發(fā)布時間：2022-07-08 12:56

　　研究背景:本課題組前期以苯并噁唑酮為母環(huán),設(shè)計合成了一系列4位取代衍生物,經(jīng)過活性初步篩選發(fā)現(xiàn),4-鄰甲基苯磺酰氧基-苯并噁唑酮（MBB）、3-（2-苯基）乙基-4-（2-苯基）氧基苯并噁唑-2-酮（W6I）、4-5’-二甲氨基萘-1’-磺酰氧基-苯并噁唑酮（W3D）具有較好的抗炎活性,但此類化合物作用機制及靶點尚不明確。目的:本論文旨在通過建立LPS誘導(dǎo)的小鼠單核巨噬細胞（RAW264.7）炎癥模型進一步評價此類化合物的抗炎活性,并初步探討優(yōu)選化合物的抗炎作用機制和靶點。方法:第一部分4-取代苯并噁唑酮類衍生物抗炎活性研究1.MTT法測定4-取代苯并噁唑酮類衍生物對RAW264.7細胞活力的影響。2.Griess法測定4-取代苯并噁唑酮類衍生物對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞釋放NO的影響。ELISA法測定4-取代苯并噁唑酮類衍生物對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、COX-2的影響。3.二甲苯致小鼠耳腫脹法研究4-取代苯并噁唑酮類衍生物體內(nèi)抗炎活性。第二部分化合物W3D對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞TLR4-MyD88-NF-κB... 

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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前言
第一部分 4-取代苯并噁唑酮類衍生物抗炎活性研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 細胞、動物及化合物來源
            1.1.2 主要儀器和試劑
        1.2 實驗方法
            1.2.1 細胞培養(yǎng)
            1.2.2 MTT法檢測化合物對RAW264.7細胞活力的影響
            1.2.3 Griess法測定化合物對RAW264.7細胞培養(yǎng)上清中NO的釋放的影響
            1.2.4 ELISA法測定化合物對RAW264.7細胞培養(yǎng)上清中TNF-α、IL-6、IL-1β、COX-2、iNOS釋放量的影響
            1.2.5 二甲苯致小鼠耳腫脹法研究4-取代苯并噁唑酮類衍生物的體內(nèi)抗炎活性
            1.2.6 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 化合物MBB、W6I、W3D對RAW264.7細胞活力的影響
        2.2 化合物MBB、W6I、W3D對RAW264.7細胞培養(yǎng)上清液中NO的釋放的影響
        2.3 化合物MBB、W6I、W3D對RAW264.7細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-6、IL-1 β、iNOS、COX-2釋放量的影響
        2.4 化合物MBB、W6I、W3D對二甲苯所致的小鼠耳腫脹的影響
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 化合物W3D對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞TLR4-MyD88-NF-κB信號通路的調(diào)控作用
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 細胞與化合物來源
            1.1.2 主要儀器與試劑
        1.2 實驗方法
            1.2.1 Westernblot法檢測化合物W3D對TLR4、MyD88、p-IRAK4、NF-κB、p-P38、p-ERK、IL-6、iNOS蛋白表達的影響
            1.2.2 熒光實時定量PCR法檢測化合物W3D對TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表達的影響
            1.2.3 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 化合物W3D對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞TLR4、MyD88、p-IRAK4蛋白表達的影響
        2.2 Westernblot法測定化合物W3D對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞p-P38和p-ERK蛋白表達的影響
        2.3 化合物W3D對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞胞漿胞核NF-κB蛋白表達的影響
        2.4 化合物W3D對炎癥效應(yīng)蛋白IL-6、iNOS表達的影響
        2.5 化合物W3D對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表達的影響
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分 化合物W3D對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞抗炎活性靶點的初探
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 細胞與化合物來源
            1.1.2 主要儀器與試劑
        1.2 實驗方法
            1.2.1 Westernblot法檢測4-取代苯并噁唑酮類化合物對TLR4、p-NF-κB蛋白表達影響
            1.2.2 流式細胞術(shù)檢測化合物W3D對FITC-LPS結(jié)合細胞膜表面受體的競爭性抑制作用
            1.2.3 Griess法檢測TLR4阻斷劑TAK242對化合物W3D的NO抑制活性的影響
            1.2.4 Elisa法檢測TLR4阻斷劑TAK242對化合物W3D的抑制TNF-α、IL-6、IL-1β活性的影響
            1.2.5 Westernbolt法測定TLR4阻斷劑TAK242作用后化合物W3D對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞中TLR4、p-IRAK4、p-NF-κB蛋白表達的影響
            1.2.6 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 Westernblot法測定4-取代苯并噁唑酮類衍生物對TLR4、p-NF-κB蛋白表達影響
        2.2 流式細胞術(shù)檢測化合物W3D對FITC-LPS結(jié)合細胞膜表面受體的競爭性抑制作用
        2.3 TLR4抑制劑TAK242對化合物W3D的NO抑制活性的影響
        2.4 TLR4阻斷劑TAK242對化合物W3D抑制TNF-α、IL-6、IL-1β活性的影響
        2.5 TLR4阻斷劑TAK242對化合物W3D抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞中TLR4、p-IRAK4、p-NF-κB蛋白表達的影響
    3 討論
    4 結(jié)論
第四部分 化合物W3D作用于LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞的RNA-seq測序研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 細胞及化合物來源
            1.1.2 儀器和試劑
        1.2 實驗方法
            1.2.1 總RNA的提取與質(zhì)控
            1.2.2 RNA文庫的構(gòu)建及質(zhì)量檢測
            1.2.3 上機測序
            1.2.4 測序質(zhì)量評估及基因定量
            1.2.5 樣品差異基因的篩選
            1.2.6 樣品差異基因GO富集分析
            1.2.7 樣品差異基因KEGGPathway富集分析
            1.2.8 實時熒光定量PCR驗證差異基因
    2 結(jié)果
        2.1 數(shù)據(jù)比對和質(zhì)控
        2.2 mRNA表達量分析(FPKM)
        2.3 RNA-seq差異表達分析
        2.4 差異基因GO功能分析
        2.5 差異基因KEGGpathway分析
        2.6 差異基因的驗證
    3 討論
    4 結(jié)論
全文結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]炎癥因素與早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎心血管病變相關(guān)性研究[J]. 于水蓮,陶怡,王羿升,黃閏月,劉明嶺,黃成輝,黃文輝.  中華風(fēng)濕病學(xué)雜志. 2016 (11)
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本文編號：3657069