目的:研究苯并呋喃類化合物--BF12[（E）-3-（6-甲氧基-2-（1-（3,4,5-三甲氧基苯基）乙烯基）苯并呋喃-5-基）甲酸]對宮頸癌細胞（SiHa、HeLa）和乳腺癌細胞（MCF-7、MDA-MB-231）增殖、凋亡的影響及機制初探。方法:（1）MTT試驗對四種癌細胞進行IC₅₀測定;（2）BF12處理后,PI檢測細胞周期分布,Western Blot（WB）及免疫熒光（IF）檢測細胞內(nèi)微管聚合情況;（3）小管成形實驗及酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測BF12對腫瘤血管影響;（4）Hoechst觀察細胞形態(tài),Annexin V-FITC/PI檢測凋亡誘導(dǎo)作用;（5）WB檢測PI3K/Akt/mTOR通路及凋亡相關(guān)蛋白表達,Autodock vina軟件對BF12和PI3K（α、γ、δ、β）進行分子對接,劃痕實驗觀察乳腺癌細胞遷移情況;（6）IF、電鏡及WB檢測乳腺癌細胞自噬現(xiàn)象。結(jié)果:（1）BF12對SiHa/HeLa/MCF-7/MDA-MB-231的IC₅₀分別是1.10/1.06/0.89/4.77μM;（2）BF12選擇... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

春銜锏腦-ray晶體結(jié)構(gòu)（PDB編號:6G6W，分辨率：2.72）。人PI3K蛋白含有A和B兩條鏈，A鏈為催化亞基，B鏈為調(diào)節(jié)亞基。用PyMoL1.7.6提取其中的A鏈，分別含1單元的PI3Kα蛋白和1分子3K6配體結(jié)構(gòu)、1單元的PI3Kγ蛋白和1分子4FJ配體結(jié)構(gòu)、1單元的PI3Kδ蛋白和1分子EO5配體結(jié)構(gòu)。因在RCSBProteinDataBank中未找到PI3Kβ蛋白，故采用計算機模擬。接著使用AutodockTools1.5.6刪除水分子、添加極性氫和電荷，最后轉(zhuǎn)化為PDBQT格式。1.2.8.2配體結(jié)構(gòu)準備首先用ChemDraw畫出BF12的結(jié)構(gòu)，然后轉(zhuǎn)化為三維結(jié)構(gòu)（圖1-3），用于分子對接。圖1-3BF12的平面(left)和立體(right)結(jié)構(gòu)Fig1-3Planar(left)andthree-dimensional(right)structuresofBF121.2.9WB實驗1.2.9.1蛋白提取取對數(shù)生長期的SiHa和HeLa細胞以3105個/ml的密度均勻接種于六孔板，過夜后用BF12、CA-4和/或PTX處理細胞24h，每孔加入60μLRIPI裂解液（RIPI:蛋白酶抑制劑:磷酸酶抑制劑=100:1:1)，冰上裂解30min，用刮刀刮取細胞后移到1.5mLEp管中，間斷渦旋5次，每次30s，然后4oC,13000r/min離心10min，收集上清液，置于冰上備用。參考文獻[53,54]方法分別提取聚合態(tài)和游離態(tài)微管蛋白。藥物干預(yù)后，用預(yù)熱至37oC的微管蛋白緩沖液MTSB洗滌兩次，加入70μLMTSB，37oC恒溫箱避光裂解10min，刮刀刮取細胞，14000r/min室溫離心10min，取上清，即為游離態(tài)微管蛋白懸液。在剩余的沉淀中加入RIPA裂解液，冰上裂解30min，4oC,12000r/min離心20min，取上清，即為聚合態(tài)微管蛋白懸液。1.2.9.2蛋白定量（1）按照說明書，取20μL25mg/mL蛋白標準溶液+980μLPBS得到0.5mg/mL蛋白工作液。（2）按照現(xiàn)用現(xiàn)配的原則，A液:B液=50:1配制適量BCA工作液。（3）蛋白濃度檢測蛋白工作液加入量如下表1-9。1.2.8.1受體結(jié)構(gòu)?

化合物BF12與CA-4處理SiHa和HeLa細胞24h后的細胞周期實驗結(jié)果圖

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[6]新型微管靶向抑制劑LL-01和LL-02抗腫瘤活性與機制研究[D]. 王靜靜.山東大學(xué) 2016
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[8]PI3K/AKT/mTOR信號通路生物標記物狀態(tài)與乳腺癌二線抗HER2治療相關(guān)研究[D]. 杜歌.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2015
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[10]miR-200b對乳腺癌細胞增殖遷移和侵襲的影響及機制研究[D]. 鄭琴.大連醫(yī)科大學(xué) 2015



本文編號：3103549