發(fā)布時間：2021-07-23 05:02

　　目的研究二氫楊梅素（dihydromyricetin,DMY）對阿霉素（adriamycin,DOX）在肝癌化療中的增效作用并研究其可能作用機制。方法不同濃度DMY作用肝癌細(xì)胞系MHCC97H后,CCK-8法篩選無毒劑量的DMY,用無毒劑量的DMY聯(lián)合不同濃度DOX作用MHCC97H細(xì)胞,CCK-8法檢測細(xì)胞活力;Hoschest染色法測定細(xì)胞凋亡情況;通過蛋白質(zhì)印跡法測定PTEN、p-AKT、Bcl-2、Cyt-c、P-gp、裂解的caspase-3和裂解的caspase-9;合成特異性靶向PTEN基因的shRNA慢病毒表達載體,建立穩(wěn)定沉默PTEN基因的MHCC97H細(xì)胞,檢測沉默PTEN后是否影響DMY聯(lián)合DOX對肝癌細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用;通過裸鼠皮下腫瘤細(xì)胞注射法建立MHCC97H裸鼠異種移植模型,觀察DMY聯(lián)合DOX給藥對體內(nèi)肝癌生長的影響,Tunel法測定體內(nèi)肝癌細(xì)胞凋亡,Ki-67和PTEN在移植瘤組織中的表達通過免疫組織化學(xué)法測定。結(jié)果無毒劑量的DMY與DOX聯(lián)合應(yīng)用能顯著提高DOX對體外MHCC97H細(xì)胞的生長抑制和凋亡誘導(dǎo)作用;DMY聯(lián)合DOX可上調(diào)體外肝癌MHCC9... 

【文章來源】：沈陽藥科大學(xué)學(xué)報. 2020,37(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

DMY單獨(A)及聯(lián)合DOX(B)對體外MHCC97H細(xì)胞PTEN/PI3K/AKT信號通路蛋白表達的影響

分別用不同濃度DMY(1、2.5、5、10、25、50、100 μmol·L-1)培養(yǎng)MHCC97H細(xì)胞24 h,CCK-8法檢測細(xì)胞活力,結(jié)果表明DMY對體外肝癌細(xì)胞的生長抑制呈濃度依賴關(guān)系(圖1A),10 μmol·L-1的DMY對約90%的細(xì)胞沒有明顯的毒性,表明濃度不超過10 μmol·L-1的DMY對細(xì)胞生長沒有影響,因此本研究作者選擇10 μmol·L-1的DMY進行后續(xù)實驗。如圖1B所示,與單用不同濃度的DOX溶液(0.25、0.5、1、2、5、10、25、50、100 μmol·L-1)相比較,濃度為 10 μmol·L-1 DMY溶液和DOX聯(lián)合應(yīng)用會提高MHCC97H細(xì)胞對DOX的敏感性,DOX與DMY聯(lián)合作用的IC50值和DOX單藥治療的IC50值分別為11.373 μmol·L-1和3.636 μmol·L-1。此外,濃度10 μmol·L-1 DMY溶液聯(lián)合濃度2 μmol·L-1DOX溶液作用后細(xì)胞存活率較單獨使用DOX顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),因此選擇濃度為2 μmol·L-1的DOX溶液用于本研究后續(xù)實驗。3.2 DMY聯(lián)合DOX對MHCC97H細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用

通過Hosches 33342染色的細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察到的形態(tài)學(xué)特征如圖2所示,在熒光顯微鏡下觀察到正常MHCC97H細(xì)胞發(fā)出均勻藍(lán)色熒光,而凋亡細(xì)胞中可見核濃縮和染色體凝集,呈亮藍(lán)色熒光,在熒光顯微鏡下統(tǒng)計每200×視野下的凋亡細(xì)胞比例。對照組細(xì)胞凋亡率為(4.7±1.2)%,濃度10 μmol·L-1的DMY溶液或濃度2 μmol·L-1DOX溶液作用后可見MHCC97H細(xì)胞核發(fā)生波紋狀改變,部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮和邊緣化,誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率分別為(6.3±1.4)%和(13.6±2.4)%,DOX組的細(xì)胞凋亡率較對照組顯著升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。此外,DMY和DOX聯(lián)合治療組可見較多MHCC97H細(xì)胞核發(fā)生裂解并形成凋亡小體,細(xì)胞凋亡率為(22.8±4.1)%,與DOX組相比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),表明DMY聯(lián)合DOX可顯著誘導(dǎo)體外MHCC97H細(xì)胞凋亡。3.3 DMY通過調(diào)控PTEN/PI3K/AKT信號通路增強MHCC97H細(xì)胞對DOX的敏感性


本文編號：3298653