侵襲性真菌感染（invasive fungal infections,IFI）的發(fā)病率和死亡率高居不下,被視為是與結(jié)核病或瘧疾相似規(guī)模的重大公共衛(wèi)生問題。目前臨床上僅有四類抗真菌藥物用于IFI的治療。然而現(xiàn)有的抗真菌藥物存在毒副作用大、生物利用度低、以及藥物與藥物的相互作用等問題。更加值得注意的是,抗真菌藥物的耐藥性問題也愈發(fā)嚴(yán)重,尤其是臨床一線藥物唑類藥物。因此,迫切需要研發(fā)全新作用機(jī)制的抗真菌藥物來解決真菌的耐藥性問題。因此,本課題基于唑類藥物和HDAC抑制劑的作用機(jī)理,設(shè)計(jì)合成了一類全新結(jié)構(gòu)的真菌CYP51/HDAC雙靶點(diǎn)抑制劑,并針對(duì)課題組前期研究發(fā)現(xiàn)的真菌SAP2抑制劑進(jìn)行深入的抗真菌活性研究。一.CYP51/HDAC雙重抑制劑的設(shè)計(jì)、合成和生物活性研究基于唑類藥物和HDAC抑制劑的作用機(jī)理,本課題設(shè)計(jì)并合成了一類含有唑類藥物藥效團(tuán)和HDAC藥效團(tuán)的真菌CYP51/HDAC雙重抑制劑,并對(duì)其抗真菌活性進(jìn)行了深入評(píng)價(jià),對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示,該類化合物對(duì)白念珠菌、熱帶念珠菌、新生隱球菌和克柔念珠菌均有中等到優(yōu)秀的抑制作用(MIC₈₀=64^... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CYP51/HDAC雙重抑制劑設(shè)計(jì)思想

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文第一章CYP51/HDAC雙靶點(diǎn)抑制劑的設(shè)計(jì)、合成和生物活性研究18對(duì)所測(cè)所有菌株都具有優(yōu)秀的抑制作用，表現(xiàn)出廣譜的抗真菌活性�；衔顰10尤其對(duì)白色念珠菌（5314和9770）有強(qiáng)大的抑制作用（MIC80=0.125μg/mL）。當(dāng)哌嗪與異羥肟酸之間連接兩個(gè)苯基時(shí)，化合物活性降低（A11）。在苯基與異羥肟酸之間引入三唑酮的結(jié)構(gòu)后，當(dāng)三唑酮與異羥肟酸之間碳鏈長(zhǎng)度為6、7（化合物A14、A15）時(shí)，化合物活性喪失；進(jìn)一步在碳鏈上引入苯基時(shí)（A12），化合物無(wú)抗真菌活性；而碳鏈通過氧原子鏈接苯基后，化合物抗真菌活性明顯提高（化合物A13的MIC=2-32μg/mL）。（2）B類化合物：當(dāng)用N甲基替代哌嗪后，隨著苯基與異羥肟酸之間含氧碳鏈長(zhǎng)度增加，化合物的活性增強(qiáng)，碳鏈長(zhǎng)度為7時(shí)（B4），活性最好。另外，化合物的N甲基被乙基、丙基或異丙基替代時(shí)，化合物活性下降�；谝陨峡拐婢钚詼y(cè)試結(jié)果，選擇化合物A4和A5對(duì)唑類耐藥的熱帶念珠菌5008和新生隱球菌H99進(jìn)行進(jìn)一步的體內(nèi)外抗真菌活性評(píng)價(jià)和作用機(jī)制驗(yàn)證。首先，測(cè)定化合物A4和A5的體外細(xì)胞毒性。結(jié)果顯示（表3），化合物A4的IC50值為12.6μg/mL，化合物A5的IC50值為5.9μg/mL，表明它們對(duì)人體正常細(xì)胞HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系）表現(xiàn)出相對(duì)較弱的細(xì)胞毒性。因此，可以初步確認(rèn)化合物A4和A5具有選擇性的抗真菌活性。圖2.高活性CYP51/HDAC雙重抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)及MIC80值表3.化合物A4和A5的IC50值CompoundHUVEC(IC50，μg/mL)C.tro.5008(MIC80,μg/mL)C.neo.H99(MIC80,μg/mL)A412.60.52A55.90.50.5

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文第一章CYP51/HDAC雙靶點(diǎn)抑制劑的設(shè)計(jì)、合成和生物活性研究193.3化合物A4和A5的時(shí)間-生長(zhǎng)曲線測(cè)定通過以上MIC80值進(jìn)行初步的體外抗真菌活性評(píng)價(jià)，選取化合物A4和A5進(jìn)行時(shí)間-生長(zhǎng)曲線測(cè)定，考察化合物對(duì)真菌增殖的抑制作用。如圖3A、B所示，化合物A4和A5分別在32ug/mL和16ug/mL濃度下幾乎完全抑制熱帶念珠菌的增殖，并在8ug/mL濃度下抑制真菌的增殖作用均優(yōu)于FLc32ug/mL。化合物A4和A5對(duì)新生隱球菌具有良好的活性。在4μg/mL的濃度下，化合物A4抑制真菌生長(zhǎng)的作用優(yōu)于FLC（圖3C）。同時(shí)，化合物A5在2μg/mL時(shí)比FLC在8μg/mL對(duì)真菌的生長(zhǎng)抑制作用更明顯（圖3D）。該結(jié)果表明，化合物A4和A5呈劑量依賴性的抑制真菌的生長(zhǎng)，并且抑制真菌生長(zhǎng)的作用優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥物FLc。圖3.目標(biāo)化合物A4、A5和FLC作用于C.tro.5008和C.neo.H99的時(shí)間-生長(zhǎng)曲線3.4化合物A4和A5對(duì)熱帶念珠菌5008菌絲形成的抑制作用念珠菌具有酵母相和菌絲相，酵母相到菌絲相的轉(zhuǎn)換是真菌致病的關(guān)鍵毒力因子之一。真菌侵入粘膜組織時(shí)，通常表現(xiàn)為菌絲型，是一種長(zhǎng)形假菌絲。菌絲的形成使得更容易入侵宿主并逃避宿主的防御。真菌形成的菌絲能更好地黏附在粘膜壁上，這使其更易于維持定植。這種定植可導(dǎo)致上皮破裂，使病原體在血液中更快的傳播以及最終侵入深層組織[39-41]。此外，菌絲可以進(jìn)一步形成生物被膜，對(duì)其致病性至關(guān)重要，是抗真菌治療中產(chǎn)生耐藥性的重要原因[42]。因此，進(jìn)一


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