發(fā)布時(shí)間：2021-12-16 21:21

　　目的1.構(gòu)建EGFR啟動(dòng)子螢光素酶報(bào)告基因A549-EGFR-Luc2和CNE1-EGFR-Luc2穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞模型;2.利用EGFR螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)在轉(zhuǎn)錄水平篩選靶向調(diào)控EGFR抗腫瘤的候選化合物;3.探討靶向調(diào)控EGFR與抗腫瘤活性的關(guān)系,為抗腫瘤藥物設(shè)計(jì)、合成和開發(fā)提供新的策略。方法1、利用Western blot技術(shù)檢測鼻咽癌、乳腺癌、宮頸癌、肺癌及人鼻咽正常上皮細(xì)胞和乳腺正常細(xì)胞的EGFR蛋白表達(dá)水平,確定EGFR高表達(dá)活性的細(xì)胞作為研究對(duì)象。2、利用基因重組技術(shù),構(gòu)建含EGFR啟動(dòng)子的螢光素酶報(bào)告基因重組慢病毒表達(dá)載體,分別感染具有EGFR高表達(dá)活性的A549和CNE1細(xì)胞,獲得穩(wěn)定表達(dá)螢光素酶的A549-EGFR-Luc2和CNE1-EGFR-Luc2細(xì)胞系。3、通過螢光素酶實(shí)活性驗(yàn)對(duì)螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)的關(guān)鍵條件進(jìn)行優(yōu)化,并檢測化療藥物吉非替尼、順鉑、先導(dǎo)化合物大黃酸以及蒽醌化合物4a、B、C、H、I、J、K和N調(diào)控A549-EGFR-Luc2和CNE1-EGFR-Luc2細(xì)胞EGFR啟動(dòng)子的活性。4、MTT法確定化療藥物吉非替尼、順鉑、先導(dǎo)化合物大黃酸以及蒽醌化合物4a、B、... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

載體圖譜

圖 1-2 不同細(xì)胞內(nèi) EGFR 靶點(diǎn)表達(dá)水平，n=3.Fig1-2 The expression of EGFR in various cell lines.3.2 EGFR-promoter-Luc2 螢光素酶重組報(bào)告質(zhì)粒鑒定含有 EGFR 基因啟動(dòng)子片段的 Puc57s-EGFR-P 質(zhì)粒經(jīng) EcoRI 和 HindIII雙酶切后可獲得長度為 1103bp 和 3267bp 的兩段 DNA 片段，因此在圖 1-3lane2 中的 3000bp 和 1200bp 附近可見到兩個(gè)明亮的條帶，與 Puc57s-EGFR-P 質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后的片段大小一致，表明目的序列成功插入且序列大小正確。結(jié)合測序結(jié)果（見圖 1-4），經(jīng)全基因合成得到的 EGFR 啟動(dòng)子序列與預(yù)期設(shè)計(jì)的 EGFR 啟動(dòng)子-1667~-14bp（relative to TSS）的寡核苷酸序列完全一致，表明螢光素酶重組報(bào)告質(zhì)粒構(gòu)建成功。

Puc57s-EGFR-Plasmid表達(dá)質(zhì)粒雙酶切電泳圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]含人雌激素受體β基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因載體的構(gòu)建及脂氧素對(duì)其轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)[J]. 張麗蓉,白劍冰,吳榮鋒,林典超,黃岱薇,戴淞娟,陳瓊?cè)A.  實(shí)用婦產(chǎn)科雜志. 2016(06)
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[3]TNF-α 3’-UTR雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的構(gòu)建及丹參酮類藥物篩選[J]. 韋忠紅,朱智杰,劉玉萍,劉兆國,盛曉波,汪思亮,陶麗,祝娉婷,陳文星,王愛云,陸茵.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2015(01)
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博士論文
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[3]克服耐藥的非可逆EGFR抑制劑的設(shè)計(jì)、合成及生物活性篩選和類藥性化合物庫的構(gòu)建[D]. 陳文騰.浙江大學(xué) 2013
[4]JAK-STAT6信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制劑的高通量篩選及作用機(jī)理的初步探討[D]. 笪宇蓉.天津醫(yī)科大學(xué) 2007
[5]表皮生長因子受體對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性的影響[D]. 卜俊國.第一軍醫(yī)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]克服耐藥的非可逆EGFR抑制劑的設(shè)計(jì)合成和生物活性篩選[D]. 齊維興.浙江大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3538838