在眼科疾病中,視網(wǎng)膜血管滲漏、出血是人類致盲的主要原因之一。視網(wǎng)膜血管屏障（Blood-Retinal Barrier,BRB）的改變?cè)谝暰W(wǎng)膜疾病的發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。糖尿病視網(wǎng)膜病變和年齡相關(guān)性黃斑變性是兩種最常見的視網(wǎng)膜疾病,BRB的病變與它們直接相關(guān)。因此,我們旨在建立篩選增強(qiáng)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞穩(wěn)定性的藥物篩選平臺(tái),期望通過該平臺(tái)篩選出能夠有效抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞穩(wěn)定性降低的小分子化合物,增強(qiáng)BRB的屏障作用。然后對(duì)活性化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)活性相關(guān)性分析,尋找其結(jié)構(gòu)活性中心。本實(shí)驗(yàn)選用了艾森生物有限公司xCELLigene RTCA檢測(cè)系統(tǒng),實(shí)時(shí)檢測(cè)細(xì)胞基質(zhì)電阻值的改變--電極細(xì)胞基質(zhì)阻抗傳感（Electric Cell-substrate Impedance Sensing,ECIS）,建立增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞單層穩(wěn)定性的高通量藥物篩選平臺(tái),并篩選了2100個(gè)由已知活性化合物組成的小分子化合物庫(kù)。兩種不同的檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞單層滲漏的實(shí)驗(yàn)方法——XPerT實(shí)驗(yàn)和Transwell滲漏實(shí)驗(yàn)作為二級(jí)篩選,隨后探究了Apigenin增強(qiáng)血管內(nèi)皮穩(wěn)定性的分子信號(hào)機(jī)制和結(jié)構(gòu)活性相關(guān)性分析。此外,我... 

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ECIS檢測(cè)IL-1β誘導(dǎo)HRMEC細(xì)胞單層通透性增高

篩選中得到11個(gè)陽(yáng)性化合物。對(duì)這11個(gè)化合物進(jìn)行多濃度梯度的二次復(fù)篩，每個(gè)小分子化合物我們選用了3種濃度(50μΜ、 16.7μΜ、5.6μΜ)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在這11個(gè)小分子化合物中只有4個(gè)小分子化合物篩選結(jié)果呈陽(yáng)性，如圖3-2所示，另外7個(gè)小分子化合物為假陽(yáng)性。結(jié)果表明，三種濃度的Ethaverine hydrochloride對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的HRMEC細(xì)胞單層通透性增高具有一定的抑制作用如圖3-2(a)所示。當(dāng)Apigenin濃度較低時(shí)，如16.7μΜ、5.6μΜ，抑制IL-1β誘導(dǎo)的HRMEC細(xì)胞單層通透性增高。當(dāng)Apigenin濃度為50μΜ時(shí)，無(wú)增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞穩(wěn)定性的作用如圖3-2(b)所示。其主要原因是當(dāng)Apigenin濃度過高時(shí)，Apigenin對(duì)HRMEC細(xì)胞具有一定毒性，導(dǎo)致HRMEC細(xì)胞死亡。Deguelin具有增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞穩(wěn)定性的作用，當(dāng)Deguelin濃度為16.7μΜ時(shí)抑制效果最佳如圖3-2(c)所示。Dihydrocelastrol具有很好的抑制IL-1β誘導(dǎo)的HRMEC細(xì)胞單層通透性增高的作用如圖3-2(d)所示。Dihydrocelastrol濃度越低抑制IL-1β誘導(dǎo)的HRMEC細(xì)胞單層通透性增高的作用越明顯；當(dāng)Dihydrocelastrol濃度為50μΜ時(shí)，對(duì)HRMEC細(xì)胞有毒性。

電子科技大學(xué)碩士學(xué)位論文胞單層的穩(wěn)定性作用，實(shí)驗(yàn)證明了apigenin能夠抑制單層通透性增高。然后，我們利用CCK-8試劑盒測(cè)定增殖作用的影響。我們通過一系列的實(shí)驗(yàn)探究apigenin胞單層通透性增高的分子作用機(jī)制。在WB檢測(cè)蛋白磷in抑制IL-1β誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞單層通透性增高與。我們的實(shí)驗(yàn)表明，apigenin并不影響IL-1β誘導(dǎo)P65蛋程。apigenin不通過IL-1β介導(dǎo)的NF-κB核轉(zhuǎn)錄途徑來(lái)高。


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