近年來,惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率居高不下,影響了人們的身體健康。盡管目前有很多治療惡性腫瘤的方法,比如手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療,但是均存在很多不足,而藥物靶向治療由于其特異性強(qiáng),毒副作用小,給藥劑量少等優(yōu)勢,逐漸成為治療惡性腫瘤的主要方法。但目前靶向藥物所針對的靶點,仍然存在特異性不高、腫瘤靶向性不強(qiáng)等缺點,因此需要尋找在腫瘤細(xì)胞上特異性高表達(dá)的靶點。Cripto-1是一個典型的癌基因,在細(xì)胞的遷移、侵襲以及血管生成中發(fā)揮重要作用。并且Cripto-1在人正常組織細(xì)胞中低表達(dá)或不表達(dá),而在一些惡性腫瘤細(xì)胞中異常高表達(dá),因此Cripto-1可作為篩選抗腫瘤藥物的有效靶點。1.靶向啟動子和mRNA 3’UTR的Cripto-1表達(dá)抑制劑的篩選及鑒定在本論文中,我們通過PCR技術(shù)在Hela細(xì)胞擴(kuò)增了Cripto-1啟動子區(qū)域,并且將它與載體pGL3-basic進(jìn)行連接,成功構(gòu)建了pGL3-Cripto-1啟動子熒光素酶報告載體,經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)我們所釣取的Cripto-1啟動子片段具有比較高的啟動子活性,能夠進(jìn)行后續(xù)的化合物初篩復(fù)篩實驗。之后,我們將Cripto-1啟動子和之前構(gòu)建的Cript... 

【文章來源】：東北師范大學(xué)吉林省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    一、惡性腫瘤的治療方法
        (一)手術(shù)治療
        (二)放射治療
        (三)免疫治療
        (四)藥物治療
    二、惡性腫瘤的發(fā)生機(jī)制
        (一)外源性因素
        (二)內(nèi)源性因素
        (三)原癌基因在腫瘤發(fā)生中的作用
    三、Cripto-1的研究進(jìn)展
        (一)Cripto-1概述
        (二)Cripto-1與腫瘤的關(guān)系
        (三)Cripto-1基因的表達(dá)調(diào)控
    四、真核基因的表達(dá)調(diào)控
        (一)轉(zhuǎn)錄前水平的調(diào)控
        (二)轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控
        (三)轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控
        (四)翻譯水平的調(diào)控
        (五)翻譯后水平的調(diào)控
    五、研究目的及意義
第二部分 材料與方法
    一、實驗儀器和材料
        (一)實驗儀器
        (二)實驗試劑及材料
        (三)溶液的配制
    二、實驗方法
        (一)細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)方法
        (二)Cripto-1啟動子的釣取
        (三)pGL3-Cripto-1啟動子熒光素酶報告載體的構(gòu)建與鑒定
        (四)pGL3-Cripto-1啟動子熒光素酶報告載體的活性鑒定
        (五)Cripto-1表達(dá)抑制劑的篩選
        (六)蛋白免疫印跡分析
        (七)MTT檢測
        (八)細(xì)胞形態(tài)觀察
        (九)BrdU摻入實驗
        (十)細(xì)胞周期檢測
        (十一)DAPI染色
        (十二)細(xì)胞凋亡檢測
        (十三)細(xì)胞劃痕實驗
第三部分 實驗結(jié)果
    一、pGL3-Cripto-1啟動子熒光素酶報告載體的構(gòu)建及鑒定
        (一)pGL3-Cripto-1啟動子熒光素酶報告載體的構(gòu)建
        (二)Cripto-1啟動子熒光素酶報告載體的鑒定
    二、靶向Cripto-1啟動子的化合物篩選
        (一)抑制Cripto-1表達(dá)的化合物的初步篩選
        (二)抑制Cripto-1表達(dá)的化合物的復(fù)篩
        (三)候選化合物對Cripto-1表達(dá)的影響
    三、靶向Cripto-1mRNA3'UTR的化合物篩選
        (一)抑制Cripto-1表達(dá)的化合物的初步篩選
        (二)抑制Cripto-1表達(dá)的化合物的復(fù)篩
        (三)候選化合物對Cripto-1表達(dá)的影響
    四、化合物T150、T173的體外抗腫瘤作用研究
        (一)T150、T173對腫瘤細(xì)胞活力的影響
        (二)T150、T173對腫瘤細(xì)胞形態(tài)的影響
        (三)T150、T173對腫瘤細(xì)胞增殖能力的影響
        (四)T150、T173對腫瘤細(xì)胞凋亡的影響
        (五)T150、T173對腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響
    五、過表達(dá)Cripto-1對T150、T173抗腫瘤作用的影響
第四部分 討論
    一、pGL3-Cripto-1啟動子熒光素酶報告載體的構(gòu)建和化合物篩選
    二、T150、T173的體外抗腫瘤活性研究
第五部分 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[6]癌癥發(fā)生機(jī)理的研究進(jìn)展[J]. 戴玉錦.  生物學(xué)雜志. 2004(06)
[7]原核生物和真核生物的基因組及其基因表達(dá)調(diào)控的比較研究[J]. 林元山.  懷化師專學(xué)報. 2002(05)

碩士論文
[1]miRNA對Cripto-1高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞增殖及侵襲的調(diào)控作用及機(jī)制研究[D]. 魏霞.東北師范大學(xué) 2016



本文編號：3203408