本研究旨在構(gòu)建具長循環(huán)、主動(dòng)靶向、還原和p H敏感釋藥等功能于一體的聚合物釋藥系統(tǒng)。首先以4代的聚酰胺-胺樹狀大分子（Polyamidoamine dendrimer,PAMAM）為聚合物骨架材料,通過二硫鍵將聚乙二醇（Polyethylene glycol,PEG）連接在PAMAM的表面,合成不同PEG化程度的PAMAM-SS-PEG（PSSP）聚合物,然后以阿霉素（Doxorubicin,DOX）為抗腫瘤模型藥物制備了PAMAM-SS-PEG/DOX（PSSP/DOX）復(fù)合物。通過考察不同聚合物對載藥系統(tǒng)體內(nèi)外活性的影響,優(yōu)選出PEG化程度最佳的聚合物PSSP32作進(jìn)一步研究。為了進(jìn)一步提高PSSP32聚合物的主動(dòng)靶向作用,增強(qiáng)其抗腫瘤活性,采用雙功能化的HS-PEG5000-COOH偶聯(lián)c RGDy K多肽和PAMAM,合成RGD-PEG-SS-PEG-PAMAM（RGD-PSSP）聚合物,并在此基礎(chǔ)上制備了RGD-PEG-SS-PEG-PAMAM/DOX（RGD-PSSP/DOX）復(fù)合物。隨后對復(fù)合物的制劑學(xué)特性、細(xì)胞毒性、細(xì)胞攝取、攝取機(jī)制以及荷瘤小鼠的體內(nèi)抗腫瘤活性進(jìn)行了研... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省211工程院校

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
    1.聚酰胺-胺樹狀大分子的研究進(jìn)展
        1.1 PAMAM作為基因載體的研究
        1.2 PAMAM作為藥物載體的研究
        1.3 PAMAM作為磁共振成像對比劑的研究
        1.4 PAMAM的生物相容性
    2. 還原敏感納米載藥系統(tǒng)的研究進(jìn)展
    3. RGD多肽靶向介導(dǎo)作用的研究進(jìn)展
    4. 納米載藥系統(tǒng)的細(xì)胞攝取
    5. 課題設(shè)計(jì)思路及研究內(nèi)容
        5.1 本課題的設(shè)計(jì)思路
        5.2 本文主要研究內(nèi)容
第一章 PAMAM-SS-PEG聚合物的合成及性質(zhì)表征
    1 材料與儀器
        1.1 材料
        1.2 儀器
        1.3 細(xì)胞
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 PAMAM-SS-PEG聚合物的合成
        2.2 PAMAM-SS-PEG聚合物的結(jié)構(gòu)確證
            2.2.1 PAMAM-SS-PEG的核磁共振氫譜（1H NMR）分析
            2.2.2 PAMAM-SS-PEG的紅外光譜（FTIR）分析
        2.3 粒徑和Zeta電位測定
        2.4 還原敏感性考察
        2.5 溶血毒性考察
        2.6 血清中穩(wěn)定性考察
        2.7 體外長循環(huán)作用考察
        2.8 RBITC-PSSP聚合物胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)考察
            2.8.1 RBITC-PSSP聚合物的合成及表征
            2.8.2 共聚焦顯微鏡觀察RBITC-PSSP聚合物的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)
    3 結(jié)果與討論
        3.1 PAMAM-SS-PEG聚合物的合成和后處理
        3.2 PAMAM-SS-PEG聚合物的結(jié)構(gòu)確證
            3.2.1 PAMAM-SS-PEG的1H NMR分析
            3.2.2 PAMAM-SS-PEG聚合物的FTIR分析
        3.3 粒徑和電位測定
        3.4 還原敏感性考察
        3.5 溶血毒性考察
        3.6 血清中穩(wěn)定性考察
        3.7 體外長循環(huán)作用考察
        3.8 RBITC-PSSP聚合物胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)考察
            3.8.1 RBITC-PSSP聚合物的合成及表征
            3.8.2 共聚焦顯微鏡觀察RBITC-PSSP聚合物的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)
    4 本章小結(jié)
第二章 PAMAM-SS-PEG/DOX復(fù)合物的制備及評價(jià)
    1 材料與儀器
        1.1 材料
        1.2 儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 阿霉素體外分析方法的建立
            2.1.1 阿霉素激發(fā)和發(fā)射波長的確定
            2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
            2.1.3 精密度
            2.1.4 回收率試驗(yàn)
        2.2 PSSP/DOX復(fù)合物的制備及表征
            2.2.1 投藥量的考察
            2.2.2 載藥時(shí)間的考察
            2.2.3 PSSP/DOX復(fù)合物的制備
        2.3 PSSP/DOX復(fù)合物的表征
            2.3.1 粒徑及Zeta電位測定
            2.3.2 形態(tài)觀察
            2.3.3 載藥量和包封率的測定
        2.4 體外還原及pH敏感釋放行為考察
        2.5 PEG對DOX溶解度的影響
    3 結(jié)果與討論
        3.1 阿霉素體外分析方法的建立
            3.1.1 阿霉素激發(fā)和發(fā)射波長的確定
            3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
            3.1.3 精密度
            3.1.4 回收率試驗(yàn)
        3.2 PSSP/DOX復(fù)合物的制備及表征
            3.2.1 投藥量的考察
            3.2.2 載藥時(shí)間的考察
        3.3 PSSP/DOX復(fù)合物的表征
            3.3.1 粒徑及Zeta電位測定
            3.3.2 形態(tài)觀察
            3.3.3 包封率和載藥量的測定
        3.4 體外還原及pH敏感釋放行為考察
    4 本章小結(jié)
第三章 PAMAM-SS-PEG/DOX體內(nèi)外抗腫瘤活性及其機(jī)制研究
    1 材料與儀器
        1.1 材料
        1.2 儀器
        1.3 細(xì)胞
        1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
            2.2.1 MTT法測定原理
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)
            2.3.1 熒光顯微鏡定性觀察
            2.3.2 流式細(xì)胞儀定量分析
        2.4 細(xì)胞內(nèi)藥物分布研究
            2.4.1 共聚焦顯微鏡定性觀察
            2.4.2 細(xì)胞內(nèi)藥物定量測定
        2.5 細(xì)胞攝取機(jī)制研究
            2.5.1 內(nèi)吞抑制劑對細(xì)胞攝取的影響
            2.5.2 酸性和還原抑制劑對細(xì)胞毒性的影響
        2.6 B16 荷瘤小鼠的體內(nèi)抗腫瘤活性研究
        2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3. 結(jié)果與討論
        3.1 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
            3.1.1 空白聚合物的細(xì)胞毒性
            3.1.2 PSSP/DOX復(fù)合物的細(xì)胞毒性
        3.2 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)
        3.3 細(xì)胞內(nèi)藥物分布研究
            3.3.1 共聚焦顯微鏡定性觀察
            3.3.2 細(xì)胞內(nèi)藥物定量測定
        3.4 細(xì)胞攝取機(jī)制研究
            3.4.1 內(nèi)吞抑制劑對細(xì)胞攝取的影響
            3.4.2 酸性和還原抑制劑對細(xì)胞毒性的影響
        3.5 B16 荷瘤小鼠的體內(nèi)抗腫瘤活性研究
    4 本章小結(jié)
第四章 RGD-PEG-SS-PAMAM/DOX體內(nèi)外抗腫瘤作用研究
    1 材料與儀器
        1.1 材料
        1.2 儀器
        1.3 細(xì)胞
        1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 RGD-PEG-SS-PAMAM聚合物的合成及表征
            2.1.1 RGD-PSSP聚合物的合成
            2.1.2 RGD-PSSP聚合物的結(jié)構(gòu)確證
            2.1.3 粒徑和Zeta電位測定
            2.1.4 溶血毒性考察
            2.1.5 血清中穩(wěn)定性考察
        2.2 RGD-PSSP/DOX復(fù)合物的制備及表征
            2.2.1 RGD-PSSP/DOX復(fù)合物的制備
            2.2.2 粒徑及Zeta電位測定
            2.2.3 形態(tài)觀察
            2.2.4 包封率和載藥量測定
            2.2.5 體外還原及pH敏感釋放行為考察
        2.3 最佳RGD配體密度的篩選
        2.4 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        2.5 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)
            2.5.1 熒光顯微鏡定性觀察
            2.5.2 流式細(xì)胞儀定量分析
        2.6 細(xì)胞攝取機(jī)制研究
        2.7 B16 荷瘤小鼠的體內(nèi)抗腫瘤活性研究
        2.8 腫瘤和各主要器官的病理學(xué)觀察
        2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果與討論
        3.1 RGD-PEG-SS-PAMAM聚合物的合成及表征
            3.1.1 RGD-PSSP聚合物的合成
            3.1.2 RGD-PSSP聚合物的結(jié)構(gòu)確證
            3.1.3 粒徑和Zeta電位測定
            3.1.4 溶血毒性考察
            3.1.5 血清中穩(wěn)定性考察
        3.2 RGD-PSSP/DOX復(fù)合物的制備及表征
            3.2.1 復(fù)合物的粒徑、Zeta電位、載藥量及包封率測定
            3.2.2 形態(tài)表征
            3.2.3 體外還原及pH敏感釋放行為考察
        3.3 最佳RGD配體密度的篩選
        3.4 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        3.5 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)
            3.5.1 熒光顯微鏡定性觀察
            3.5.2 流式細(xì)胞儀定量分析
        3.6 細(xì)胞攝取機(jī)制研究
        3.7 B16 荷瘤小鼠的體內(nèi)抗腫瘤活性研究
        3.8 腫瘤和各主要器官的病理學(xué)觀察
    4 本章小結(jié)
總結(jié)與展望
    1 全文總結(jié)
    2 研究展望
        2.1 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)
        2.2 工作不足與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀博士期間發(fā)表的論文
縮略詞表
致謝



本文編號：3633960