萊菔素是具有抗癌、抗菌、抗氧化等活性的天然產(chǎn)物,但由于其易降解的特性阻礙其成藥。傳統(tǒng)工藝中利用蘿卜硫苷粗酶液與黑芥子酶反應(yīng)生成的萊菔素純度低、產(chǎn)率也不高,本研究利用結(jié)晶的方法純化了穩(wěn)定的底物蘿卜硫苷,且利用樹脂固定了黑芥子酶,從而得到經(jīng)濟(jì)、純度高、收率高的萊菔素。另外,為了提高萊菔素的穩(wěn)定性,本實(shí)驗(yàn)研究了萊菔素的兩種制劑在西林瓶中的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。第一種是無水輔料和萊菔素糊精粉末的混合制劑,通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其大大提高了而萊菔素的穩(wěn)定性,且體外活性實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了其不會(huì)降低萊菔素的抗癌藥效;第二種則是羥丙基-β-環(huán)糊精/萊菔素的包合物制劑,本研究?jī)?yōu)化了包合條件,利用傅里葉紅外光譜、示差量熱掃描法和掃描電鏡三種表征方法證實(shí)了包合物的形成,體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)也表現(xiàn)了包合物可以有效提高萊菔素穩(wěn)定性,體外釋放實(shí)驗(yàn)則模擬了包合物在體內(nèi)的藥物釋放,證明包合物有緩釋效果。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)也證明了包合物的抗癌藥效具有廣譜性和濃度依賴性,接下來利用急性毒性實(shí)驗(yàn)選取了腹腔注射的給藥方式進(jìn)行體內(nèi)活性實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)包合物劑型在提高萊菔素穩(wěn)定性的同時(shí),具有與游離藥相比更小的毒性和更好的抗癌活性。

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１環(huán)氧樹脂固定酶的原理??Ｆｉｇ．?２－１?Ｓｅｌｆ－ｂｏｎｄｉｎｇ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ｅｎｚｙｍｅ?ａｎｄ?ｅｐｏｘｙ?ｒｅｓｉｎ??

物應(yīng)較易于分離，因此價(jià)格低廉且容易保存的固定化載體成為首選。在對(duì)一些載體進(jìn)??行篩選后，本實(shí)驗(yàn)選擇了西安藍(lán)曉公司的ＬＸ－１０００ＥＰ樹脂，該樹脂帶有特殊官能團(tuán)??環(huán)氧丙基，這種官能團(tuán)可以與酶共價(jià)結(jié)合，結(jié)合機(jī)理如圖２－１所示，ＬＸ－１０００ＥＰ樹脂??的環(huán)氧基與酶分子的氨基直接通過....

圖２－２牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線??

對(duì)底物的轉(zhuǎn)換率是否發(fā)生改變，需要先確定固定在樹脂上的酶量。固定后的濾液通過??考馬斯亮藍(lán)法所得５９５?ｎｍ下的吸光度值，經(jīng)過牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線用差減法計(jì)算可??得到酶的固載率，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖２－２所示。??Ｑ．Ｓｎ??■?，?ｙ＾０．（Ｍ？９ｘ＊０．＜ＪＪ９２??Ｒ－－０?＊＞？？....

圖２－３載體量?jī)?yōu)化??－

對(duì)底物的轉(zhuǎn)換率是否發(fā)生改變，需要先確定固定在樹脂上的酶量。固定后的濾液通過??考馬斯亮藍(lán)法所得５９５?ｎｍ下的吸光度值，經(jīng)過牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線用差減法計(jì)算可??得到酶的固載率，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖２－２所示。??Ｑ．Ｓｎ??■?，?ｙ＾０．（Ｍ？９ｘ＊０．＜ＪＪ９２??Ｒ－－０?＊＞？？....

圖２－４酶量的優(yōu)化??

??固定化過程的載酶量會(huì)受到載體量大小的影響，如圖２－３所示，載體量為０．２?ｇ??和０．４?ｇ的固載率較低，但固載率會(huì)隨著載體量的增加而上升，其余三個(gè)載體量體系??的固載率在７０％－８０％之間上下波動(dòng)，組件差異較小，可能是不同批次之間的偶然誤差??引起的，可以認(rèn)為０．６?ｇ載體....

本文編號(hào)：3977304