目的:構建適配子（AS1411）修飾的負載let-7a的類脂多胺修飾的陽離子脂質體（Apt-NLs-let-7a）,評價其制劑學性質、體外細胞學特征以及與化療藥物順鉑聯(lián)合用藥的抗腫瘤效果。方法:通過置換和酰胺化反應合成類脂質陽離子載體材料N,N’-二油酰三羥甲基氨基甲烷（2-氨基乙基）胺（N,N’-dioleoyl tris（2-aminoethyl）amine,NDOA）,并利用開環(huán)反應合成羧基甜菜堿（CB）。通過硅膠薄層色譜法（TLC）、傅里葉變換紅外光譜法（FT-IR）、核磁共振法（1H-NMR）和液質聯(lián)用法（LC-MS）等對上述合成產物進行結構驗證。采用乙醇注入法制備陽離子脂質體（NLs）,并利用靜電吸附制備適配子修飾的負載miRNA的陽離子脂質體（Apt-NLs-miRNA）,并測定其粒徑、Zeta電位、穩(wěn)定性和miRNA的包封率。以人源非小細胞肺腺癌A549細胞和人源腎上皮293T細胞為模型,MTT法考察空白NLs對A549與293T細胞的安全性。采用流式細胞儀（Flow Cytometry,FCM）和激光共聚焦顯微鏡（Confocal laser scanning mic... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－３．非病毒的載體??Ｆｉ．?１－３．?Ｎｏｎ－ｖｉｒａｌ?ｄｅｌｉｖｅｒｓｓｔｅｍｓ?ｆｏｒ?ｍｉＲＮＡｓ??

ｍｉＲＮＡ負載和細胞攝取率，羧基甜菜堿發(fā)揮溶酶體快速逃逸等。當ｌｅｔ－７ａ負載上述??制劑進入小鼠體內后，通過有效抑制ｋ－Ｒａｓ蛋白的表達，抑制癌細胞增殖、侵襲，促??進癌細胞凋亡，從而達到治療肺癌的效果（圖１－４）。??８??

至分液漏斗中，加入乙酸乙酯和水萃取三次。萃取完成后，將有機相旋轉蒸發(fā)，以除去??過量的乙酸乙酯和三氟乙醇。旋轉蒸發(fā)得到的粗產物進行ＴＬＣ分析，展開劑：石油醚：??乙酸乙酯＝２０：１。??分離純化：稱取硅膠約８０?ｇ，石油醚浸泡，沿一定的方向快速攪拌均勻后濕法裝??柱，用石油醚以一定的流速和壓力壓實硅膠柱，使其達到平衡狀態(tài)。取樣品溶液緩慢??滴加到柱上方，以梯度洗脫的方法進行濕法硅膠柱層析，分瓶收集洗脫液。ＴＬＣ檢??測以確定含有純凈油酸三氟乙酯的收集瓶，合并收集瓶后旋轉蒸發(fā)除去洗脫液，得到??較為純凈的產物即為油酸三氟乙酯。??化學結構表征：ＴＬＣ分析；ｂ－ＮＭＲ分析；ＦＴ－ＩＲ分析。??２．１．２．?ＮＤＯＡ?的合成??將１．０７?ｇ三－（２－氨乙基）胺和２０?ｍＬ乙醇混合均勻后加至１００?ｍＬ的圓底燒瓶中，??再加入２．１．１制得的油酸三氟乙酯４．０?ｇ，在氮氣保護的情況下８５°Ｃ攪拌２４?ｈ。反應結??束后，將所得的粗產物進行硅膠薄層色譜（ＴＬＣ）分析。展開劑：ＣＨＣ１３：?ＣＨ３ＯＨ＝１０：１。??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Let-7a表達質粒的構建及其對肺癌A549細胞k-Ras蛋白表達的抑制作用[J]. 何曉燕,陳俊霞,歐陽溪,張政,彭惠民.  南方醫(yī)科大學學報. 2010(11)
[2]非小細胞肺癌的治療進展[J]. 朱立桓,陳龍.  中國熱帶醫(yī)學. 2010(05)



本文編號：3123588