目的:蛋白殘留量是影響酶法工藝生產(chǎn)半合成類抗生素的關(guān)鍵質(zhì)量屬性之一,它不僅影響藥品質(zhì)量,還會威脅人用藥安全。本文嘗試采用微流控芯片毛細管電泳（microfluidic chip-based capillary electrophoresis,MCCE）技術(shù)對青霉素類產(chǎn)品中的蛋白殘留量進行分析和測定,并對MCCE法的影響因素和測定準確性進行了探討。方法:以酶法工藝典型青霉素類藥品-阿莫西林為例,采用Agilent高靈敏蛋白250型試劑盒分別對催化酶蛋白和阿莫西林樣品進行前處理,再將處理后的溶液上樣至蛋白芯片（5 cm×5 cm×0.8 cm）,最后采用Agilent生物分析儀2100進行分析與檢測。該法蛋白分子量檢測范圍為10～250 kDa;分析時間為30 min;樣品量為9μL。結(jié)果:牛血清白蛋白（BSA）在5～500 ng·mL^-1（r=0.99,n=4）的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;蛋白分子量測定準確度約為100.6%（n=4×7）,不同濃度BSA在阿莫西林溶液中得到的加標(biāo)回收標(biāo)準曲線與BSA標(biāo)準曲線之間沒有顯著性差異（P=0.28> 0.05,n=4）,... 

【文章來源】：中國新藥雜志. 2020,29(15)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

阿莫西林酶法工藝合成路線圖

ladder標(biāo)準液用于分子量定位和相對定量，采用納克級測定法(nano labeling protocol)進行溶液前處理和分析測定;阿莫西林供試品溶液、PGA、BSA采用皮克級測定法(pico labeling protocol)進行溶液前處理和分析測定，見圖2。4 溶液的配制

取空白溶劑(2)、ladder、BSA和PGA溶液按照“3”項測定法進行分析，記錄電泳圖譜，結(jié)果顯示在分子量為10～250 k Da范圍內(nèi)，空白溶劑無干擾峰產(chǎn)生。其中，低分子量標(biāo)記蛋白(5 k Da)為試劑盒樣品緩沖液(sample buffer)所含內(nèi)標(biāo)，用于檢測蛋白起始排列定位(見圖3A);ladder分析結(jié)果顯示，7個不同分子量大小的標(biāo)準蛋白(分別為15.0,28.0,46.0,63.0,95.0,150.0和240.0 k Da)之間具有較好的分離度(R≥2.0),ladder標(biāo)準液用于樣品中不同檢出蛋白的定位與相對定量目的(見圖3B);對BSA進行分析結(jié)果顯示，其主要組分蛋白分子量約為69 k Da(純度約為95.1%)，高濃度下可見其還含有一個小組分蛋白(分子量約為133 k Da),BSA用于標(biāo)準曲線的制備和絕對定量目的(見圖3C);對PGA純化液進行分析結(jié)果顯示，其主要含有3種不同分子量的蛋白(約為27,35和58 k Da)，其中分子量為58 k Da的蛋白為主要組分，PGA用于對樣品中殘留蛋白定性目的(見圖3D)。2線性關(guān)系

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3314704