MLL1是MLL（Mixed lineage leukemia）蛋白家族成員之一,是催化組蛋白H3K4位點甲基化的重要甲基轉移酶,需要與其它“伴侶”蛋白相互作用形成MLL1復合蛋白發(fā)揮其最佳的甲基化催化活性。這些“伴侶”蛋白包括WDR5（WD Repeat Domain 5）,RbBP5（Retinoblastoma-binding Protein 5）和 ASH2L（Absent,Small,or Homeotic2-like）,其中 WDR5 和 MLL1的蛋白-蛋白相互作用（PPI）對維持MLL1催化活性至關重要。實驗研究證明,MLL1催化功能的失調與混合譜系白血病的發(fā)生密切相關,破壞MLL1-WDR5 PPI可以抑制白血病的發(fā)生發(fā)展。因此,MLL1-WDR5的PPI界面被認為是開發(fā)治療白血病藥物的潛在靶點。到目前為止,一些靶向MLL1-WDR5 PPI的模擬肽和非模擬肽小分子抑制劑已經(jīng)被發(fā)現(xiàn),但是這些抑制劑在成藥性上都各自存在一定的不足,例如過膜性差導致細胞水平活性差、毒副作用大、選擇性不佳等,這極大地限制了 MLL1體內外分子機制的研究及其小分子抑制劑在治療白血病方面的應用。... 

【文章來源】：浙江理工大學浙江省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．４?ＦＰ蛋白滴定曲線

ａ?ＮＤ表示未檢測到．??４．３?ＳＰＲ?驗證?ＤＣＪＶＩ４?１、ＤＣ—Ｍ５?２?與?ＷＤＲ５?的作用??ＳＰＲ實驗廣泛應用于測定兩個分子之間的相互作用，如蛋白和蛋白、蛋白和??ＤＮＡ、蛋白和小分子、核酸和核酸，并可以求出反應的平衡解離常數(shù)ＫＤ值。在??本實驗中，選取活性比較好的衍生物ＤＣ＿Ｍ４＿１和ＤＣ＿Ｍ５＿２，利用ＳＰＲ實驗驗??證它們與ＷＤＲ５的反應并求出平衡解離常數(shù)ＫＤ值。ＤＣ＿Ｍ４＿１和ＤＣ＿Ｍ５＿２的??ＳＰＲ實驗結果見圖４．２。由圖４．２的結合解離曲線可知，在反應進行到１２０?ｓ的時??候ＤＣ＿Ｍ４＿１和ＤＣ＿Ｍ５＿２都已經(jīng)完全與ＷＤＲ５蛋白結合，然后在反應進行到約??１８０?ｓ時ＤＣ＿Ｍ４＿１和ＤＣ＿Ｍ５＿２都與ＷＤＲ５蛋白快速解離。根據(jù)ＤＣ＿Ｍ４＿Ｉ和??ＤＣ＿Ｍ５＿２結合解離曲線擬合得到的ＫＤ值分別為１５．８?｜ｉＭ和１３．８?ｐＭ．。此實驗結??果不僅驗證了?ＤＣ＿Ｍ４Ｊ、ＤＣ＿Ｍ５＿２＊?ＷＤＲ５的直接結合，還說明了?ＤＣ＿Ｍ４＿１??和ＤＣ＿Ｍ５＿２是可逆抑制劑。??

殖的抑制效率。ＭＶ４－丨丨是急性髓系白血病細胞，攜帶ＭＬＬ－ＡＦ４融合蛋白，作??為實驗組；Ｋ５６２是慢性髓系白血病細胞系，不攜帶任何ＭＬＬ融合蛋白，作為對??照組。圖４．４顯示了?ＤＣ＿Ｍ４＿１對ＭＶ４－１１和Ｋ５６２細胞的增殖抑制曲線。由圖??可知，ＤＣ＿Ｍ４＿１對ＭＶ４－１１和Ｋ５６２的增殖均有抑制作用，但是對ＭＶ４－１１??（１Ｃ５〇＝３１．１６｜ｉＭ）的增殖抑制效果強于對Ｋ５６２?（丨Ｃ５〇＝７２．０９＾Ｍ）的增殖抑制效??果，表現(xiàn)出對ＭＬＬ１易位重組細胞系和非ＭＬＬ１易位重組細胞系的選擇性。??４１??


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