目的探索依托咪酯對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)Kupffer細(xì)胞(KCs)炎癥反應(yīng)及核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3(NLRP3)/白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)通路的影響。方法用SD大鼠分離和培養(yǎng)KCs,并將細(xì)胞隨機(jī)分為空白組、模型組、對(duì)照組和低、高濃度實(shí)驗(yàn)組。空白組在正常條件下培養(yǎng);模型組給予1μg·mL^-1 LPS刺激3 h;對(duì)照組在模型組的基礎(chǔ)上,給予0.1μmol·mL^-1右美托咪定培養(yǎng)24 h;低、高濃度實(shí)驗(yàn)組在模型組的基礎(chǔ)上,分別給予0.1和0.2μg·mL^-1依托咪酯培養(yǎng)24 h。用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)KCs中極化基因的表達(dá)水平,用Western blotting法檢測(cè)KCs細(xì)胞NLRP3小體相關(guān)蛋白表達(dá),用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-1β和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平。結(jié)果分離KCs的ED1陽性率為(96.32±4.82)%。干預(yù)后,低、高濃度實(shí)驗(yàn)組和空白組、模型組、對(duì)照組的TNF-αmRNA分別為3.72±0.63,2.46±0.59,0.92±0.11,4.73±0.54和3.6...

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【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        動(dòng)物
        藥品與試劑
        儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 SD大鼠KCs細(xì)胞分離和培養(yǎng)
        2.2 用免疫熒光化學(xué)檢測(cè)KCs純度
        2.3 分組與給藥方法
        2.4 用RT-PCR檢測(cè)KCs極化基因水平
        2.5 用Western blotting法檢測(cè)KCs細(xì)胞NLRP3小體相關(guān)蛋白表達(dá)
        2.6 用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-1β和TNF-α水平
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié) 果
    1 SD大鼠分離出的KCs細(xì)胞觀察
    2 KCs中極化基因mRNA表達(dá)水平的差異
    3 KCs中NLRP3相關(guān)蛋白表達(dá)水平的差異
    4 KCs細(xì)胞培養(yǎng)液中炎癥因子水平的差異
討 論



本文編號(hào)：3752214