目的肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一種源自肝臟細胞的原發(fā)性惡性腫瘤疾病。具有較高的發(fā)病率和死亡率,發(fā)病機制復(fù)雜且誘病因素較多,傳統(tǒng)治療方法存在預(yù)后差、復(fù)發(fā)率高以及生存期短等問題,嚴重威脅人類的健康生活,因此迫切需要開發(fā)一種治療肝細胞癌的新策略。腫瘤分子靶向治療是目前臨床實踐中一種先進的抗腫瘤策略,通過藥物作用于特定的腫瘤關(guān)鍵分子,抑制腫瘤細胞存活與生長,從而達到臨床治療的目的。受體型酪氨酸激酶(RTKs)是治療腫瘤的經(jīng)典靶點,針對這些靶點而開發(fā)的小分子抑制劑(SMIs)及單克隆抗體(mAbs)取得了很大的進展。研究表明c-Met與Trk激酶與包括肝細胞癌在內(nèi)的多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),靶向抑制這兩種激酶活性可能是治療肝細胞癌的有效途徑。本研究旨在明確HGF/c-Met信號通路與Trk信號通路是否存在協(xié)同作用關(guān)系,進一步研究一種特異靶向c-Met與Trk的小分子化合物L029對肝細胞癌抗腫瘤活性以及初步探究體內(nèi)代謝和組織分布特點,為肝細胞癌提供新的分子靶向治療策略。方法通過細胞實驗研究HGF/c-Met與Trk信號通路之間的關(guān)聯(lián),利用選擇性抑制...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
    1.2 文獻綜述
        1.2.1 肝細胞癌與人類健康
        1.2.2 HGF/c-Met與腫瘤
        1.2.3 Trk家族蛋白與腫瘤
        1.2.4 c-Met與其他RTK存在協(xié)同作用
        1.2.5 c-Met與 Trk抑制劑的研發(fā)現(xiàn)狀
    1.3 本文涉及的研究方法
        1.3.1 實驗研究中涉及的方法
        1.3.2 統(tǒng)計學分析法
    1.4 研究內(nèi)容
第二章 肝細胞癌中c-Met與 Trk信號通路存在協(xié)同作用關(guān)系
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞株及細胞培養(yǎng)
        2.2.2 細胞總蛋白樣制備及Western Blot
        2.2.3 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 HGF共刺激可顯著增強BDNF誘導(dǎo)的Trk信號通路活化
        2.3.2 BDNF共刺激可顯著增強HGF誘導(dǎo)的c-Met信號通路的活化
        2.3.3 抑制c-Met激酶活化能降低BDNF對 TrkB信號通路的活化作用
        2.3.4 抑制Trk激酶活化能降低HGF對 c-Met信號通路的活化作用
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 L029 對裸鼠體內(nèi)肝癌細胞生長及轉(zhuǎn)移的抑制作用
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞株
        3.1.2 主要化合物
        3.1.3 實驗動物
        3.1.4 主要試劑
        3.1.5 主要儀器設(shè)備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 裸鼠肝細胞癌皮下腫瘤模型建立
        3.2.2 裸鼠肝細胞癌原位移植模型建立
        3.2.3 動物分組及給藥方案
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 L029 包合物抑制裸鼠HepG2 肝癌細胞原位腫瘤生長
        3.3.2 L029 包合物抑制MHCC97H細胞肝內(nèi)轉(zhuǎn)移及提高裸鼠生存率
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 C57BL/6 小鼠靜脈給藥L029 組織分布研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 化合物
        4.1.3 主要設(shè)備與儀器
        4.1.4 主要試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 動物分組及樣品的采集制備
        4.2.2 樣品檢測
        4.2.3 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 標準曲線建立
        4.3.2 小鼠血漿中藥物濃度變化
        4.3.3 L029 單次靜脈注射不同時間點小鼠各組織中藥物濃度
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 肝細胞癌原位移植活體熒光成像模型的建立
    5.1 實驗材料
        5.1.1 細胞株及質(zhì)粒
        5.1.2 實驗動物
        5.1.3 主要儀器與設(shè)備
        5.1.4 主要試劑
    5.2 實驗方法
        5.2.1 質(zhì)粒大提與慢病毒包裝
        5.2.3 慢病毒滴度檢測
        5.2.4 細胞系的建立
        5.2.5 螢火蟲螢光素酶表達鑒定
        5.2.6 皮下腫瘤模型的建立
        5.2.7 肝癌原位移植模型的建立及分組給藥
        5.2.8 統(tǒng)計學分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 pCDH-GFP-Luc慢病毒的包裝及滴度測定
        5.3.2 細胞系的建立及鑒定
        5.3.3 細胞自發(fā)熒光強度與細胞數(shù)目線性相關(guān)
        5.3.4 皮下瘤活體成像
        5.3.5 成功建立裸鼠肝細胞癌原位移植模型
    5.4 小結(jié)與討論
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 本文創(chuàng)新點
    6.3 展望
參考文獻
附錄1
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文



本文編號：3948059