本文關(guān)鍵詞：5-硝基-2-3-苯丙胺苯甲酸（NPPB）對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7炎癥因子表達(dá)的作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:5-硝基-2-3-苯丙胺苯甲酸(NPPB)屬芳香族酸類非特異性氯通道阻斷劑,同時(shí)其也是G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)家族中GPR35的激動(dòng)劑,而氯離子通道與G蛋白偶聯(lián)受體均與炎癥有著密切的關(guān)系。近來的研究表明:炎癥因子可激活血管內(nèi)皮細(xì)胞氯電流,并且此電流依賴于Cl C-3氯通道的表達(dá);而氯通道阻斷劑、沉默Cl C-3氯通道蛋白以及Cl C-3基因敲除均可明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子的表達(dá),抑制單核細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞的粘附;Cl C-3基因敲除可抑制炎癥因子誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)的活化,這些均提示Cl C-3氯通道參與了炎癥的過程,其調(diào)控的炎癥通路可能為NF-κB信號(hào)通路。而GPR35在多種免疫細(xì)胞均有表達(dá),與MAPK炎癥通路的激活密切相關(guān),且參與了某些炎癥相關(guān)性疾病的發(fā)生,提示GPR35可能起到促進(jìn)炎癥的作用。NPPB兼有氯通道阻斷劑和GPR35激動(dòng)劑的雙重作用,其在血管內(nèi)炎癥應(yīng)答的作用機(jī)制已有較多的研究報(bào)道,而在巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答中的作用及其機(jī)制究竟如何,目前尚未報(bào)道。因此本課題旨在探討NPPB對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥因子的作用,并明確其作為氯通道阻斷劑和GPR35激動(dòng)劑對(duì)炎癥因子的內(nèi)在調(diào)控機(jī)制。方法:1.Western blot和熒光定量PCR檢測(cè)NPPB對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥因子的作用;2.熒光定量PCR檢測(cè)Cl C家族氯通道蛋白m RNA在巨噬細(xì)胞上的表達(dá)情況;3.免疫熒光法檢測(cè)Cl C-3氯通道蛋白在巨噬細(xì)胞中的分布情況;4.si RNA沉默Cl C-3氯通道蛋白檢測(cè)其對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答的影響;5.Western blot檢測(cè)其它氯通道阻斷劑對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響;6.Western blot檢測(cè)NPPB對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞NF-κB、p38 MAPK、ERK、JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平的影響;7.Western blot檢測(cè)GPR35激動(dòng)劑對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥因子的作用。結(jié)果:1.NPPB可上調(diào)由LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7炎癥因子蛋白質(zhì)、m RNA的表達(dá)。2.Cl C-3氯通道蛋白在RAW264.7細(xì)胞上的表達(dá)明顯高于其它Cl C氯通道亞型。3.沉默Cl C-3氯通道蛋白可抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞TNF-α的表達(dá)。4.不同氯通道阻斷劑對(duì)LPS誘導(dǎo)的TNF-α表達(dá)的影響不同。5.NPPB下調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞NF-κB磷酸化水平。6.GPR35激動(dòng)劑可上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞TNF-α的表達(dá)。7.NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞p38 MAPK磷酸化水平。結(jié)論:1.NPPB在基因、蛋白水平均可上調(diào)由LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7炎癥因子的表達(dá)。2.Cl C-3氯通道可能不是NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞TNF-α表達(dá)的靶點(diǎn)。3.NPPB促進(jìn)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞TNF-α的表達(dá)可能是通過激活GPR35,其調(diào)控通路為p38 MAPK炎癥通路。
【關(guān)鍵詞】：5-硝基-2-3-苯丙胺苯甲酸 腫瘤壞死因子-α 氯通道 G蛋白偶聯(lián)受體35 絲裂原激活的蛋白激酶p38
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-21
• 1. 研究背景9-19
• 1.1 巨噬細(xì)胞、脂多糖與炎癥反應(yīng)的相關(guān)性9-14
• 1.2 氯離子通道與炎癥反應(yīng)的關(guān)系14-17
• 1.3 G蛋白偶聯(lián)受體與炎癥反應(yīng)的關(guān)系17-18
• 1.4 5-硝基23-苯丙胺苯甲酸（NPPB）18-19
• 2．本課題的思路、研究目的和意義19-21
• 材料與方法21-33
• 1 材料21-27
• 1.1 小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.721
• 1.2 主要儀器和設(shè)備21-22
• 1.3 主要藥品和試劑22-27
• 2 方法27-33
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)27
• 2.2 Western blot檢測(cè)目的蛋白表達(dá)27-30
• 2.3 熒光定量PCR檢測(cè)炎癥因子m RNA的表達(dá)30-31
• 2.4 熒光定量PCR檢測(cè)Cl C家族氯通道蛋白m RNA的表達(dá)情況31
• 2.5 免疫熒光檢測(cè)Cl C-3 氯通道蛋白的分布情況31-32
• 2.6 si RNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染下調(diào)Cl C-3 氯通道蛋白表達(dá)32
• 2.7 統(tǒng)計(jì)分析32-33
• 結(jié)果33-45
• 1. NPPB對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7 炎癥因子表達(dá)的作用33-36
• 1.1 NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞的TNF-α蛋白質(zhì)表達(dá)33-34
• 1.2 NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞的TNF-α m RNA表達(dá)34-35
• 1.3 NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞的IL-6 m RNA表達(dá)35-36
• 2. NPPB作為氯通道阻斷劑在LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞炎癥應(yīng)答中的作用36-42
• 2.1 不同氯通道阻斷劑對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞TNF-α的表達(dá)影響有差異36-37
• 2.2 RAW264.7 細(xì)胞Cl C氯通道家族m RNA表達(dá)情況37-38
• 2.3 RAW264.7 細(xì)胞Cl C-3 氯通道蛋白分布情況38-39
• 2.4 沉默Cl C-3 氯通道蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞TNF-α的表達(dá)的作用39-41
• 2.5 NPPB下調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞NF-κB磷酸化水平41-42
• 3. NPPB作為GPR35激動(dòng)劑在LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞炎癥應(yīng)答中的作用42-45
• 3.1 GPR35受體激動(dòng)劑上調(diào)LPS誘導(dǎo)炎癥因子TNF-α的表達(dá)42-43
• 3.2 NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞p38 MAPK磷酸化水平43-44
• 3.3 NPPB對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 炎癥應(yīng)答中MAPK信號(hào)通路其它關(guān)鍵蛋白的作用44-45
• 討論45-49
• 全文結(jié)論49-50
• 總結(jié)與展望50-51
• 參考文獻(xiàn)51-58
• 附錄 主要縮略詞表58-59
• 在校期間發(fā)表論文及科研情況59-60
• 致謝60-61

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