本文關(guān)鍵詞：功能性生物蛋白分子納米化制劑的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究功能性生物蛋白分子在藥物傳遞系統(tǒng)領(lǐng)域的應(yīng)用:1)以胰島素為治療藥物的代表,研究口服胰島素納米粒的制備、穿膜肽(小分子量魚(yú)精蛋白)與胰島素共價(jià)偶聯(lián)物的合成及二者對(duì)糖尿病大鼠血糖的調(diào)節(jié)作用;2)以牛血清白蛋白(BSA)為載體材料的代表,研究BSA載舒尼替尼和姜黃素納米粒的制備工藝,利用聯(lián)合給藥和納米制劑技術(shù)進(jìn)行藥物抑制MCF-7腫瘤增殖能力及其機(jī)制的研究。方法:1.胰島素作為治療藥物的口服納米粒:1)制備胰島素-聚乙二醇-小分子量魚(yú)精蛋白(胰島素-PEG-LMWP)復(fù)合物,以殼聚糖季銨鹽(TMC)包被的聚乳酸-羥基共聚物(PLGA)為載體聚合物材料,按乙酸乙酯-聚乙烯醇(EA-PVA)復(fù)乳法制備載胰島素或胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物納米粒,測(cè)定粒徑、ζ-電位和包封率,并對(duì)納米粒的模擬胃腸液釋藥行為進(jìn)行考察。2)建立大鼠糖尿病模型,將載胰島素或胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物納米粒進(jìn)行口服給藥,監(jiān)測(cè)給藥后大鼠的血糖水平變化情況,考察口服納米粒胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物對(duì)降血糖效果的促進(jìn)作用。2.BSA作為載體材料的納米粒:1)對(duì)BSA納米制劑制備條件進(jìn)行優(yōu)化,考察BSA濃度、藥物濃度、體系pH和反應(yīng)時(shí)間對(duì)納米制劑的影響,選擇最佳的納米粒制備方案。透射電鏡觀(guān)察納米制劑形態(tài)和大小,并進(jìn)行納米制劑的穩(wěn)定性和體外釋藥考察。2)進(jìn)行MTT細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn),研究聯(lián)合給藥和BSA載藥納米制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用。采用激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀考察腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的攝取率,并用流式細(xì)胞儀初步探究藥物抑制腫瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制。3)建立乳腺癌動(dòng)物模型并給藥,監(jiān)測(cè)動(dòng)物體重和腫瘤體積的變化,考察舒尼替尼/姜黃素聯(lián)合給藥和BSA載藥納米制劑在體內(nèi)的抗腫瘤活性。結(jié)果:1.胰島素作為治療藥物的口服納米粒:1)獲得了粒徑為246.9±4.7 nm,水中ζ-電位為-42.2±4.3 mV,包封率達(dá)45.4±2.3%的口服胰島素或胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物納米粒。納米粒含酶模擬胃腸液中的釋藥行為表現(xiàn)為先快后慢兩相釋放特征。2)載胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物的納米�？诜o予糖尿病大鼠后,2 h后可使血糖降低為給藥前初始值的70%左右,給藥后12 h仍可維持血糖水平為給藥前的50%左右,相對(duì)于胰島素皮下注射的藥理學(xué)生物利用度為17.98±5.62%,顯著高于載胰島素納米粒的藥理學(xué)生物利用度(11.24±3.92%)。2.BSA作為載體材料的納米粒:1)當(dāng)BSA濃度為20 mg/mL、舒尼替尼和姜黃素濃度分別為125μg/mL和250μg/mL、體系pH為7且反應(yīng)時(shí)間為4 h時(shí),可獲得BSA納米制劑最佳制備方案,粒徑為103 nm左右,對(duì)舒尼替尼和姜黃素的的包封率超過(guò)90%。在透射電鏡下,BSA納米粒表現(xiàn)為粒徑80-200 nm的近圓形顆粒。體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明BSA納米制劑穩(wěn)定性良好,同時(shí)BSA納米制劑的體外釋藥行為與藥物PBS溶液相當(dāng)。2)MTT細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)表明,聯(lián)合給藥與單獨(dú)舒尼替尼或姜黃素給藥相比可以更好的抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,BSA聯(lián)合載藥納米制劑后將獲得更優(yōu)的抑制增殖能力。聯(lián)合給藥可以增加藥物的入胞量,BSA納米制劑不會(huì)對(duì)藥物入胞產(chǎn)生不良影響。舒尼替尼和姜黃素對(duì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡作用不明顯,但提示有阻斷腫瘤細(xì)胞周期的作用。3)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,聯(lián)合給藥與單獨(dú)舒尼替尼或姜黃素給藥相比具有更好的抗腫瘤增殖能力,使腫瘤體積明顯減小,但使動(dòng)物體重降低較多;BSA聯(lián)合載藥納米粒具有最佳的抗腫瘤效果并減小動(dòng)物體重的降低程度。結(jié)論:1.胰島素作為治療藥物的口服納米粒:1)將胰島素或胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物載入TMC包被的PLGA納米粒中,可使胰島素或胰島素復(fù)合物在模擬胃腸液中穩(wěn)定釋放并維持了較好的降血糖效果,對(duì)促進(jìn)糖尿病大鼠血糖水平的恢復(fù)具有積極作用。2)胰島素復(fù)合物納米粒比胰島素納米粒有更好的降血糖效果。2.BSA作為載體材料的納米粒:1)舒尼替尼/姜黃素聯(lián)合給藥相比舒尼替尼或姜黃素單獨(dú)給藥在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中均具有更好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。2)BSA載藥納米制劑可通過(guò)實(shí)體瘤的高通透性和滯留(EPR)效應(yīng)和BSA長(zhǎng)循環(huán)能力使舒尼替尼/姜黃素聯(lián)合給藥獲得最好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖能力。3)舒尼替尼和姜黃素對(duì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡作用均不明顯,但提示有阻斷腫瘤細(xì)胞周期的作用。
【關(guān)鍵詞】：胰島素 聯(lián)合給藥 納米粒 姜黃素 舒尼替尼 牛血清白蛋白
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R943
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 縮略語(yǔ)12-13
• 前言13-18
• 研究現(xiàn)狀、成果13-17
• 研究目的、方法17-18
• 一、口服胰島素納米粒的制備和表征18-23
• 1.1 對(duì)象和材料18-19
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象18
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料18
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器18
• 1.1.4 主要試劑配制18-19
• 1.2 方法19-20
• 1.2.1 載胰島素或胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物納米粒的制備19
• 1.2.2 載胰島素或胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物納米粒粒徑、ζ-電位和包封率測(cè)定19-20
• 1.2.3 納米粒在模擬胃腸液中的釋放考察20
• 1.3 結(jié)果20-21
• 1.3.1 納米粒的粒徑、ζ-電位和包封率20
• 1.3.2 納米粒在模擬胃腸液中的釋放考察20-21
• 1.4 討論21
• 1.4.1 納米粒的粒徑、ζ-電位和包封率21
• 1.4.2 納米粒在模擬胃腸液中的釋放考察21
• 1.5 小結(jié)21-23
• 二、口服胰島素納米粒動(dòng)物水平降血糖效果評(píng)價(jià)23-27
• 2.1 對(duì)象和材料23
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象23
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料23
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器23
• 2.1.4 主要試劑配制23
• 2.2 方法23-24
• 2.2.1 鏈脲佐菌素誘導(dǎo)大鼠糖尿病模型的建立23
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組23-24
• 2.2.3 載復(fù)合物納米粒的口服藥效學(xué)研究24
• 2.3 結(jié)果24-26
• 2.3.1 鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型的建立24
• 2.3.2 載復(fù)合物納米粒的口服藥效學(xué)研究24-26
• 2.4 討論26
• 2.5 小結(jié)26-27
• 三、BSA載舒尼替尼和姜黃素納米制劑的制備和表征27-36
• 3.1 對(duì)象和材料27-28
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象27
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料27
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器27
• 3.1.4 主要試劑配制27-28
• 3.2 方法28-30
• 3.2.1 舒尼替尼和姜黃素HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制28
• 3.2.2 BSA載姜黃素和舒尼替尼納米制劑的優(yōu)化28-29
• 3.2.3 透射電鏡觀(guān)察BSA納米粒形狀和大小29
• 3.2.4 納米制劑的穩(wěn)定性考察29
• 3.2.5 納米制劑藥物體外釋放實(shí)驗(yàn)考察29-30
• 3.3 結(jié)果30-33
• 3.3.1 舒尼替尼和姜黃素HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制30
• 3.3.2 BSA載姜黃素和舒尼替尼納米制劑的優(yōu)化30-31
• 3.3.3 透射電鏡觀(guān)察BSA納米粒形狀和大小31
• 3.3.4 納米制劑的穩(wěn)定性考察31
• 3.3.5 納米制劑藥物體外釋放實(shí)驗(yàn)考察31-33
• 3.4 討論33-35
• 3.5 小結(jié)35-36
• 四、BSA載舒尼替尼和姜黃素納米制劑細(xì)胞水平評(píng)價(jià)36-47
• 4.1 對(duì)象和材料36-37
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象36
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)材料36
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器36
• 4.1.4 主要試劑配制36-37
• 4.2 方法37-41
• 4.2.1 乳腺癌細(xì)胞MCF-7 細(xì)胞培養(yǎng)37-38
• 4.2.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率38-39
• 4.2.3 激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞對(duì)藥物的攝取39-40
• 4.2.4 流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞對(duì)藥物的攝取40
• 4.2.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞凋亡的影響40-41
• 4.3 結(jié)果41-44
• 4.3.1 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率41-42
• 4.3.2 激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞對(duì)藥物的攝取42
• 4.3.3 流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞對(duì)藥物的攝取42
• 4.3.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞凋亡的影響42-44
• 4.4 討論44-46
• 4.4.1 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率44-45
• 4.4.2 激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞對(duì)藥物的攝取45
• 4.4.3 流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞對(duì)藥物的攝取45
• 4.4.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞凋亡的影響45-46
• 4.5 小結(jié)46-47
• 五、BSA載舒尼替尼和姜黃素聯(lián)合給藥抗腫瘤活性動(dòng)物評(píng)價(jià)47-51
• 5.1 對(duì)象和材料47
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象47
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)材料47
• 5.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器47
• 5.1.4 主要試劑配制47
• 5.2 方法47-48
• 5.2.1 乳腺癌動(dòng)物模型的建立47
• 5.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組47-48
• 5.2.3 實(shí)驗(yàn)步驟48
• 5.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)48
• 5.3 結(jié)果48
• 5.3.1 腫瘤體積的變化48
• 5.3.2 動(dòng)物體重的變化48
• 5.4 討論48-50
• 5.5 小結(jié)50-51
• 六、結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明59-60
• 綜述 基于生物蛋白的納米藥物的研究60-80
• 1. 生物蛋白作為治療藥物在藥物傳遞系統(tǒng)中的應(yīng)用60-63
• 2. 生物蛋白作為納米粒載體材料在藥物傳遞系統(tǒng)中的應(yīng)用63-70
• 3. 生物蛋白作為自組裝納米粒系統(tǒng)在藥物傳遞系統(tǒng)中的應(yīng)用70
• 總結(jié)70-71
• 綜述參考文獻(xiàn)71-80
• 致謝80-82
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷82

  本文關(guān)鍵詞：功能性生物蛋白分子納米化制劑的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：435101