利用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì),篩選新型染色體區(qū)域維持因子（CRM1）共價(jià)靶向抑制劑,并探究其對結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤（ENKTL）細(xì)胞增殖的影響。利用基于片段的藥物設(shè)計(jì)方法在LFS-01母核結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)新型CRM1抑制劑并利用ADME/T、共價(jià)對接等手段進(jìn)行藥物篩選得到小分子化合物L(fēng)FS-829。MALDI-TOF質(zhì)譜分析表明,LFS-829對CRM1具有靶向作用。用CCK-8法檢測LFS-829對ENKTL細(xì)胞系SNK6及HANK-1增殖活性的影響,活細(xì)胞工作站觀察藥物作用下細(xì)胞形態(tài)的變化。利用免疫熒光技術(shù)分析LFS-829對CRM1核輸出功能的影響。通過蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)以及酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)分析不同濃度的LFS-829作用下NF-κB信號通路的變化。借助流式細(xì)胞儀分析檢測細(xì)胞凋亡,并通過蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測凋亡通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。根據(jù)外周血單核淋巴細(xì)胞（PBMC）毒性測試、血小板毒性測試以及小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)對LFS-829進(jìn)行安全性評價(jià)。結(jié)果表明,LFS-829能夠與CRM1蛋白疏水活性口袋的半胱氨酸殘基共價(jià)靶向結(jié)合,并選擇性殺傷SNK6及HANK-1細(xì)胞,... 

【文章來源】：中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,51(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材 料
    1.1 試 劑
    1.2 儀 器
    1.3 細(xì) 胞
2 方 法
    2.1 計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)
    2.2 LFS-829對CRM1作用靶點(diǎn)的分析
    2.3 LFS-829對ENKTL細(xì)胞增殖活性的影響
    2.4 藥物作用下SNK6細(xì)胞形態(tài)的變化
    2.5 LFS-829對CRM1核輸出功能的影響
    2.6 LFS-829對CRM1、NF-κB信號通路及凋亡通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    2.7 LFS-829對NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的影響
    2.8 LFS-829作用下NF-κB通路下游炎癥因子的表達(dá)
    2.9 細(xì)胞凋亡檢測
    2.10 動物急性毒性實(shí)驗(yàn)
    2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
3 結(jié) 果
    3.1 LFS-829通過CRM1疏水活性口袋的半胱氨酸殘基與CRM1共價(jià)結(jié)合
    3.2 LFS-829選擇性殺傷ENKTL細(xì)胞 具有良好的安全性
    3.3 LFS-829通過抑制CRM1蛋白活性下調(diào)NF-κB信號通路
    3.4 LFS-829可以激活細(xì)胞凋亡通路,促使SNK6細(xì)胞發(fā)生凋亡
4 討 論



本文編號：3560473