研究目的:多發(fā)性硬化癥（Multiple Sclerosis,MS）是臨床常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病,其病理進(jìn)程可引起腦和脊髓的損傷進(jìn)而嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量。目前臨床上采取的治療手段如免疫調(diào)節(jié)劑芬戈莫德只能在一定程度上延緩疾病進(jìn)展,無(wú)法從根本上修復(fù)受損髓鞘和預(yù)防炎癥。M1型極化的巨噬細(xì)胞分泌炎性因子導(dǎo)致炎癥的發(fā)生,而M2型極化的巨噬細(xì)胞則有利于髓鞘和軸突的修復(fù),并有抑制炎癥的作用,從而兼具髓鞘修復(fù)和免疫調(diào)控的作用。本課題通過(guò)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的化合物庫(kù)篩選得到促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2型極化的新型化合物骨架結(jié)構(gòu),并對(duì)這種化合物骨架進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化,研究其對(duì)多發(fā)性硬化癥的治療作用和分子機(jī)制。研究方法:1.調(diào)控巨噬細(xì)胞極化的化合物篩選:1)RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞株給予具有不同骨架的化合物,單獨(dú)作用24h采用qRT-PCR檢測(cè)巨噬細(xì)胞M2型基因Arg1和M1型基因Mcp1的mRNA變化水平;2)RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞株預(yù)先用LPS刺激24h后給予具有不同骨架的化合物作用24h,采用qRT-PCR檢測(cè)巨噬細(xì)胞M1型基因Mcp1的mRNA變化水平;3)原代巨噬細(xì)胞（Bone Marrow Derive... 

【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞表
1. 前言
2. 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 藥物與試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及動(dòng)物來(lái)源
3. 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.2 Real-time PCR
    3.3 Western blot檢測(cè)相關(guān)蛋白
    3.4 EAE小鼠模型構(gòu)建
    3.5 H&E染色
    3.6 LFB染色
    3.7 小鼠體內(nèi)單核細(xì)胞的分離
+T細(xì)胞增殖試驗(yàn)">    3.8 巨噬細(xì)胞抑制CD4⁺T細(xì)胞增殖試驗(yàn)
    3.9 流式細(xì)胞術(shù)
    3.10 基因芯片（microarray）分析
    3.11 D11大鼠生物利用度研究
    3.12 數(shù)據(jù)分析
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 基于表型篩選促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2型極化化合物及其驗(yàn)證
        4.1.1 基于表型促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2型極化化合物篩選
        4.1.2 D11促進(jìn)BMDMs M2型極化并抑制LPS誘導(dǎo)的M1型極化
        4.1.3 D11未對(duì)BMDC的成熟產(chǎn)生明顯影響
+T細(xì)胞的分化產(chǎn)生明顯影響">        4.1.4 D11未對(duì)CD4⁺T細(xì)胞的分化產(chǎn)生明顯影響
+T細(xì)胞的增殖">        4.1.5 D11通過(guò)作用巨噬細(xì)胞抑制CD4⁺T細(xì)胞的增殖
    4.2 D11對(duì)MS小鼠模型EAE的治療作用研究
        4.2.1 D11藥代動(dòng)力學(xué)研究
        4.2.2 D11緩解MS疾病模型EAE小鼠的疾病進(jìn)展
        4.2.3 D11減輕EAE小鼠脊髓中的炎性反應(yīng)和髓鞘損傷
    4.3 D11對(duì)EAE小鼠體內(nèi)各類(lèi)免疫細(xì)胞的作用
        4.3.1 D11可以促進(jìn)EAE小鼠體內(nèi)巨噬細(xì)胞M2型極化并抑制M1型極化
        4.3.2 D11對(duì)EAE小鼠體內(nèi)樹(shù)突細(xì)胞和Treg細(xì)胞未產(chǎn)生明顯影響
    4.4 D11促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2型極化機(jī)制研究
        4.4.1 D11促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2型基因表達(dá)及激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        4.4.2 D11激活巨噬細(xì)胞中的AKT/STAT3信號(hào)通路
        4.4.3 敲除STAT3對(duì)BMDC的成熟未產(chǎn)生明顯影響
        4.4.4 敲除STAT3對(duì)BMDM的極化未產(chǎn)生明顯影響
fl/fl小鼠造EAE模型癥狀減輕">        4.4.5 Lysm cre STAT3^fl/fl小鼠造EAE模型癥狀減輕
fl/fl小鼠外周巨噬細(xì)胞的極化未發(fā)生明顯變化">        4.4.6 Lysm cre STAT3^fl/fl小鼠外周巨噬細(xì)胞的極化未發(fā)生明顯變化
fl/fl小鼠樹(shù)突細(xì)胞的成熟未發(fā)生明顯變化">        4.4.7 Lysm cre STAT3^fl/fl小鼠樹(shù)突細(xì)胞的成熟未發(fā)生明顯變化
fl/fl小鼠中樞浸潤(rùn)M2型巨噬細(xì)胞增加">        4.4.8 Lysm cre STAT3^fl/fl小鼠中樞浸潤(rùn)M2型巨噬細(xì)胞增加
5. 討論
參考文獻(xiàn)
綜述 AKT/mTOR/STAT信號(hào)通路調(diào)控介導(dǎo)MS的各類(lèi)免疫細(xì)胞
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷及碩士期間科研成果



本文編號(hào)：3050353