本文關鍵詞：血小板氧化破碎機制分子靶點的篩選及鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：艾滋病病毒／丙型肝炎病毒免疫相關性血小板減少癥病人(HIV-1/HCV-ITP)的血液中存在一種特殊的抗血小板自身抗體,它與血小板整合素GPIIIa49-66表位結合后,可激活血小板內NADPH氧化酶,產生反應性氧自由基(ROS),啟動補體-非依賴性血小板氧化破碎這一血小板死亡途徑,但是不同病人血液中的這種自身抗體對于血小板的氧化破碎效果并不相同,GPIIIa49-66序列由三個表位組成,分別為GPⅢa49-57 (CAPESIEFP), GPⅢa57-64 (PVSEARVL),和GPIIIa59-66 (SEARVLED),具體是哪個表位對于血小板的氧化破碎起關鍵性的調節(jié)作用目前尚不清楚。針對這一問題,在本研究中,我們通過雜交瘤技術經過動物免疫、細胞融合、雜交瘤細胞的篩選及鑒定、單克隆抗體的純化等步驟制備出一系列針對于GPⅢa49-66三個不同表位的鼠源性單克隆抗體,并且所有抗體均可與人血小板結合,在這些抗體中IE7和5A10可與表位GPⅢa49-57 (CAPESIEFP,命名為P1)結合,1C1和1E5可與表位GPⅢa57-64 (PVSEARVL,命名為P2)結合,4D5和5F8可與表位GPⅢa59-66 (SEARVLED,命名為P3)結合,這些抗體分別與人血小板進行孵育,結果顯示,針對于P1表位的單克隆抗體對血小板的氧化破碎效果高于對照組5-6倍。然而,針對于P2和P3表位的單克隆抗體對血小板的氧化破碎效果僅高于對照組低于2倍。因此,該結果提示,血小板表面整合素GPⅢa49-57 (CAPESIEFP)表位可能對于血小板氧化破碎起關鍵性調節(jié)作用,這一具體的分子靶向研究結果對于臨床上如何溶解已經形成的動脈血栓團塊將具有一定的借鑒意義。
【關鍵詞】：免疫學 血小板減少癥 GPⅢa49-66 血小板氧化破碎 單克隆抗體
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• ~.略詞10-12
• 第一章 前言12-15
• 第二章 實驗材料及方法15-31
• 2.1 實驗儀器及設備15-22
• 2.1.1 實驗儀器15-17
• 2.1.2 實驗耗材17-18
• 2.1.3 實驗試劑18-21
• 2.1.4 實驗動物及細胞來源21-22
• 2.2 實驗方法22-31
• 2.2.1 血小板整合素GPⅢa49-66不同表位單克隆抗體的制備22-28
• 2.2.2 HUVEC細胞培養(yǎng)28
• 2.2.3 考馬斯亮藍染色28
• 2.2.4 Western blotting篩選陽性克隆28-29
• 2.2.5 ELISA分析抗體效價29-30
• 2.2.6 流式細胞儀工作原理30
• 2.2.7 流式細胞儀檢測單克隆抗體與血小板結合性30-31
• 2.2.8 流式細胞儀檢測單克隆抗體對血小板氧化破碎效果31
• 第三章 實驗結果31-41
• 3.1 血小板整合素GPⅢa49-66不同表位單克隆抗體的產生31-33
• 3.2 不同的單克隆抗體可以與GPⅢa49-66不同區(qū)域結合33-34
• 3.3 純化后的單克隆抗體與人血小板的結合性34-37
• 3.4 不同抗體對人血小板氧化破碎效果37-39
• 3.5 不同抗體對小鼠血小板氧化破碎效果39-41
• 第四章 討論41-43
• 第五章 附錄43-46
• 5.1 常用實驗試劑的配制43-45
• 5.2 本人文章發(fā)表45-46
• 附件46-48
• 參考文獻48-54
• 致謝54-55

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