本文關(guān)鍵詞：以hURAT1為靶點(diǎn)的排尿酸藥物體外細(xì)胞篩選模型的建立和應(yīng)用

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【摘要】：人尿酸鹽陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1(human urate anion transporter 1,hURAT1)是人腎小管重吸收尿酸的主要轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,以hURAT1為靶點(diǎn),篩選hURAT1抑制劑是近年來降尿酸藥物開發(fā)的熱點(diǎn),因此建立hURAT1抑制劑體外細(xì)胞篩選模型具有重要的意義與實(shí)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)首先構(gòu)建了表達(dá)SLC22A1 2(hURAT1編碼基因)的慢病毒載體,感染MDCK細(xì)胞后,通過G41 8篩選出穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株(穩(wěn)轉(zhuǎn)株);隨后采用W estern-blot及免疫熒光方法檢測(cè)目的蛋白的表達(dá),并通過液閃計(jì)數(shù)儀檢測(cè)hURAT1穩(wěn)轉(zhuǎn)株對(duì)[~(14)C]尿酸的攝取作用及hURAT1抑制劑苯溴馬隆、丙磺舒對(duì)[~(14)C]尿酸攝取的抑制效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,hURAT1穩(wěn)轉(zhuǎn)株目的蛋白表達(dá)量為對(duì)照穩(wěn)轉(zhuǎn)株的兩倍,并且吸收尿酸的量明顯大于對(duì)照細(xì)胞(P0.001)。此外,實(shí)驗(yàn)中測(cè)得hURAT1穩(wěn)轉(zhuǎn)株對(duì)尿酸吸收的Km值為365.4μmol/L,苯溴馬隆及丙磺舒對(duì)尿酸吸收的IC_(50)分別為0.1 8μmol/L和66.82μmol/L。以上結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)hURAT1的MDCK細(xì)胞株,并建立了一套hURAT1抑制劑體外準(zhǔn)確篩選和評(píng)價(jià)的方法體系。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院廣東省新藥篩選重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 人尿酸鹽陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體 尿酸 慢病毒載體 MDCK細(xì)胞模型 藥物篩選與評(píng)價(jià) 同位素標(biāo)記法 抑制劑
【基金】：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014A020210013)
【分類號(hào)】：R91
【正文快照】： 高尿酸血癥是人體內(nèi)嘌呤代謝紊亂致使血液中尿酸增多而引起的一種代謝性疾病。近年來我國高尿酸血癥的發(fā)病率不斷升高,血液尿酸過高可引起痛風(fēng)、關(guān)節(jié)組織纖維化甚至壞死、腎功能損傷以及心血管疾病等諸多疾病[1]。目前臨床上常用的降尿酸藥物,如苯溴馬隆、丙磺舒、別嘌醇等,在

【相似文獻(xiàn)】

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號(hào)：609212