素對中樞神經系統(tǒng)損傷保護的研究現(xiàn)狀47-61
• 參考文獻53-61
• 致謝61-62
• 個人簡歷62-63

【參考文獻】

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1 王嘯;徐又佳;;鐵、雌激素與骨代謝“鐵三角”關系[J];中華骨質疏松和骨礦鹽疾病雜志;2013年04期

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本文編號：711860