目的：發(fā)現(xiàn)新型調(diào)血脂藥物的先導(dǎo)化合物,進一步探討該化合物體外對脂代謝的調(diào)節(jié)作用及機制。方法：本實驗應(yīng)用中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所國家新藥(微生物)篩選實驗室前期工作中建立的人ABCA1和CLA-1表達上調(diào)劑篩選模型篩選獲得能上調(diào)ABCA1和CLA-1表達的化合物；利用實時熒光定量PCR法和蛋白質(zhì)印跡法研究化合物對目的基因及蛋白的作用；應(yīng)用核受體PPAR激活實驗及PPARa/γ拮抗劑實驗考察化合物對目的基因調(diào)節(jié)的機制；利用巨噬細胞泡沫化的定性及定量實驗、熒光標記的膽固醇外排實驗、前脂肪細胞的誘導(dǎo)分化實驗等考察化合物的體外調(diào)節(jié)脂代謝的作用。結(jié)果：對中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所國家新藥(微生物)篩選實驗室化合物庫中的20000個化合物應(yīng)用人ABCA1和CLA-1表達上調(diào)劑篩選模型進行篩選,發(fā)現(xiàn)化合物E23869上調(diào)ABCA1的活性為196%,E23869上調(diào)CLA-1的活性為198%；RT-PCR和Western blot實驗結(jié)果表明,在小鼠單核巨噬細胞RAW264.7和人正常肝細胞L02中,E23869均能在mRNA及蛋白表達水平上顯著上調(diào)ABCA1、SR-BI/CLA-1及AB...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一章 文獻綜述
    1.1 調(diào)血脂藥物的研究現(xiàn)狀
    1.2 ABCA1概述
        1.2.1 ABCA1的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 ABCA1基因的表達與調(diào)控
        1.2.3 ABCA1的功能
    1.3 SR-BI概述
        1.3.1 SR-BI的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 SR-BI基因的分布及調(diào)控
        1.3.3 SR-BI的功能
    1.4 ABCG1概述
        1.4.1 ABCG1的結(jié)構(gòu)及分布
        1.4.2 ABCG1的功能
第二章 ABCA1和CLA-1表達上調(diào)劑的的高通量篩選
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 細胞培養(yǎng)基
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 耗材
        2.1.5 主要儀器
        2.1.6 主要軟件
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞的培養(yǎng)
        2.2.2 ABCA1和CLA-1表達上調(diào)劑的篩選
        2.2.3 ABCA1和CLA-1表達上調(diào)劑的量效關(guān)系測定
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 應(yīng)用ABCA1和CLA-1表達上調(diào)劑篩選模型的篩選結(jié)果
        2.3.2 化合物E23869在ABCA1和CLA-1表達上調(diào)劑篩選模型中的量效關(guān)系曲線
第三章 化合物E23869的體外活性測定
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞株
        3.1.2 細胞培養(yǎng)基
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 抗體
        3.1.5 Real-time熒光定量引物
        3.1.6 主要儀器
        3.1.7 主要軟件
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞的培養(yǎng)
        3.2.2 MTT實驗
        3.2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測化合物對目的基因蛋白表達水平的影響
        3.2.4 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測化合物對目的基因mRNA表達水平的影響
        3.2.5 化合物對巨噬細胞泡沫化及細胞內(nèi)總膽固醇的影響
        3.2.6 化合物對膽固醇外排實驗的影響
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 化合物E23869的細胞毒性試驗
        3.3.2 化合物E23869對小鼠單核巨噬細胞株Raw264.7目的基因蛋白水平的影響
        3.3.3 化合物E23869對小鼠單核巨噬細胞株Raw264.7目的基因mRNA水平的影響
        3.3.4 化合物E23869對人正常肝細胞株L02目的基因蛋白水平的影響
        3.3.5 化合物E23869對人正常肝細胞株L02目的基因mRNA水平的影響
        3.3.6 化合物E23869對巨噬細胞泡沫化的影響
        3.3.7 化合物E23869對巨噬細胞內(nèi)的膽固醇流出的影響
第四章 活性化合物E23869的機制研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 細胞株
        4.1.2 菌株
        4.1.3 質(zhì)粒
        4.1.4 培養(yǎng)基
        4.1.5 主要試劑
        4.1.6 主要軟件
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細胞的培養(yǎng)
        4.2.2 活性化合物對核受體的激動活性作用
        4.2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測活性化合物對目的基因蛋白表達水平的機制研究
        4.2.4 活性化合物對小鼠前脂肪細胞株3T3-L1的誘導(dǎo)分化實驗
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 活性化合物E23869對PPARα/PPARγ體外轉(zhuǎn)錄激活的作用
        4.3.2 活性化合物E23869對目的基因蛋白表達水平的機制研究
        4.3.3 活性化合物E23869對前脂肪細胞誘導(dǎo)分化的影響
第五章 綜合結(jié)論
    5.1 實驗討論
        5.1.1 靶向RCT的新型藥物的篩選
        5.1.2 E23869的體外分子藥理學(xué)研究
        5.1.3 E23869的機制研究
        5.1.4 展望
    5.2 綜合結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝
個人簡歷



本文編號：3983888