背景:課題組前期研究發(fā)現(xiàn)miR-206和miR-613可通過靶向結(jié)合于OATP1B1mRNA 3'-UTR從而抑制OATP1B1蛋白的表達(dá)。資料報道PXR、CAR、FXR、LXRα等核受體可介導(dǎo)OATP1B1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。采用miRWalk等生物信息學(xué)軟件預(yù)測并篩選出靶向LXRα和OATP1B1 mRNA 3′-UTR的miRNAs,結(jié)果顯示miR-1-3p/206/613與LXRα和OATP1B1 mRNA 3'-UTR高度互補(bǔ)。那么miR-1-3p/206/613是否能通過靶向LXRαmRNA 3'-UTR調(diào)控OATP1B1的表達(dá)確實值得思量;擬或?qū)ATP1B1 mRNA 3'-UTR可呈現(xiàn)直接作用亦令我們關(guān)注;故而系統(tǒng)研究miR-1-3p/206/613對LXRα調(diào)控OATP1B1作用的影響,深入探討其作用機(jī)制可為調(diào)控藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B1的研究增添新內(nèi)容。目的:1.研究核受體LXRα對轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響及其機(jī)制。2.研究miR-1-3p/206/613對LXRα、OATP1B1基因和蛋白表達(dá)的影響以及對OATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響,并深入探索上述影響的分子機(jī)制...

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 生物信息學(xué)分析
    2.1 方法
    2.2 結(jié)果
    2.3 討論
第3章 核受體LXRα對轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
    3.1 材料
        3.1.1 細(xì)胞株及質(zhì)粒
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 HepG2細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.2 主要溶液的配制
        3.2.3 質(zhì)粒構(gòu)建、擴(kuò)增、提取及鑒定
        3.2.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        3.2.5 雙熒光素酶活性檢測
        3.2.6 HepG2細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染條件探索
        3.2.7 核受體LXRα對轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        3.2.8 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 HepG2細(xì)胞形態(tài)學(xué)
        3.3.2 質(zhì)粒鑒定
        3.3.3 HepG2細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染條件
        3.3.4 核受體LXRα對轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
    3.4 討論
第4章 構(gòu)建和評估過表達(dá)或抑制表達(dá)miR-1-3p/206/613的HepG2細(xì)胞模型
    4.1 材料
        4.1.1 細(xì)胞株
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
    4.2 方法
        4.2.1 主要溶液的配制
        4.2.2 HepG2細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.2.3 過表達(dá)或抑制表達(dá)miR-1-3p/206/613對HepG2細(xì)miR-1-3p/206/613 表達(dá)的影響
        4.2.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
    4.3 結(jié)果
    4.4 討論
第5章 miR-1-3p/206/613對LXRα和OATP1B1表達(dá)水平及其轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響
    5.1 材料
        5.1.1 細(xì)胞株
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器設(shè)備
    5.2 方法
        5.2.1 HepG2細(xì)胞的培養(yǎng)
        5.2.2 主要溶液的配制
        5.2.3 miR-1-3p/206/613對HepG2細(xì)胞LXRα和OATP1B1mRNA水平的影響
        5.2.4 miR-1-3p/206/613對HepG2細(xì)胞LXRα和OATP1B1蛋白水平的影響
        5.2.5 miR-1-3p/206/613對HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)瑞舒伐他汀的影響
        5.2.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 過表達(dá)或抑制表達(dá)miR-1-3p/206/613對HepG2細(xì)胞LXRα和OATP1B1mRNA水平的影響
        5.3.2 過表達(dá)或抑制表達(dá)miR-1-3p/206/613對HepG2細(xì)胞LXRα和OATP1B1蛋白水平的影響
        5.3.3 過表達(dá)或抑制表達(dá)miR-1-3p/206/613對HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)瑞舒伐他汀的影響
    5.4 討論
第6章 雙熒光素酶報告基因探究miR-1-3p/206/613作用于LXRα和OATP1B1的機(jī)制
    6.1 材料
        6.1.1 細(xì)胞株
        6.1.2 主要試劑
        6.1.3 主要儀器設(shè)備
    6.2 方法
        6.2.1 HepG2細(xì)胞的培養(yǎng)
        6.2.2 質(zhì)粒構(gòu)建、擴(kuò)增、提取及鑒定
        6.2.3 miRNA-質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        6.2.4 雙熒光素酶活性檢測
        6.2.5 HepG2細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染條件探索
        6.2.6 miR-1-3p/206/613對LXRα和OATP1B1報告基因熒光素酶活性的影響
        6.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
    6.3 結(jié)果
    6.4 討論
第7章 結(jié)論與展望
    7.1 結(jié)論
    7.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：4026765