核受體Nur77（TR3）由即刻早期基因NR4A1編碼,在機體免疫調控,腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要功能。程序性死亡配體1（PD-L1）是一種40 kDa的跨膜蛋白,在多種惡性腫瘤中高度表達,與腫瘤不良預后密切相關。PD-L1與受體PD-1相互作用,抑制NK細胞、T細胞等免疫細胞的活化、增殖,使其功能發(fā)生紊亂和枯竭,從而抑制其對腫瘤的殺傷,使腫瘤發(fā)生免疫逃逸。雖然Nur77和PD-L1都在免疫調節(jié)中發(fā)揮重要作用,但它們之間的關系還沒有得到很好的研究。在本課題中我們重點研究了 Nur77對PD-L1的調控。首先,我們檢測了不同乳腺癌細胞中Nur77和PD-L1的表達,發(fā)現(xiàn)Nur77和PD-L1的表達存在明顯的負相關性。接下來,通過siRNA技術在MDA-MB-231細胞中敲低Nur77,發(fā)現(xiàn)PD-L1的表達明顯上調,說明在乳腺癌細胞中Nur77可以負向調控PD-L1的表達。在HeLa細胞中,利用siRNA敲低或用Crispr技術敲除Nur77,PD-L1的表達和mRNA水平均明顯上調;過表達Nur77,PD-L1的表達顯著下調。為了進一步研究Nur77調控PD-L1的生物學功能,我們開展了自... 

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
英文縮略詞
第一章 前言
    1. 核受體
        1.1 核受體的結構和功能
    2. 孤兒核受體Nur77
        2.1 孤兒核受體Nur77的結構
        2.2 孤兒核受體Nur77的功能
            2.2.1 Nur77的免疫功能
            2.2.2 Nur77在腫瘤中的生物學功能
        2.3 Nur77和腫瘤免疫
            2.3.1 腫瘤免疫
            2.3.2 Nur77和腫瘤免疫密切相關
    3. 程序性死亡配體-1和程序性死亡受體-1
        3.1 程序性死亡配體-1 PD-L1
        3.2 程序性死亡受體PD-1
        3.3 PD-L1/PD-1的信號通路
        3.4 PD-L1/PD-1和腫瘤免疫逃逸
        3.5 基于PD-L1/PD-1的腫瘤免疫策略
        3.6 IFN-γ和PD-L1
    4. 本文研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    1. 實驗材料
        1.1細胞株質粒和菌株
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 主要試劑
            1.3.1 主要實驗試劑
            1.3.2 干擾序列
            1.3.3 引物
        1.4 主要的實驗配方
            1.4.1 SDS-PAGE變性膠
            1.4.2 細胞培養(yǎng)所需的溶液配方
            1.4.3 Western BLot和CO-IP相關溶液配方
            1.4.4 分子克隆所需配方
            1.4.5 稀釋抗體的配方
    2. 實驗方法
        2.1 蛋白印跡法
        2.2 構建重組質粒
            2.2.1 制備DH5a感受態(tài)細菌
            2.2.2 PCR基因擴增
            2.2.3 瓊脂糖凝膠電泳分析
            2.2.4 膠回收
            2.2.5 目的片段和空載體的酶切
            2.2.6 目的片段和載體回收
            2.2.7 酶切后片段的酶連
            2.2.8 重組質粒的轉化
            2.2.9 驗證重組質粒
        2.3 細胞培養(yǎng)涉及的相關實驗方法
            2.3.1 細胞的傳代鋪板凍存和復蘇
            2.3.2 細胞轉染
            2.3.3 細胞計數(shù)法
        2.4 MTT法即NK-92 MI對HeLa細胞的殺傷功能檢測
        2.5 實時熒光定量PCR法
        2.6 核質分離實驗
        2.7 免疫共沉淀實驗
        2.8 統(tǒng)計分析
第三章 結果與分析
    1. 乳腺癌細胞中Nur77對PD-L1的表達調控
        1.1 Nur77和PD-L1在不同乳腺癌細胞中的表達
        1.2 乳腺癌細胞MDA-MB-231中Nur77調控PD-L1的表達
    2. 宮頸癌細胞HeLa中Nur77對PD-L1的表達調控
        2.1 宮頸癌細胞HeLa中Nur77調控PD-L1的表達
        2.2 宮頸癌細胞HeLa中Nur77調控PD-L1的轉錄水平
        2.3 HeLa細胞中敲低Nur77后對NK-92 MI的免疫殺傷功能影響
        2.4 Nur77不影響PD-L1的細胞定位
        2.5 HeLa細胞中Nur77和STAT1發(fā)生相互作用
        2.6 Nur77通過STAT1調控PD-L1
    3. IFN-γ誘導條件下Nur77對PD-L1的表達調控
    4. 配體誘導條件下Nur77對PD-L1表達的調控
第四章 討論
第五章 結論與展望
    1. 結論
    2. 展望
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Identification of a novel splice variant of human PD-L1 mRNA encoding an isoform-lacking Igv-like domain[J]. Xian-hui HE~2 Li-hui XU Yi LIU~3 Key Laboratory of Ministry of Education for Tissue Transplantation and Immunology,Ji-nan University,Guangzhou 510632,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2005(04)



本文編號：3734452