微生物代謝產(chǎn)物是新藥研究與開發(fā)的資源寶庫,相比與植物,微生物具有可以快速繁殖的特點,滿足了有效化合物大量生產(chǎn)的需求。日本學者從茭白黑粉菌中發(fā)現(xiàn)一種具有抗破骨細胞活性的化合物Stigmastane-3-6-dione,分子式為C₂₉H₂₈O₂,抗破骨細胞的分化率達到49%,國內(nèi)山東大學學者從玉米黑粉菌中分離出一些甾體類化合物與日本學者分析出的化合物結(jié)構(gòu)相近,但未做活性研究,本實驗希望通過對玉米黑粉菌代謝化合物進行分離,再利用具有親水親油兩性的玻尿酸-聚乳酸藥物載體包覆具備抗破骨細胞活性的玉米黑粉菌代謝產(chǎn)物進行骨質(zhì)疏松治療的基礎研究。（1）以搖瓶的方式發(fā)酵生產(chǎn)玉米黑粉菌,將菌液以6000 rpm/min離心5min,取上清液加入1.2倍乙酸乙酯,萃取3次,取有機層,減壓濃縮機抽干,利用1cm硅膠管柱進行柱層析,流動相為石油醚:乙酸乙酯,設置四個梯度分別為1:0、6:1、2:1、0:1,經(jīng)TLC面相確認合并后得12個成分,分別命名為Fr1-Fr12。將Fr2、Fr5、Fr6、Fr7利用制備級HPLC結(jié)和RP-18管柱分離分別收... 

【文章來源】：華僑大學福建省

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第1章 前言
    1.1 骨質(zhì)疏松概述
        1.1.1 骨質(zhì)疏松癥及其研究現(xiàn)狀
        1.1.2 骨質(zhì)疏松癥的治療
    1.2 玉米黑粉菌的簡介
        1.2.1 玉米黑粉菌的來源及分類
        1.2.2 玉米黑粉菌的生長條件
        1.2.3 玉米黑粉菌的營養(yǎng)及藥用價值
    1.3 阿侖膦酸鈉簡介
        1.3.1 阿侖膦酸鈉
        1.3.2 阿侖膦酸鈉片劑
    1.4 生物可降解材料
        1.4.1 玻尿酸
        1.4.2 聚乳酸
    1.5 研究目的及主要研究內(nèi)容
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 主要研究內(nèi)容
第2章 玉米黑粉菌的發(fā)酵及化學成分分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株來源
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 主要實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 菌株的擴大培養(yǎng)
        2.2.2 搖瓶實驗
        2.2.3 5L發(fā)酵試驗
        2.2.4 柱層析分離
        2.2.5 TLC分析
        2.2.6 HPLC分析
        2.2.7 Mass分析
        2.2.8 NMR分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 玉米黑粉菌的生長曲線
        2.3.2 5L發(fā)酵槽發(fā)酵玉米黑粉菌
        2.3.3 產(chǎn)物萃取及分離
        2.3.4 TLC分析結(jié)果
        2.3.5 HPLC分析結(jié)果
        2.3.6 Mass分析結(jié)果
        2.3.7 二次Mass分析結(jié)果
        2.3.8 NMR分析結(jié)果
        2.3.9 Stigmastane-3,6-dione 結(jié)構(gòu)
    2.4 小結(jié)
第3章 玉米黑粉菌所分離化學成分的活性檢測
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞系
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 主要實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)基的配置
        3.2.2 細胞培養(yǎng)
        3.2.3 細胞存活率分析(MTT法)
        3.2.4 TRAP染色
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 不同化合物對RAW264.7細胞存活率的影響
        3.3.2 不同化合物對Hela細胞存活率的影響
        3.3.3 不同化合物對A549細胞存活率的影響
        3.3.4 不同化合物對破骨細胞分化的影響
    3.4 小結(jié)
第4章 HA-PLA納米粒子的合成及特性評價
    4.1 實驗材料
        4.1.1 玻尿酸及聚乳酸來源
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 主要實驗儀器
    4.2 試驗方法
        4.2.1 HA的水解
        4.2.2 HA-TBA 的合成
        4.2.3 PLA上修飾NHS
        4.2.4 HA-PLA的合成
        4.2.5 制備包覆熒光分子的納米粒子
        4.2.6 納米粒子的特性評價
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 酸水解玻尿酸結(jié)果
        4.3.2 HA-TBA的合成結(jié)果
        4.3.3 HA-PLA的合成結(jié)果
        4.3.4 HA-PLA納米粒子的粒徑分析
        4.3.5 HA-PLA納米粒子Zeta電位分析
        4.3.6 HA-PLA納米粒子掃描電子顯微鏡圖
    4.4 小結(jié)
第5章 載藥HA-PLA納米粒子抗骨質(zhì)疏松的體外研究
    5.1 實驗材料
        5.1.1 細胞系
        5.1.2 實驗試劑
        5.1.3 主要實驗儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 載藥納米粒子的制備
        5.2.2 MTT法檢測HA-PLA納米粒子對RAW264.7細胞存活率的影響
        5.2.3 TRAP染色檢測納米粒子對破骨細胞分化的影響
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 MTT法檢測各化合物對RAW264.7細胞存活率的影響結(jié)果
        5.3.2 TRAP染色檢測納米粒子對破骨細胞分化的影響結(jié)果
    5.4 小結(jié)
總結(jié)與展望
參考文獻
附錄 不同分子量Dextran標準品的GPC圖譜
致謝
個人簡歷、在學期間發(fā)表的學術論文與研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]米諾膦酸水合物[J]. 趙麗嘉,王利華,胡雅萍,徐頌,陳常青.  藥物評價研究. 2010(06)
[2]具有藥用價值的植物病原真菌[J]. 陳利軍,史洪中,陳月華,尹健.  時珍國醫(yī)國藥. 2007(03)
[3]聚乳酸合成研究現(xiàn)狀及展望[J]. 崔英德,廖列文,康正.  精細化工. 1999(05)

博士論文
[1]四種藥用植物和一種真菌的化學成分及生物活性研究[D]. 王姝麒.山東大學 2011

碩士論文
[1]甲醇—水體系過渡金屬Y型分子篩催化合成昆布氨酸[D]. 倪偲.青島大學 2014
[2]骨質(zhì)疏松椎體壓縮性骨折術后再骨折的危險因素分析[D]. 蘆虎.廣州醫(yī)科大學 2014



本文編號：3192050