觀察優(yōu)降寧（pargyline）對細胞色素P450 3A（cytochrome P450 3A,CYP3A）亞型CYP3A4/3A7啟動子及增強子區(qū)組蛋白甲基化修飾及其基因轉錄的影響。原代分離培養(yǎng)人胎肝細胞,分為空白對照組、溶媒組、優(yōu)降寧低、中、高(0.6、1.2、2.4 mmol·L^-1)濃度組,Hep G2細胞用0.03、0.3、3 mmol·L^-1優(yōu)降寧處理48 h,觀察組蛋白甲基化修飾對CYP3A4/3A7基因表達的影響;3 mmol·L^-1優(yōu)降寧處理組與對照組的HepG2細胞進行染色質免疫共沉淀,選取特異CYP3A4/3A7啟動子、增強子區(qū)位點設計引物進行實時定量PCR,H3K4me2富集以input百分比表示觀察富集的改變。結果表明,優(yōu)降寧能促進人原代胎肝細胞、HepG2細胞增殖生長,與溶媒對照組相比,優(yōu)降寧(1.2、2.4 mmol·L^-1)顯著升高人原代胎肝細胞CYP3A7表達水平,且優(yōu)降寧(3 mmol·L^-1)顯著升高HepG2細胞CYP3A4/3A7表達水... 

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    藥品與主要試劑
    胎兒肝臟樣本
    原代胎肝細胞的分離培養(yǎng)[7,8]
    Hep G2細胞傳代與培養(yǎng)
    優(yōu)降寧對原代胎肝細胞及Hep G2細胞CYP3A4/3A7表達影響
    優(yōu)降寧對CYP3A4/3A7啟動子及增強子區(qū)組蛋白甲基化修飾及其轉錄的影響
        細胞培養(yǎng)及藥物處理
        細胞的甲醛交聯(lián)與超聲破碎
    免疫復合物的沉淀及洗滌
    解交聯(lián)、蛋白酶消化及DNA分離純化
    CYP3A4/3A7啟動子及增強子區(qū)位點的q PCR檢測
    統(tǒng)計學方法
結果
    1人原代胎肝細胞形態(tài)觀察
    2優(yōu)降寧對原代人胎肝細胞和Hep G2細胞CYP3A4/3A7基因表達的影響
        2.1 Trizol法提取人原代胎肝細胞總RNA的鑒定
        2.2 Pargyline對原代人胎肝細胞和Hep G2細胞CYP3A4/3A7基因表達的影響
    3優(yōu)降寧對CYP3A4/3A7啟動子及增強子區(qū)組蛋白甲基化修飾狀態(tài)的影響
        3.1樣品超聲碎斷DNA片段大小檢測及DNA濃度檢測
        3.2 CYP3A4/3A7啟動子及增強子區(qū)組蛋白甲基化修飾狀態(tài)
討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]異鼠李素對CYP3A4的調(diào)節(jié)及藥物相互作用分析[J]. 丁麗麗,張晶晶,竇薇.  藥學學報. 2012(08)



本文編號：3684007