目的肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一種源自肝臟細(xì)胞的原發(fā)性惡性腫瘤疾病。具有較高的發(fā)病率和死亡率,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜且誘病因素較多,傳統(tǒng)治療方法存在預(yù)后差、復(fù)發(fā)率高以及生存期短等問(wèn)題,嚴(yán)重威脅人類的健康生活,因此迫切需要開發(fā)一種治療肝細(xì)胞癌的新策略。腫瘤分子靶向治療是目前臨床實(shí)踐中一種先進(jìn)的抗腫瘤策略,通過(guò)藥物作用于特定的腫瘤關(guān)鍵分子,抑制腫瘤細(xì)胞存活與生長(zhǎng),從而達(dá)到臨床治療的目的。受體型酪氨酸激酶(RTKs)是治療腫瘤的經(jīng)典靶點(diǎn),針對(duì)這些靶點(diǎn)而開發(fā)的小分子抑制劑(SMIs)及單克隆抗體(mAbs)取得了很大的進(jìn)展。研究表明c-Met與Trk激酶與包括肝細(xì)胞癌在內(nèi)的多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),靶向抑制這兩種激酶活性可能是治療肝細(xì)胞癌的有效途徑。本研究旨在明確HGF/c-Met信號(hào)通路與Trk信號(hào)通路是否存在協(xié)同作用關(guān)系,進(jìn)一步研究一種特異靶向c-Met與Trk的小分子化合物L(fēng)029對(duì)肝細(xì)胞癌抗腫瘤活性以及初步探究體內(nèi)代謝和組織分布特點(diǎn),為肝細(xì)胞癌提供新的分子靶向治療策略。方法通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究HGF/c-Met與Trk信號(hào)通路之間的關(guān)聯(lián),利用選擇性抑制...

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 肝細(xì)胞癌與人類健康
        1.2.2 HGF/c-Met與腫瘤
        1.2.3 Trk家族蛋白與腫瘤
        1.2.4 c-Met與其他RTK存在協(xié)同作用
        1.2.5 c-Met與 Trk抑制劑的研發(fā)現(xiàn)狀
    1.3 本文涉及的研究方法
        1.3.1 實(shí)驗(yàn)研究中涉及的方法
        1.3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析法
    1.4 研究?jī)?nèi)容
第二章 肝細(xì)胞癌中c-Met與 Trk信號(hào)通路存在協(xié)同作用關(guān)系
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞株及細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞總蛋白樣制備及Western Blot
        2.2.3 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 HGF共刺激可顯著增強(qiáng)BDNF誘導(dǎo)的Trk信號(hào)通路活化
        2.3.2 BDNF共刺激可顯著增強(qiáng)HGF誘導(dǎo)的c-Met信號(hào)通路的活化
        2.3.3 抑制c-Met激酶活化能降低BDNF對(duì) TrkB信號(hào)通路的活化作用
        2.3.4 抑制Trk激酶活化能降低HGF對(duì) c-Met信號(hào)通路的活化作用
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 L029 對(duì)裸鼠體內(nèi)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的抑制作用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 主要化合物
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.4 主要試劑
        3.1.5 主要儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 裸鼠肝細(xì)胞癌皮下腫瘤模型建立
        3.2.2 裸鼠肝細(xì)胞癌原位移植模型建立
        3.2.3 動(dòng)物分組及給藥方案
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 L029 包合物抑制裸鼠HepG2 肝癌細(xì)胞原位腫瘤生長(zhǎng)
        3.3.2 L029 包合物抑制MHCC97H細(xì)胞肝內(nèi)轉(zhuǎn)移及提高裸鼠生存率
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 C57BL/6 小鼠靜脈給藥L029 組織分布研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 化合物
        4.1.3 主要設(shè)備與儀器
        4.1.4 主要試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 動(dòng)物分組及樣品的采集制備
        4.2.2 樣品檢測(cè)
        4.2.3 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
        4.3.2 小鼠血漿中藥物濃度變化
        4.3.3 L029 單次靜脈注射不同時(shí)間點(diǎn)小鼠各組織中藥物濃度
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 肝細(xì)胞癌原位移植活體熒光成像模型的建立
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 細(xì)胞株及質(zhì)粒
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.1.3 主要儀器與設(shè)備
        5.1.4 主要試劑
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 質(zhì)粒大提與慢病毒包裝
        5.2.3 慢病毒滴度檢測(cè)
        5.2.4 細(xì)胞系的建立
        5.2.5 螢火蟲螢光素酶表達(dá)鑒定
        5.2.6 皮下腫瘤模型的建立
        5.2.7 肝癌原位移植模型的建立及分組給藥
        5.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 pCDH-GFP-Luc慢病毒的包裝及滴度測(cè)定
        5.3.2 細(xì)胞系的建立及鑒定
        5.3.3 細(xì)胞自發(fā)熒光強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)目線性相關(guān)
        5.3.4 皮下瘤活體成像
        5.3.5 成功建立裸鼠肝細(xì)胞癌原位移植模型
    5.4 小結(jié)與討論
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 本文創(chuàng)新點(diǎn)
    6.3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄1
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3948059