尼莫地平對TMEM16A/CaCC氯離子通道的抑制作用的分子藥理學機制研究
發(fā)布時間：2021-07-22 06:51
尼莫地平作為一種生物堿類鈣通道阻滯劑,常被應用于腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血等心腦血管疾病的治療。尼莫地平的主要生理學活性是調(diào)節(jié)細胞內(nèi)鈣水平,有選擇性的擴張腦血管,以保護腦細胞能夠促進記憶。尼莫地平對外周血管具有輕微的擴張作用,從而達到降低血壓的作用。由于尼莫地平能夠抑制Ca2+內(nèi)流從而降低細胞內(nèi)Ca2+濃度,而細胞TMEM16A氯離子通道活性與細胞Ca2+濃度密切相關,Ca2+濃度降低會導致TMEM16A氯離子通道活性的降低。近年來研究發(fā)現(xiàn)TMEM16A氯離子通道在生物體內(nèi)參與許多重要的生理功能,如上皮液體轉(zhuǎn)運、平滑肌收縮、嗅覺傳導等。因此我們推測尼莫地平的降壓作用可能與其抑制TMEM16A氯離子通道活性有關。本研究中,我們利用了穩(wěn)定共轉(zhuǎn)染人TMEM16A和對鹵族元素高度敏感的綠色熒光蛋白突變體YFP-H148Q/I152L的Fischer大鼠甲狀腺上皮（FRT）細胞系建立的功能測定熒光模型（FRT/TMEM16A/YFP-H148Q/I152L）和短路電流實驗,分析了尼莫地平對TMEM16A氯離子...
【文章來源】：遼寧師范大學遼寧省
【文章頁數(shù)】：55 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
TMEM16A的結(jié)構(gòu)圖
圖 1.2 尼莫地平的分子結(jié)構(gòu)Fig.1.2 Molecular structure of nimodipine滯劑，尼莫地平具有抗缺血、抗血管收縮的研究闡明在機體出現(xiàn)腦組織缺血、缺氧、中生超載現(xiàn)象，這時線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)會釋放大離子的大量聚集會導致血小板聚集，使血液莫地平的親脂性特性，對于血腦屏障能夠輕與預防蛛網(wǎng)膜下腔出血、腦血管痙攣等。W腦出血患者給藥后能夠明顯降低其外周腦水調(diào)節(jié)胞內(nèi)鈣水平，使其能夠正常行使其功能細胞能夠促進記憶；還能輕微擴張外周血管目的及意義能夠抑制鈣離子內(nèi)流從而降低平滑肌細胞內(nèi)
圖 2.1 TMEM16A/CaCC 抑制劑的細胞熒光測定模型Fig.2.1 Cellular fluorescence assay of TMEM16A/CaCC inhibitor2.2.3 細胞內(nèi)鈣離子濃度測定方法用 25 cm2培養(yǎng)瓶培養(yǎng) HT-29 細胞，待其長滿后消化并接種到 96 孔黑板中（密度約為 2×104cells/well），將 96 孔黑板在二氧化碳培養(yǎng)箱中放置培養(yǎng) 48 h 至細胞匯合。使用外用 PBS 清洗 2 次，之后在每孔中加入 100 μL/孔的 Fluo-4 NW熒光染料加載溶液，放入培養(yǎng)箱中孵育 30 min，之后加入需要濃度的待測藥物，再置于培養(yǎng)箱中孵育10 min，將96孔黑板移到設備FLUOstar中繼續(xù)孵育20 min，之后開始測定Fluo-4的熒光值。刺激細胞內(nèi)Ca2+的釋放的ATP的濃度為200 μM。2.2.4 短路電流測定方法（1）熒光 FRT-TMEM16A 細胞短路電流測定方法將熒光 FRT-TMEM16A 細胞在 25 cm2的培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，細胞長滿后進行消化并接種到 snapwell 插孔中（密度約為 5×105cells/well，插孔內(nèi)加入 500 μL細胞懸液，孔板內(nèi)加入 1500 μL 培養(yǎng)液），每兩天進行一次換液，連續(xù)培養(yǎng) 7~9
【參考文獻】：
期刊論文
[1]尼莫地平治療高血壓腦出血的臨床療效分析[J]. 宋偉. 中國醫(yī)藥指南. 2015(22)
[2]尼莫地平治療腦室出血的臨床分析[J]. 秦嶺,閆宏建,王祥業(yè). 陜西醫(yī)學雜志. 2015(01)
[3]尼莫地平對高血壓腦出血治療的研究[J]. 王家泉,毛春. 腦與神經(jīng)疾病雜志. 2006(06)
[4]氯離子通道家族研究進展[J]. 張勇,楊安鋼,周士勝. 醫(yī)學分子生物學雜志. 2004(04)
[5]北京地區(qū)成人慢性便秘整群、分層、隨機流行病學調(diào)查及其相關因素分析[J]. 郭曉峰,柯美云,潘國宗,韓少梅,方秀才,魯素彩,郭慧平. 中華消化雜志. 2002(10)
[6]廣州市居民腸易激綜合征及功能性便秘的流行病學調(diào)查[J]. 尉秀清,陳旻湖,王錦輝,胡品津. 中華內(nèi)科雜志. 2001(08)
[7]腦水腫的研究進展[J]. 朱國行. 國外醫(yī)學(腦血管疾病分冊). 1997(04)
本文編號：3296668
【文章來源】：遼寧師范大學遼寧省
【文章頁數(shù)】：55 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
TMEM16A的結(jié)構(gòu)圖
圖 1.2 尼莫地平的分子結(jié)構(gòu)Fig.1.2 Molecular structure of nimodipine滯劑，尼莫地平具有抗缺血、抗血管收縮的研究闡明在機體出現(xiàn)腦組織缺血、缺氧、中生超載現(xiàn)象，這時線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)會釋放大離子的大量聚集會導致血小板聚集，使血液莫地平的親脂性特性，對于血腦屏障能夠輕與預防蛛網(wǎng)膜下腔出血、腦血管痙攣等。W腦出血患者給藥后能夠明顯降低其外周腦水調(diào)節(jié)胞內(nèi)鈣水平，使其能夠正常行使其功能細胞能夠促進記憶；還能輕微擴張外周血管目的及意義能夠抑制鈣離子內(nèi)流從而降低平滑肌細胞內(nèi)
圖 2.1 TMEM16A/CaCC 抑制劑的細胞熒光測定模型Fig.2.1 Cellular fluorescence assay of TMEM16A/CaCC inhibitor2.2.3 細胞內(nèi)鈣離子濃度測定方法用 25 cm2培養(yǎng)瓶培養(yǎng) HT-29 細胞，待其長滿后消化并接種到 96 孔黑板中（密度約為 2×104cells/well），將 96 孔黑板在二氧化碳培養(yǎng)箱中放置培養(yǎng) 48 h 至細胞匯合。使用外用 PBS 清洗 2 次，之后在每孔中加入 100 μL/孔的 Fluo-4 NW熒光染料加載溶液，放入培養(yǎng)箱中孵育 30 min，之后加入需要濃度的待測藥物，再置于培養(yǎng)箱中孵育10 min，將96孔黑板移到設備FLUOstar中繼續(xù)孵育20 min，之后開始測定Fluo-4的熒光值。刺激細胞內(nèi)Ca2+的釋放的ATP的濃度為200 μM。2.2.4 短路電流測定方法（1）熒光 FRT-TMEM16A 細胞短路電流測定方法將熒光 FRT-TMEM16A 細胞在 25 cm2的培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，細胞長滿后進行消化并接種到 snapwell 插孔中（密度約為 5×105cells/well，插孔內(nèi)加入 500 μL細胞懸液，孔板內(nèi)加入 1500 μL 培養(yǎng)液），每兩天進行一次換液，連續(xù)培養(yǎng) 7~9
【參考文獻】：
期刊論文
[1]尼莫地平治療高血壓腦出血的臨床療效分析[J]. 宋偉. 中國醫(yī)藥指南. 2015(22)
[2]尼莫地平治療腦室出血的臨床分析[J]. 秦嶺,閆宏建,王祥業(yè). 陜西醫(yī)學雜志. 2015(01)
[3]尼莫地平對高血壓腦出血治療的研究[J]. 王家泉,毛春. 腦與神經(jīng)疾病雜志. 2006(06)
[4]氯離子通道家族研究進展[J]. 張勇,楊安鋼,周士勝. 醫(yī)學分子生物學雜志. 2004(04)
[5]北京地區(qū)成人慢性便秘整群、分層、隨機流行病學調(diào)查及其相關因素分析[J]. 郭曉峰,柯美云,潘國宗,韓少梅,方秀才,魯素彩,郭慧平. 中華消化雜志. 2002(10)
[6]廣州市居民腸易激綜合征及功能性便秘的流行病學調(diào)查[J]. 尉秀清,陳旻湖,王錦輝,胡品津. 中華內(nèi)科雜志. 2001(08)
[7]腦水腫的研究進展[J]. 朱國行. 國外醫(yī)學(腦血管疾病分冊). 1997(04)
本文編號：3296668
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/3296668.html
最近更新
教材專著
