本文關(guān)鍵詞：CRH相關(guān)肽通過調(diào)節(jié)PLA2的表達(dá)影響腫瘤細(xì)胞遷移和凋亡的機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)是一個含有41個氨基酸的多肽。CRH最初在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn),它由下丘腦釋放作用于垂體,促進(jìn)垂體合成和釋放促腎上腺皮質(zhì)激素(Adrenocorticotropic Hormone,ACTH)參與機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)。隨后,研究人員發(fā)現(xiàn)CRH相關(guān)肽及其受體也廣泛分布于外周并發(fā)揮重要作用。CRH相關(guān)肽主要有4個成員,即CRH,Urocortin(Ucn),Ucn2和Ucn3,它們主要通過CRHR1和CRHR2兩種CRH受體發(fā)揮作用。近年來的研究表明,CRH相關(guān)肽及其受體存在于腫瘤組織中,它們能通過自分泌和旁分泌影響腫瘤的發(fā)生與發(fā)展,但是具體分子機(jī)制還不完全明確。本研究主要討論CRH相關(guān)肽對腫瘤細(xì)胞遷移和凋亡的影響及其具體機(jī)制。第一部分Ucn對肝癌細(xì)胞遷移的影響及其機(jī)制研究Urocortin(Ucn)與CRH有45%的氨基酸序列相似,含有40個氨基酸,是CRH相關(guān)肽的成員。Ucn能與與CRHR1和CRHR2兩種CRH受體結(jié)合參與多種病理生理過程,如炎癥和腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。Ucn能夠調(diào)節(jié)兩種PLA2的表達(dá),即鈣離子非依賴型磷脂酶A2(Ca2+-independent PLA2,i PLA2)和胞質(zhì)型磷脂酶A2(cytosolic PLA2,c PLA2)的表達(dá)。大量的文獻(xiàn)報道,磷脂酶A2(Phospholipase A2,PLA2)也參與炎癥和腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,尤其是i PLA2和c PLA2能夠影響細(xì)胞遷移。本部分研究探討了Ucn通過激活兩種CRH受體對i PLA2和c PLA2表達(dá)的調(diào)節(jié)情況,以及Ucn調(diào)節(jié)通過調(diào)節(jié)PLA2的表達(dá)進(jìn)而影響肝癌細(xì)胞Hep G2和SMMC-7721遷移的機(jī)制。實驗結(jié)果顯示,Ucn能抑制i PLA2表達(dá),這能被CRHR2阻斷劑Anti-30所逆轉(zhuǎn);而Ucn促進(jìn)c PLA2表達(dá),這能被CRHR1阻斷劑Anta所逆轉(zhuǎn)。此外,Ucn能夠抑制細(xì)胞遷移,用BEL抑制或si RNA干擾i PLA2能夠增加Ucn抑制細(xì)胞遷移的效應(yīng);而Ucn單獨(dú)處理或用Anti-30阻斷CRHR2均能促進(jìn)細(xì)胞遷移,用PYR或si RNA干擾c PLA2均能消除此效應(yīng)。SMMC-7721細(xì)胞與Hep G2細(xì)胞不同,它幾乎不表達(dá)CRHR1和CRHR2。因此在實驗中分別將兩種CRH受體轉(zhuǎn)入SMMC-7721細(xì)胞,觀察Ucn的效應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ucn能夠上調(diào)SMMC-7721-R1細(xì)胞的c PLA2表達(dá)而促進(jìn)細(xì)胞遷移的效應(yīng),這種效應(yīng)能被PYR所逆轉(zhuǎn);Ucn能夠下調(diào)SMMC-7721-R2細(xì)胞的i PLA2表達(dá)并抑制細(xì)胞遷移,而BEL增加這種效應(yīng)。此外,實驗還發(fā)現(xiàn)給予NF-κB的抑制劑PDTC能夠逆轉(zhuǎn)Ucn上調(diào)c PLA2表達(dá)的效應(yīng)。因此,NF-κB可能參與Ucn對c PLA2的表達(dá)調(diào)節(jié)過程及促進(jìn)腫瘤遷移的過程。綜上所述,Ucn能夠激活CRHR2下調(diào)i PLA2表達(dá)并抑制細(xì)胞遷移,激活CRHR1上調(diào)c PLA2表達(dá)并促進(jìn)細(xì)胞遷移。第二部分CRH相關(guān)肽影響前列腺癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究研究表明CRH相關(guān)肽能夠影響腫瘤細(xì)胞的生長過程,包括增殖和凋亡等,我們之前的研究結(jié)果表明激活CRHR1和CRHR2能夠通過改變Bcl-2和Bax的蛋白表達(dá)、線粒體膜電位和caspase-9的活性影響RM-1細(xì)胞凋亡。本部分實驗主要探討了CRH相關(guān)肽通過c PLA2介導(dǎo)RM-1細(xì)胞凋亡的效應(yīng)和具體機(jī)制。實驗發(fā)現(xiàn),CRH能濃度依賴性和時間依賴性地增加c PLA2的表達(dá)并能其m RNA的穩(wěn)定性。與此相反,Ucn2能降低c PLA2的表達(dá),但對c PLA2的m RNA穩(wěn)定性沒有影響。將CRHR1或CRHR2轉(zhuǎn)入HEK-293細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),CRH能上調(diào)HEK-293-R1的c PLA2表達(dá),這能被CRHR1的阻斷劑Anta所逆轉(zhuǎn);而Ucn2下調(diào)HEK-293-R2的c PLA2表達(dá),這能被CRHR2的阻斷劑Anti-30所逆轉(zhuǎn)。用si RNA干擾c PLA2能明顯減弱CRH誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和Bcl-2:Bax比值降低,而c PLA2的缺失則能促進(jìn)Ucn2抑制細(xì)胞凋亡,增加Bcl-2:Bax的比值。將c PLA2的上游調(diào)節(jié)因子IL-1β和TNF-α分別敲除后發(fā)現(xiàn),IL-1β缺失能逆轉(zhuǎn)CRH誘導(dǎo)的c PLA2表達(dá)增加,IL-1β參與CRH對c PLA2表達(dá)的調(diào)節(jié)。然而IL-1β和TNF-α均不能逆轉(zhuǎn)Ucn2對c PLA2表達(dá)的下調(diào)。此外,在本部分研究結(jié)果表明,CRH能促進(jìn)c PLA2磷酸化,增加其活性。綜上所述,CRH通過激活CRHR1上調(diào)c PLA2表達(dá)實現(xiàn)促進(jìn)細(xì)胞凋亡的效應(yīng),Ucn2通過激活CRHR2下調(diào)c PLA2表達(dá)實現(xiàn)抑制細(xì)胞凋亡的效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：Ucn CRH相關(guān)肽受體 磷脂酶A2 遷移 NF-κB 凋亡 CRH相關(guān)肽 CRHR 胞質(zhì)型磷脂酶A2 IL-1β
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 第一部分 Urocortin對肝癌細(xì)胞遷移的影響及其機(jī)制研究13-38
• 引言13-15
• 第一節(jié) Ucn調(diào)節(jié)PLA2的表達(dá)并影響肝癌細(xì)胞的遷移15-27
• 1. 實驗材料15-16
• 2. 實驗方法16-20
• 3. 實驗結(jié)果20-25
• 4. 討論25-27
• 第二節(jié) Ucn調(diào)節(jié)PLA2的表達(dá)及影響肝癌細(xì)胞的遷移機(jī)制研究27-37
• 1. 實驗材料27-28
• 2. 實驗方法28-29
• 3. 實驗結(jié)果29-35
• 4. 討論35-37
• 小結(jié)37-38
• 第二部分 CRH相關(guān)肽對前列腺癌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究38-58
• 引言38-40
• 第一節(jié) cPLA_2介導(dǎo)CRH相關(guān)肽對RM-1 細(xì)胞凋亡的作用40-47
• 1. 實驗材料40-41
• 2. 實驗方法41-43
• 3. 實驗結(jié)果43-46
• 4. 討論46-47
• 第二節(jié) CRH相關(guān)肽調(diào)節(jié)cPLA_2表達(dá)的機(jī)制研究47-57
• 1. 實驗材料47-48
• 2. 實驗方法48-49
• 3. 實驗結(jié)果49-55
• 4. 討論55-57
• 小結(jié)57-58
• 參考文獻(xiàn)58-69
• 文獻(xiàn)綜述69-88
• 參考文獻(xiàn)77-88
• 附錄88-89
• 碩士在讀期間發(fā)表文章情況89-90
• 致謝90

【相似文獻(xiàn)】

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1 胡劍江;雷洪濤;侯燕鳴;王毅;;腫瘤細(xì)胞遷移過程的動態(tài)評估方法[J];中國藥理學(xué)通報;2010年01期

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5 祝華s

本文編號：362297