發(fā)布時間：2017-07-02 23:16

  本文關(guān)鍵詞：Wnt通路小分子抑制劑BHX抗腫瘤作用機制研究

  更多相關(guān)文章： BHX Wnt 信號通路 β-catenin 細(xì)胞周期 裸鼠移植瘤

【摘要】：目的:Wnt信號通路在腫瘤中起明確作用,在多種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)β-catenin基因突變以及β-catenin蛋白的異常表達,這與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。針對當(dāng)前化療藥物毒性大,副作用多的特點,開發(fā)出具有確定靶點,確定療效的新型靶向抑制劑具有重要意義。BHX就是針對Wnt信號的新型小分子抑制劑,本課題主要目的是圍繞BHX針對以下幾個方面研究其藥效及作用機制:1.觀察Wnt通路抑制劑BHX體內(nèi)外對肺腺腫瘤細(xì)胞和乳腺腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用。2.從Wnt傳導(dǎo)通路角度探討B(tài)HX對惡性腫瘤細(xì)胞抑制作用的機制。3.初步探討B(tài)HX抑制Wnt信號通路機制研究。方法:1.為檢測BHX體外對惡性腫瘤的抑制作用,選取兩種Wnt信號激活的腫瘤細(xì)胞系A(chǔ)549(肺腺癌細(xì)胞)和MCF-7(乳腺癌細(xì)胞)和一種正常肺上皮細(xì)胞Beas-2b,利用MTT比色實驗和二維克隆實驗觀察BHX作用于腫瘤細(xì)胞和正常肺上皮細(xì)胞的增殖抑制差異;裸鼠腹股溝皮下接種A549細(xì)胞構(gòu)造裸鼠移植瘤模型之后隨機分組,連續(xù)給藥21天檢測BHX體內(nèi)藥效;2.為進一步研討B(tài)HX對腫瘤抑制作用機制,我們從BHX對Wnt信號通路抑制作用角度分析,首先利用免疫熒光檢測BHX對Wnt通路關(guān)鍵蛋白β-catenin蛋白定位影響,然后通過Western Blot法檢測BHX對Wnt通路關(guān)鍵蛋白β-catenin核內(nèi)表達量影響以及下游相關(guān)蛋白c-myc、cyclin D1表達影響;流式細(xì)胞儀檢測分析BHX對Wnt通路下游基因所調(diào)控的細(xì)胞周期變化;3.明確BHX作用于Wnt信號通路之后,初步分析BHX對Wnt信號通路的抑制機制。Western Blot分析BHX作用后,腫瘤細(xì)胞內(nèi)上游關(guān)鍵蛋白β-catenin總量變化以及其磷酸化形式p-β-catenin表達水平,PCR分析β-catenin基因轉(zhuǎn)錄水平變化情況;結(jié)果:1)MTT實驗結(jié)果證明BHX在體外對腫瘤細(xì)胞A549和MCF-7具有較強的腫瘤抑制作用,但是對正常肺上皮細(xì)胞Beas-2b細(xì)胞影響較小;克隆形成實驗證明BHX對腫瘤細(xì)胞A549和MCF-7長期抑制效果較明顯;裸鼠移植瘤實驗證明BHX對A549建立的移植瘤模型具有較好的腫瘤抑制作用,且毒性較小。2)免疫熒光實驗分析表明BHX使Wnt信號關(guān)鍵蛋白β-catenin在細(xì)胞核內(nèi)分布較不加藥組減少;Western blot實驗結(jié)果顯示,存在細(xì)胞核內(nèi)的β-catenin蛋白量減少,下游相關(guān)蛋白c-myc和cyclin D1表達量降低;BHX能夠使細(xì)胞周期發(fā)生G1期停滯;3)Western blot實驗結(jié)果表明細(xì)胞內(nèi)總蛋白β-catenin表達量降低,而p-β-catenin蛋白量并沒有增加,反而有點減少;PCR結(jié)果顯示BHX使β-catenin基因轉(zhuǎn)錄減少。結(jié)論:1.Wnt信號通路抑制劑BHX在體內(nèi)外能夠有效抑制腫瘤細(xì)胞生長和增殖,且具有較小的毒性。2.BHX抑制了Wnt信號通路,同時抑制了細(xì)胞核內(nèi)蛋白β-catenin表達,下游相關(guān)蛋白c-myc、cyclin D1表達也減少;細(xì)胞周期停滯在了G1期;3.BHX不是通過上游到下游的級聯(lián)反應(yīng)抑制Wnt信號通路,而是直接作用于β-catenin使其轉(zhuǎn)錄水平減少以達到抑制信號通路的作用。
【關(guān)鍵詞】：BHX Wnt 信號通路 β-catenin 細(xì)胞周期 裸鼠移植瘤
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-18
• 研究現(xiàn)狀、成果11-16
• 研究目的、方法16-18
• 一、BHX體內(nèi)外抗腫瘤抑制作用18-29
• 1.1 對象和材料18-23
• 1.1.1 實驗對象18
• 1.1.2 實驗材料18
• 1.1.3 實驗儀器18-19
• 1.1.4 主要試劑配制19
• 1.1.5 實驗方法19-23
• 1.2 結(jié)果23-26
• 1.2.1 BHX體外抗腫瘤作用研究23-26
• 1.2.2 BHX體內(nèi)抗腫瘤作用研究26
• 1.3 討論26-28
• 1.4 小結(jié)28-29
• 二、BHX通過抑制Wnt信號通路抑制腫瘤細(xì)胞增殖29-42
• 2.1 對象和方法29-36
• 2.1.1 實驗對象29
• 2.1.2 實驗材料29
• 2.1.3 實驗儀器29-30
• 2.1.4 主要試劑配制30-31
• 2.1.5 實驗方法31-36
• 2.2 結(jié)果36-41
• 2.2.1 BHX使A549和MCF-7 細(xì)胞核內(nèi)β-catenin蛋白定位發(fā)生變化36-38
• 2.2.2 BHX使腫瘤細(xì)胞核內(nèi)β-catenin蛋白表達量降低38
• 2.2.3 流式細(xì)胞儀分析BHX對A549和MCF-7 細(xì)胞周期的作用38-39
• 2.2.4 Western blot檢測Wnt通路下游蛋白c-myc和cyclinD1蛋白表達情況39-41
• 2.3 討論41
• 2.4 小結(jié)41-42
• 三、BHX對Wnt信號通路抑制作用機制研究42-53
• 3.1 對象和方法42-46
• 3.1.1 實驗對象42
• 3.1.2 實驗材料42
• 3.1.3 實驗儀器42
• 3.1.4 主要試劑配制42-43
• 3.1.5 實驗方法43-46
• 3.2 結(jié)果46-48
• 3.2.1 BHX導(dǎo)致A549和MCF-7 細(xì)胞內(nèi)β-catenin蛋白總量和p-β-catenin表達降低46-48
• 3.2.2 BHX能夠使細(xì)胞內(nèi)β-catenin基因轉(zhuǎn)錄翻譯減少48
• 3.3 討論48-52
• 3.4 小結(jié)52-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻54-60
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明60-61
• 綜述 Frizzled受體及其抑制劑研究進展61-70
• 綜述參考文獻66-70
• 致謝70-71
• 個人簡歷71

  本文關(guān)鍵詞：Wnt通路小分子抑制劑BHX抗腫瘤作用機制研究

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本文編號：511658