本研究旨在構建具長循環(huán)、主動靶向、還原和p H敏感釋藥等功能于一體的聚合物釋藥系統(tǒng)。首先以4代的聚酰胺-胺樹狀大分子（Polyamidoamine dendrimer,PAMAM）為聚合物骨架材料,通過二硫鍵將聚乙二醇（Polyethylene glycol,PEG）連接在PAMAM的表面,合成不同PEG化程度的PAMAM-SS-PEG（PSSP）聚合物,然后以阿霉素（Doxorubicin,DOX）為抗腫瘤模型藥物制備了PAMAM-SS-PEG/DOX（PSSP/DOX）復合物。通過考察不同聚合物對載藥系統(tǒng)體內外活性的影響,優(yōu)選出PEG化程度最佳的聚合物PSSP32作進一步研究。為了進一步提高PSSP32聚合物的主動靶向作用,增強其抗腫瘤活性,采用雙功能化的HS-PEG5000-COOH偶聯(lián)c RGDy K多肽和PAMAM,合成RGD-PEG-SS-PEG-PAMAM（RGD-PSSP）聚合物,并在此基礎上制備了RGD-PEG-SS-PEG-PAMAM/DOX（RGD-PSSP/DOX）復合物。隨后對復合物的制劑學特性、細胞毒性、細胞攝取、攝取機制以及荷瘤小鼠的體內抗腫瘤活性進行了研... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省211工程院校

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
    1.聚酰胺-胺樹狀大分子的研究進展
        1.1 PAMAM作為基因載體的研究
        1.2 PAMAM作為藥物載體的研究
        1.3 PAMAM作為磁共振成像對比劑的研究
        1.4 PAMAM的生物相容性
    2. 還原敏感納米載藥系統(tǒng)的研究進展
    3. RGD多肽靶向介導作用的研究進展
    4. 納米載藥系統(tǒng)的細胞攝取
    5. 課題設計思路及研究內容
        5.1 本課題的設計思路
        5.2 本文主要研究內容
第一章 PAMAM-SS-PEG聚合物的合成及性質表征
    1 材料與儀器
        1.1 材料
        1.2 儀器
        1.3 細胞
    2 實驗方法
        2.1 PAMAM-SS-PEG聚合物的合成
        2.2 PAMAM-SS-PEG聚合物的結構確證
            2.2.1 PAMAM-SS-PEG的核磁共振氫譜（1H NMR）分析
            2.2.2 PAMAM-SS-PEG的紅外光譜（FTIR）分析
        2.3 粒徑和Zeta電位測定
        2.4 還原敏感性考察
        2.5 溶血毒性考察
        2.6 血清中穩(wěn)定性考察
        2.7 體外長循環(huán)作用考察
        2.8 RBITC-PSSP聚合物胞內轉運考察
            2.8.1 RBITC-PSSP聚合物的合成及表征
            2.8.2 共聚焦顯微鏡觀察RBITC-PSSP聚合物的細胞內轉運
    3 結果與討論
        3.1 PAMAM-SS-PEG聚合物的合成和后處理
        3.2 PAMAM-SS-PEG聚合物的結構確證
            3.2.1 PAMAM-SS-PEG的1H NMR分析
            3.2.2 PAMAM-SS-PEG聚合物的FTIR分析
        3.3 粒徑和電位測定
        3.4 還原敏感性考察
        3.5 溶血毒性考察
        3.6 血清中穩(wěn)定性考察
        3.7 體外長循環(huán)作用考察
        3.8 RBITC-PSSP聚合物胞內轉運考察
            3.8.1 RBITC-PSSP聚合物的合成及表征
            3.8.2 共聚焦顯微鏡觀察RBITC-PSSP聚合物的細胞內轉運
    4 本章小結
第二章 PAMAM-SS-PEG/DOX復合物的制備及評價
    1 材料與儀器
        1.1 材料
        1.2 儀器
    2 實驗方法
        2.1 阿霉素體外分析方法的建立
            2.1.1 阿霉素激發(fā)和發(fā)射波長的確定
            2.1.2 標準曲線的繪制
            2.1.3 精密度
            2.1.4 回收率試驗
        2.2 PSSP/DOX復合物的制備及表征
            2.2.1 投藥量的考察
            2.2.2 載藥時間的考察
            2.2.3 PSSP/DOX復合物的制備
        2.3 PSSP/DOX復合物的表征
            2.3.1 粒徑及Zeta電位測定
            2.3.2 形態(tài)觀察
            2.3.3 載藥量和包封率的測定
        2.4 體外還原及pH敏感釋放行為考察
        2.5 PEG對DOX溶解度的影響
    3 結果與討論
        3.1 阿霉素體外分析方法的建立
            3.1.1 阿霉素激發(fā)和發(fā)射波長的確定
            3.1.2 標準曲線的繪制
            3.1.3 精密度
            3.1.4 回收率試驗
        3.2 PSSP/DOX復合物的制備及表征
            3.2.1 投藥量的考察
            3.2.2 載藥時間的考察
        3.3 PSSP/DOX復合物的表征
            3.3.1 粒徑及Zeta電位測定
            3.3.2 形態(tài)觀察
            3.3.3 包封率和載藥量的測定
        3.4 體外還原及pH敏感釋放行為考察
    4 本章小結
第三章 PAMAM-SS-PEG/DOX體內外抗腫瘤活性及其機制研究
    1 材料與儀器
        1.1 材料
        1.2 儀器
        1.3 細胞
        1.4 實驗動物
    2 實驗方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2 細胞毒性實驗
            2.2.1 MTT法測定原理
            2.2.2 實驗方法
        2.3 細胞攝取實驗
            2.3.1 熒光顯微鏡定性觀察
            2.3.2 流式細胞儀定量分析
        2.4 細胞內藥物分布研究
            2.4.1 共聚焦顯微鏡定性觀察
            2.4.2 細胞內藥物定量測定
        2.5 細胞攝取機制研究
            2.5.1 內吞抑制劑對細胞攝取的影響
            2.5.2 酸性和還原抑制劑對細胞毒性的影響
        2.6 B16 荷瘤小鼠的體內抗腫瘤活性研究
        2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    3. 結果與討論
        3.1 細胞毒性實驗
            3.1.1 空白聚合物的細胞毒性
            3.1.2 PSSP/DOX復合物的細胞毒性
        3.2 細胞攝取實驗
        3.3 細胞內藥物分布研究
            3.3.1 共聚焦顯微鏡定性觀察
            3.3.2 細胞內藥物定量測定
        3.4 細胞攝取機制研究
            3.4.1 內吞抑制劑對細胞攝取的影響
            3.4.2 酸性和還原抑制劑對細胞毒性的影響
        3.5 B16 荷瘤小鼠的體內抗腫瘤活性研究
    4 本章小結
第四章 RGD-PEG-SS-PAMAM/DOX體內外抗腫瘤作用研究
    1 材料與儀器
        1.1 材料
        1.2 儀器
        1.3 細胞
        1.4 實驗動物
    2 實驗方法
        2.1 RGD-PEG-SS-PAMAM聚合物的合成及表征
            2.1.1 RGD-PSSP聚合物的合成
            2.1.2 RGD-PSSP聚合物的結構確證
            2.1.3 粒徑和Zeta電位測定
            2.1.4 溶血毒性考察
            2.1.5 血清中穩(wěn)定性考察
        2.2 RGD-PSSP/DOX復合物的制備及表征
            2.2.1 RGD-PSSP/DOX復合物的制備
            2.2.2 粒徑及Zeta電位測定
            2.2.3 形態(tài)觀察
            2.2.4 包封率和載藥量測定
            2.2.5 體外還原及pH敏感釋放行為考察
        2.3 最佳RGD配體密度的篩選
        2.4 細胞毒性實驗
        2.5 細胞攝取實驗
            2.5.1 熒光顯微鏡定性觀察
            2.5.2 流式細胞儀定量分析
        2.6 細胞攝取機制研究
        2.7 B16 荷瘤小鼠的體內抗腫瘤活性研究
        2.8 腫瘤和各主要器官的病理學觀察
        2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    3 結果與討論
        3.1 RGD-PEG-SS-PAMAM聚合物的合成及表征
            3.1.1 RGD-PSSP聚合物的合成
            3.1.2 RGD-PSSP聚合物的結構確證
            3.1.3 粒徑和Zeta電位測定
            3.1.4 溶血毒性考察
            3.1.5 血清中穩(wěn)定性考察
        3.2 RGD-PSSP/DOX復合物的制備及表征
            3.2.1 復合物的粒徑、Zeta電位、載藥量及包封率測定
            3.2.2 形態(tài)表征
            3.2.3 體外還原及pH敏感釋放行為考察
        3.3 最佳RGD配體密度的篩選
        3.4 細胞毒性實驗
        3.5 細胞攝取實驗
            3.5.1 熒光顯微鏡定性觀察
            3.5.2 流式細胞儀定量分析
        3.6 細胞攝取機制研究
        3.7 B16 荷瘤小鼠的體內抗腫瘤活性研究
        3.8 腫瘤和各主要器官的病理學觀察
    4 本章小結
總結與展望
    1 全文總結
    2 研究展望
        2.1 本研究的創(chuàng)新點
        2.2 工作不足與展望
參考文獻
攻讀博士期間發(fā)表的論文
縮略詞表
致謝



本文編號：3633960