目的:測定聚乙二醇化重組人促紅素(PEG-EPO)中不同修飾位點(diǎn)的修飾率。方法:將重組促紅素(EPO)及PEG-EPO樣品分別用Lys-C蛋白酶進(jìn)行酶切,在含0.1%三氟乙酸的流動(dòng)相體系下液質(zhì)聯(lián)用測定液質(zhì)肽圖;通過質(zhì)譜鑒定各肽段,在215 nm波長采集的肽圖中積分計(jì)算各肽段的峰面積百分比;根據(jù)EPO及PEG-EPO肽圖中對(duì)應(yīng)肽段峰面積百分比的變化,利用軟件計(jì)算各位點(diǎn)的修飾率。結(jié)果:所建立的方法成功計(jì)算出PEG-EPO中9個(gè)位點(diǎn)的修飾率。該方法還用于3家企業(yè)的產(chǎn)品比較,結(jié)果顯示:3家企業(yè)的產(chǎn)品在PEG修飾方面的總體趨勢一致,但在個(gè)別位點(diǎn)存在修飾率的差異,比如N-末端和Lys45。結(jié)論:該方法可用于PEG-EPO制品的常規(guī)質(zhì)量控制,以及不同企業(yè)產(chǎn)品的比對(duì)研究。

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圖2 修飾率計(jì)算軟件界面

基于上述公式對(duì)各位點(diǎn)的修飾率進(jìn)行擬合，擬合結(jié)果應(yīng)符合殘差和趨近于零。在以上邏輯下，自行設(shè)計(jì)自動(dòng)評(píng)估軟件進(jìn)行擬合計(jì)算。該軟件（內(nèi)部使用）利用ViualFoxpro98編程語言編寫，所用解析方法為最小二乘法，通過順序搜索和結(jié)果分析控制將解析終點(diǎn)誤差控制在2%以內(nèi)，解析結(jié)果與預(yù)設(shè)理....

圖3 3個(gè)廠家的PEG-EPO產(chǎn)品修飾情況比較

采用上述方法，分別對(duì)3個(gè)廠家（每家3批）的產(chǎn)品進(jìn)行了PEG修飾率的測定，結(jié)果見圖3。測定結(jié)果顯示，9批產(chǎn)品在PEG修飾方面的大體趨勢是一致的：N-末端修飾比例最高，其次是Lys52,Lys152修飾比例最低；不同廠家的產(chǎn)品也存在一定的區(qū)別，如廠家3的產(chǎn)品在N-末端的修飾比例相對(duì)更....

本文編號(hào)：4024202