目的:1.觀察自噬水平在睪丸癌細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥中的變化。2.明確自噬在睪丸癌細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥產(chǎn)生中的作用。方法:1.Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)LC3、p62、Atg5、Atg7蛋白表達(dá)。2.mCherry-GFP-LC3B質(zhì)粒轉(zhuǎn)染檢測(cè)細(xì)胞自噬水平。3.透射電子顯微鏡觀察自噬體。4.MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活。5.PI單染法檢測(cè)細(xì)胞死亡。6.集落克隆法檢測(cè)細(xì)胞克隆形成能力。7.shRNA轉(zhuǎn)染對(duì)自噬相關(guān)基因atg5、atg7進(jìn)行干擾,G418篩選培養(yǎng)基建立穩(wěn)轉(zhuǎn)株。8.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)資料的分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示,兩組之間均數(shù)比較采用兩樣本t檢驗(yàn),兩組以上均數(shù)比較采用單因素方差（One-way ANOVA）分析和SNK-q檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)圖表采用GraphPad Prism 5.0繪制,P<0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.使用順鉑處理后,耐順鉑睪丸癌細(xì)胞I-10/DDP中自噬水平增加,而在親代睪丸癌細(xì)胞I-10中自噬水平無明顯變化。Western blotting結(jié)果顯示相比于親代睪丸癌細(xì)胞I-10,耐順鉑睪... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

順鉑處理后I-10和I-10/DDP細(xì)胞內(nèi)LC3和p62的蛋白表達(dá)情況

22圖 2 順鉑處理后 I-10 和 I-10/DDP 細(xì)胞內(nèi)自噬流情況。Fig.2 DDP induced autophagic flux in I-10/DDP cells. (A) Cells were treated with control solvent (Pfor 12 h, and analyzed by transmission electron microscopy (original magnification: ×15000transfected with a mCherry-GFP-LC3B plasmid for 48 h, followed bycontrol solvent (PBS) or DDPfor 12 h. LC3 puncta was observed with confocal fluorescent microscopy (original magnifiexperiments were performed in triplicate.

激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)順鉑與氯喹合用組細(xì)胞內(nèi)紅色和綠色熒光亮點(diǎn)較單用順鉑組細(xì)胞中增加，同時(shí)在紅色熒光和綠色熒光合成的圖像中黃色熒光亮點(diǎn)（自噬體）和紅色熒光亮點(diǎn)（自噬溶酶體）均增加（圖3B）。由此可見，氯喹可以抑制順鉑介導(dǎo)的自噬過程，使細(xì)胞內(nèi)的自噬體產(chǎn)生蓄積。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]兩種方法建立的睪丸癌順鉑耐藥細(xì)胞株的比較[J]. 李貝貝,董淑英,樊宗兵,吳小祥,巫劍峰,童旭輝.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(12)



本文編號(hào)：3296642