本文關(guān)鍵詞：JD增強(qiáng)低劑量紫杉醇對(duì)人胃癌的體內(nèi)外抗腫瘤作用及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： JD 紫杉醇 聯(lián)合治療 人胃癌MKN45細(xì)胞 抗腫瘤

【摘要】：JD是由冬凌草甲素(冬凌草活性成分)的結(jié)構(gòu)改造而來(lái),經(jīng)初步抗腫瘤活性評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)JD對(duì)胃癌細(xì)胞株具有較好的抑制和殺傷作用,但機(jī)制尚不清楚。紫杉醇抗癌療效顯著,然而正常劑量下的紫杉醇長(zhǎng)期用藥會(huì)出現(xiàn)明顯的毒副反應(yīng)和耐藥性,并且隨著給藥劑量的加大,不良反應(yīng)與毒副作用會(huì)更加嚴(yán)重,進(jìn)而限制了紫杉醇在臨床上的應(yīng)用。聯(lián)合用藥是目前臨床治療中一種重要的給藥方案,具有增強(qiáng)單一藥物的療效,降低單一藥物的用藥劑量等優(yōu)勢(shì),因此在胃癌的治療中尋求一種與紫杉醇配伍、高療效、低毒性的聯(lián)合療法意義重大。本論文設(shè)計(jì)將JD與低劑量紫杉醇聯(lián)用,降低紫杉醇的用藥劑量,進(jìn)而達(dá)到減毒增效的目的。具體研究?jī)?nèi)容如下：1.用MTT法體外評(píng)價(jià)JD與紫杉醇分別單獨(dú)用藥對(duì)MKN45細(xì)胞的殺傷效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)JD單獨(dú)用藥和紫杉醇單獨(dú)用藥,都能時(shí)間和濃度依賴性的抑制MKN45細(xì)胞體外增殖。2.用中效分析的方法評(píng)價(jià)JD和低劑量紫杉醇在胃癌MKN45細(xì)胞中的相互作用關(guān)系。發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)濃度下的JD與低劑量紫杉醇聯(lián)合用藥CI值小于1,表明JD和低劑量的紫杉醇聯(lián)合用藥表現(xiàn)出協(xié)同作用,其中紫杉醇(5 nM)和JD (20 μM)聯(lián)用效果較好。3.用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)JD與紫杉醇單獨(dú)用藥和聯(lián)合用藥對(duì)單個(gè)MKN45細(xì)胞體外增殖能力的影響。發(fā)現(xiàn)與二者單獨(dú)用藥相比,JID與紫杉醇聯(lián)合用藥可協(xié)同抑制MKN45細(xì)胞克隆的形成(p0.01),形成的克隆體更小,克隆數(shù)更少。4.通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)藥物作用后的細(xì)胞凋亡率。JD(20μM)、紫杉醇(5μM)及二者聯(lián)用作用于MKN45細(xì)胞的凋亡率分別是(22.65±2.07)%、(13.12±1.75)%、(54.73±3.10)%。與低劑量的紫杉醇單獨(dú)用藥相比,JD與低劑量紫杉醇聯(lián)合用藥可顯著誘導(dǎo)MKN45細(xì)胞凋亡的增加(p0.01)。5.利用Western blotting方法檢測(cè)凋亡相關(guān)的蛋白表達(dá)變化。與單用低劑量紫杉醇相比,JD與低劑量紫杉醇聯(lián)合用藥可使促凋亡蛋白Bax、t-Bid、Puma、 Cleaved-caspase 9和Cleaved-caspase 3的表達(dá)水平明顯上調(diào)(p0.05)；使抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1、PI3Kp110α、p-AKT、Raptor和p-p70S6K的表達(dá)水平顯著下調(diào)(p0.05)。6.利用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)進(jìn)行Bax基因敲除,檢測(cè)Bax在凋亡相關(guān)通路中的作用。發(fā)現(xiàn)兩者協(xié)同抑制MKN45細(xì)胞增殖的能力明顯減弱(p0.05)；另外,加入Caspase 9抑制劑(Z-LEHD-FMK)后,兩者協(xié)同誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用也顯著降低(p0.05)。7.建立胃癌MKN45細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,檢測(cè)JD聯(lián)用低劑量紫杉醇的治療效果。與單用低劑量紫杉醇治療組相比,JD與紫杉醇聯(lián)合用藥組對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)抑制效果更明顯(p0.05),可接近單用紫杉醇正常劑量組的治療效果,而且在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各給藥組裸鼠體重的變化沒(méi)有明顯差異(p0.05)。8.利用HE染色觀察腫瘤組織在不同藥物處理情況下病理學(xué)的變化。HE染色結(jié)果顯示,與單用低劑量紫杉醇治療組相比,JD與低劑量紫杉醇聯(lián)合用藥組的細(xì)胞和組織呈現(xiàn)更多的壞死和萎縮。9.利用TUNEL染色觀察各處理組腫瘤組織中的細(xì)胞凋亡情況。TUNEL染色結(jié)果顯示,與單用低劑量紫杉醇治療組相比,JD與低劑量紫杉醇聯(lián)合組細(xì)胞凋亡的數(shù)量明顯增多。10.利用Western blotting方法檢測(cè)腫瘤組織中凋亡相關(guān)的蛋白表達(dá)變化。Western blotting的結(jié)果顯示,與低劑量紫杉醇單獨(dú)用藥相比,JD與低劑量紫杉醇聯(lián)合用藥后,可明顯促進(jìn)促凋亡蛋白Bax、t-Bid、Cleaved-caspase 9、Puma、和Cleaved-caspase 3的表達(dá)(p0.05)；而抑制抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1、 PI3Kp110、p-AKT、Raptor和p-p70S6K的表達(dá)(p0.05)。本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明冬凌草甲素Oridonin的衍生物JD和低劑量紫杉醇聯(lián)合用藥對(duì)人胃癌MKN45細(xì)胞的體內(nèi)外抗腫瘤作用起協(xié)同作用,并且JD和低劑量紫杉醇發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用是通過(guò)誘導(dǎo)MKN45細(xì)胞凋亡而實(shí)現(xiàn)的。JD和低劑量紫杉醇協(xié)同誘導(dǎo)MKN45細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能是通過(guò)激活線粒體信號(hào)通路,同時(shí)抑制PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路而實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：JD 紫杉醇 聯(lián)合治療 人胃癌MKN45細(xì)胞 抗腫瘤
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文縮略詞表9-12
• 1 前言12-24
• 1.1 胃癌的研究現(xiàn)狀12-13
• 1.2 紫杉醇的抗癌作用與不良反應(yīng)13-14
• 1.2.1 紫杉醇抗癌作用的研究進(jìn)展13-14
• 1.2.2 紫杉醇治療中產(chǎn)生的不良反應(yīng)14
• 1.3 冬凌草甲素Oridonin的抗癌作用研究進(jìn)展14-16
• 1.4 線粒體凋亡通路研究進(jìn)展16-17
• 1.5 PI3K/AKT/mTOR通路研究進(jìn)展17
• 1.6 紫杉醇參與的聯(lián)合治療策略17-18
• 1.7 本課題研究的內(nèi)容18-20
• 參考文獻(xiàn)20-24
• 2 JD增強(qiáng)低劑量紫杉醇對(duì)人胃癌的體內(nèi)外抗腫瘤作用及機(jī)制研究24-63
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑24-30
• 2.1.1 細(xì)胞株和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)用裸鼠24-25
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)用主要試劑25-27
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器27
• 2.1.4 相關(guān)試劑配制27-30
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法30-40
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)30-31
• 2.2.2 細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)31-32
• 2.2.3 克隆形成實(shí)驗(yàn)32-33
• 2.2.4 流式細(xì)胞術(shù)分析33
• 2.2.5 Western blotting33-37
• 2.2.6 siRNA轉(zhuǎn)染37-38
• 2.2.7 建立裸鼠移植瘤模型38-39
• 2.2.8 HE和TUNEL染色39
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39-40
• 2.3 結(jié)果40-58
• 2.3.1 JD單用和PTX單用均能時(shí)間和劑量依賴性抑制MKN45細(xì)胞體外增殖40-41
• 2.3.2 JD與低劑量PTX聯(lián)合用藥協(xié)同抑制MKN45細(xì)胞增殖41-43
• 2.3.3 JD與低劑量PTX聯(lián)合用藥協(xié)同抑制MKN45細(xì)胞克隆形成43-44
• 2.3.4 JD可增強(qiáng)低劑量PTX誘導(dǎo)的MKN45細(xì)胞凋亡44-51
• 2.3.5 JD增強(qiáng)低劑量PTX對(duì)荷瘤裸鼠的抗腫瘤效應(yīng)51-53
• 2.3.6 體內(nèi)模型中,JD增強(qiáng)低劑量PTX誘導(dǎo)的MKN45腫瘤細(xì)胞凋亡53-58
• 2.4 討論58-60
• 2.5 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-63
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及科研情況63-64
• 致謝64

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本文編號(hào)：692087