尼莫地平作為一種生物堿類鈣通道阻滯劑,常被應(yīng)用于腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血等心腦血管疾病的治療。尼莫地平的主要生理學(xué)活性是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣水平,有選擇性的擴(kuò)張腦血管,以保護(hù)腦細(xì)胞能夠促進(jìn)記憶。尼莫地平對(duì)外周血管具有輕微的擴(kuò)張作用,從而達(dá)到降低血壓的作用。由于尼莫地平能夠抑制Ca²⁺內(nèi)流從而降低細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺濃度,而細(xì)胞TMEM16A氯離子通道活性與細(xì)胞Ca²⁺濃度密切相關(guān),Ca²⁺濃度降低會(huì)導(dǎo)致TMEM16A氯離子通道活性的降低。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)TMEM16A氯離子通道在生物體內(nèi)參與許多重要的生理功能,如上皮液體轉(zhuǎn)運(yùn)、平滑肌收縮、嗅覺(jué)傳導(dǎo)等。因此我們推測(cè)尼莫地平的降壓作用可能與其抑制TMEM16A氯離子通道活性有關(guān)。本研究中,我們利用了穩(wěn)定共轉(zhuǎn)染人TMEM16A和對(duì)鹵族元素高度敏感的綠色熒光蛋白突變體YFP-H148Q/I152L的Fischer大鼠甲狀腺上皮（FRT）細(xì)胞系建立的功能測(cè)定熒光模型（FRT/TMEM16A/YFP-H148Q/I152L）和短路電流實(shí)驗(yàn),分析了尼莫地平對(duì)TMEM16A氯離子... 

【文章來(lái)源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TMEM16A的結(jié)構(gòu)圖

圖 1.2 尼莫地平的分子結(jié)構(gòu)Fig.1.2 Molecular structure of nimodipine滯劑，尼莫地平具有抗缺血、抗血管收縮的研究闡明在機(jī)體出現(xiàn)腦組織缺血、缺氧、中生超載現(xiàn)象，這時(shí)線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)會(huì)釋放大離子的大量聚集會(huì)導(dǎo)致血小板聚集，使血液莫地平的親脂性特性，對(duì)于血腦屏障能夠輕與預(yù)防蛛網(wǎng)膜下腔出血、腦血管痙攣等。W腦出血患者給藥后能夠明顯降低其外周腦水調(diào)節(jié)胞內(nèi)鈣水平，使其能夠正常行使其功能細(xì)胞能夠促進(jìn)記憶；還能輕微擴(kuò)張外周血管目的及意義能夠抑制鈣離子內(nèi)流從而降低平滑肌細(xì)胞內(nèi)

圖 2.1 TMEM16A/CaCC 抑制劑的細(xì)胞熒光測(cè)定模型Fig.2.1 Cellular fluorescence assay of TMEM16A/CaCC inhibitor2.2.3 細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度測(cè)定方法用 25 cm2培養(yǎng)瓶培養(yǎng) HT-29 細(xì)胞，待其長(zhǎng)滿后消化并接種到 96 孔黑板中（密度約為 2×104cells/well），將 96 孔黑板在二氧化碳培養(yǎng)箱中放置培養(yǎng) 48 h 至細(xì)胞匯合。使用外用 PBS 清洗 2 次，之后在每孔中加入 100 μL/孔的 Fluo-4 NW熒光染料加載溶液，放入培養(yǎng)箱中孵育 30 min，之后加入需要濃度的待測(cè)藥物，再置于培養(yǎng)箱中孵育10 min，將96孔黑板移到設(shè)備FLUOstar中繼續(xù)孵育20 min，之后開(kāi)始測(cè)定Fluo-4的熒光值。刺激細(xì)胞內(nèi)Ca2+的釋放的ATP的濃度為200 μM。2.2.4 短路電流測(cè)定方法（1）熒光 FRT-TMEM16A 細(xì)胞短路電流測(cè)定方法將熒光 FRT-TMEM16A 細(xì)胞在 25 cm2的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞長(zhǎng)滿后進(jìn)行消化并接種到 snapwell 插孔中（密度約為 5×105cells/well，插孔內(nèi)加入 500 μL細(xì)胞懸液，孔板內(nèi)加入 1500 μL 培養(yǎng)液），每?jī)商爝M(jìn)行一次換液，連續(xù)培養(yǎng) 7~9

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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