目的:闡明DNA損傷調(diào)節(jié)自噬相關(guān)蛋白1(DNA damage-regulated autophagy modulator1,DRAM1)在中腦多巴胺能細(xì)胞系MES 23.5的過表達(dá)對魚藤酮毒性損傷的保護(hù)作用,闡明DRAM1在過表達(dá)時對多巴胺能細(xì)胞內(nèi)自噬的影響,進(jìn)而揭示DRAM1在魚藤酮PD模型中影響α-突觸核蛋白(α-synuclein)蓄積以及多巴胺能神經(jīng)元生存的分子機(jī)制。方法:通過對細(xì)胞存活率的檢測選擇合適的魚藤酮濃度和作用時間,構(gòu)建魚藤酮所致帕金森細(xì)胞模型。Western blot法檢測α-突觸核蛋白和DRAM1的蛋白水平,RT-PCR法檢測α-synuclein和DRAM1的m RNA水平。免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察魚藤酮對MES23.5細(xì)胞內(nèi)α-突觸核蛋白聚集的影響。構(gòu)建魚藤酮所致帕金森大鼠模型,檢測模型大鼠中腦部位α-突觸核蛋白和DRAM1的蛋白水平。構(gòu)建DRAM1過表達(dá)模型后使用魚藤酮,觀察細(xì)胞存活率的降低情況以及細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。構(gòu)建DRAM1干擾模型后使用魚藤酮,觀察細(xì)胞存活率的降低情況。魚藤酮作用MES23.5,Western blot法檢測p62和LC3 II蛋白水平變化...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1魚藤酮通過不同的途徑損傷神經(jīng)細(xì)胞[4]

圖1.1魚藤酮通過不同的途徑損傷神經(jīng)細(xì)胞[4]自噬過程及其分子調(diào)控噬是40多年前學(xué)者在電鏡下觀察到的一種細(xì)胞結(jié)構(gòu),然而,直到最近幾漸認(rèn)識到自噬的重要功能,尤其是2005年Science雜志將細(xì)胞自噬評為技熱點(diǎn)研究之首,自噬相關(guān)研究得以迅速進(jìn)展。自噬通過降解細(xì)胞內(nèi)小....

圖1.2自噬障礙與帕金森疾病的關(guān)系[56]

54圖1.2自噬障礙與帕金森疾病的關(guān)系[56]α突觸核蛋白在生理調(diào)節(jié)下會經(jīng)由自噬溶酶體途徑（autophagy-lysosomepathw泛素蛋白酶體途徑（ubiquitin-proteasomesystem，UPS）降解。實(shí)驗(yàn)證明，純化觸核蛋白與分離的溶酶體共培養(yǎng)時，能夠....

圖1.3TP53下游基因DRAM1參與自噬與凋亡過程[61]

TP53下游基因DRAM1參與自噬與凋亡過路中的作用信號通路中的作用學(xué)的預(yù)測和免疫熒光研究，認(rèn)為Dp53和DRAM1可以夠誘導(dǎo)自噬體。Crighton還發(fā)現(xiàn)DRAM1作為一種體通常是在自噬的后期階段發(fā)揮降解給其他啟動自噬的蛋白質(zhì)，也可能是[64,65]。目前，....

圖1.4DRAM1增強(qiáng)溶酶體的酸化[64]

活需要一個合適的pH環(huán)境，目前廣泛認(rèn)為質(zhì)子泵的激活能夠維持溶酶體內(nèi)較低的pH環(huán)境，而ATP依賴的質(zhì)子泵能幫組將氫質(zhì)子轉(zhuǎn)移入細(xì)胞器。所以氫質(zhì)子泵對于維持細(xì)胞器內(nèi)pH環(huán)境的穩(wěn)定有重要意義。溶酶體膜上嵌有ATP依賴的質(zhì)子運(yùn)輸泵，它能將H+泵入溶酶體內(nèi)，使得溶酶體內(nèi)的....

本文編號：3974698