發(fā)布時間：2021-07-02 20:57

　　[研究背景與目的]糖原合成激酶-3（GSK-3）是一種多功能絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,可參與腫瘤形成中Wnt/β-catenin、NF-κB等多個信號傳導(dǎo)通路,GSK-3的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位及活性與腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、凋亡及分化過程密切相關(guān),是目前腫瘤研究中重要靶標(biāo)之一[1-2]。pym-5是一種新型1H-吡唑-3-甲酰胺衍生物,體外激酶譜篩選表現(xiàn)出對GSK-3β的強(qiáng)烈選擇性[3]。本研究選擇化合物pym-5作為GSK-3[β的抑制劑對多種腫瘤細(xì)胞類型展開研究,確證其作用方式并闡明其確切的作用機(jī)制。[研究內(nèi)容與結(jié)果]1.本實(shí)驗(yàn)研究首先運(yùn)用小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16、B16BL6對pym-5對腫瘤細(xì)胞分化水平的影響展開研究,通過增殖實(shí)驗(yàn)確認(rèn)了 pym-5及前體AT7519對小鼠黑色素瘤細(xì)胞體外水平的抑制作用,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測pym-5對小鼠黑色素瘤細(xì)胞細(xì)胞周期的影響。2.在確定給藥劑量及時間的基礎(chǔ)上,通過WesternBlot手段觀察pym-5對小鼠黑色素瘤細(xì)胞中GSK-3β的抑制作用,通過免疫熒光觀察到,pym-5可以影響GSK-3β下游β-catenin的入核。3.通過對黑色素瘤中GSK... 

【文章來源】：南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－３?ｐｙｍ－５的前體化合物ＡＴ７５１９??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?ＡＴ７５１９?ｉｓ?ｔｈｅ?ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ?ｃｏｍｐｏｕｎｄ?ｏｆ?ｐｙｍ－５??

?：：Ｃ：ＡＤ？，＾￡ｌ?：?：？??圖１－５化合物ｐｙｍ－５的抗瘤譜篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?１－５?Ｔｈｅ?ＵＳ?Ｎａｔｉｏｎａｌ?Ｃａｎｃｅｒ?Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ?（ＮＣＩ）?Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ?Ｄｒｕｇ?Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ?Ｓｃｒｅｅｎ?ｏｆ??ｐｙｍ－５??以上初步探索結(jié)果表明，化合物ｐｙｍ－５是一種有巨大開發(fā)潛力的化合物，其具體作??用方式及作用機(jī)制尚未有明確研究。結(jié)合抗瘤譜篩選實(shí)驗(yàn)及ＧＥＰＩＡ?（Ｇｅｎｅ?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ?Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ?Ａｎａｌｙｓｉｓ，基因表達(dá)譜分析交互分析工具）及?ＨＰＡ?（Ｔｈｅ?Ｈｕｍａｎ?Ｐｒｏｔｅｉｎ??Ａｔｌａｓ，人類蛋白質(zhì)圖譜數(shù)據(jù)庫）分析結(jié)果

?第二部分ｐｙｍ－５及ＡＴ７５１９在體外對小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖及周期的影響???種化合物對細(xì)胞增殖的作用差異性。統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖所示，結(jié)果顯示，不同劑量的ｐｙｍ－??５、ＡＴ７５１９作用于Ｂ１６細(xì)胞、Ｂ１６ＢＬ６細(xì)胞１２ｈ后，都具有降低細(xì)胞增殖的趨勢，此外??兩種化合物對細(xì)胞增殖的抑制均呈現(xiàn)一定程度上的劑量依賴性。結(jié)果表明：１）化合物??ｐｙｍ－５和ＡＴ７５１９對小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖有抑制作用，隨著濃度的增加，抑制效果增??強(qiáng)，一定程度上呈現(xiàn)劑量依賴性；２）相較于前體化合物ＡＴ９７１９，?ｐｙｍ－５對Ｂ１６細(xì)胞、??Ｂ１６ＢＬ６細(xì)胞的生長抑制作用更為明顯，在１２ｈ即有顯著的抑制作用，ＡＴ７５１９在２４ｈ??才開始有顯著的抑制作用；３）?Ｂ１６細(xì)胞株及Ｂ１６ＢＬ６細(xì)胞株中，ｐｙｍ－５在給藥后低劑??量時增殖情況出現(xiàn)一個小幅度的上升，即低劑量的ｐｙｍ－５呈現(xiàn)一定的促增殖效果，亟??待進(jìn)一步研宄。??ＰＹＭ－５?６ｈ?ＰＹＭ－５?１２ｈ??１．５－．－??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Downregulation of LncRNAH19 and MiR-675 Promotes Migration and Invasion of Human Hepatocellular Carcinoma Cells through AKT/GSK-3β/Cdc25A Signaling Pathway[J]. 呂軍,馬寧,陳錫林,黃曉卉,汪謙.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2014(03)
[2]Glycogen synthase kinase-3β positively regulates the proliferation of human ovarian cancer cells[J]. Qi Cao~1 Xin Lu~1 You-Ji Feng ~1Department of Gynecology,Obstetrics and Gynecology Hospital,Fudan University,Shanghai 200011,China.  Cell Research. 2006(07)



本文編號：3261216