目的:分離和篩選出紫色馬勃的優(yōu)良菌株;對篩選得到的紫色馬勃菌株進(jìn)行生物學(xué)特征研究,掌握其菌絲體生長所需的營養(yǎng)和環(huán)境條件;測定紫色馬勃子實體和發(fā)酵產(chǎn)物中主要的化學(xué)成分含量,為其質(zhì)量評價奠定基礎(chǔ);研究紫色馬勃發(fā)酵產(chǎn)物對胃潰瘍以及肝損傷的預(yù)防保護(hù)作用,探討其作用機(jī)制,為其藥用價值的開發(fā)和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。方法:分離純化出紫色馬勃優(yōu)良菌株,對其生物學(xué)特性進(jìn)行考察;通過單因素考察和正交試驗優(yōu)化紫色馬勃液體發(fā)酵工藝,確定液體培養(yǎng)基的成分組成和培養(yǎng)條件。利用苯酚-濃硫酸法,測定紫色馬勃發(fā)酵產(chǎn)物中多糖的含量;利用香草醛高氯酸顯色反應(yīng)測定紫色馬勃發(fā)酵產(chǎn)物中總?cè)频暮?通過HPLC法測定紫色馬勃子實體和發(fā)酵產(chǎn)物中麥角甾酮以及麥角甾醇的含量;通過束縛水浸致小鼠應(yīng)激性胃潰瘍模型以及酒精致小鼠急性肝損傷模型,研究紫色馬勃發(fā)酵產(chǎn)物對應(yīng)激性胃潰瘍以及急性肝損傷疾病的預(yù)防作用及其機(jī)制。結(jié)果:經(jīng)過分離、純化得到紫色馬勃的優(yōu)良菌株,生物學(xué)特性研究表明最適合紫色馬勃菌絲生長的培養(yǎng)基配方為葡萄糖濃度2%、酵母粉濃度1%、MgSO₄濃度0.1%,最適初始pH值6.5,最適培養(yǎng)溫度30℃;紫色馬勃液體深層發(fā)酵... 

【文章來源】：長春中醫(yī)藥大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

紫色馬勃子實體

長春中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文7對采集的紫色馬勃進(jìn)行拍照和顯微鑒別，結(jié)果如圖1-3。紫色馬勃的子實體中型至較大，呈球狀或陀螺狀，寬度為5~12cm，不孕基部較為發(fā)達(dá)[46]。紫色馬勃的孢子呈紫色，孢子直徑為4~5.5μm，表面有小刺；孢絲較長，有橫隔，有分枝，相互交織，粗為2~5μm[47]。圖1紫色馬勃子實體圖2紫色馬勃菌孢子（×10000）圖3紫色馬勃菌孢絲（×2000）2.方法與結(jié)果2.1紫色馬勃菌種的分離純化取采集的紫色馬勃子實體，在無菌條件下，用75%乙醇擦拭表面，然后分離適當(dāng)大小組織，迅速接入斜面培養(yǎng)基中，在28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，記錄萌發(fā)時間及生長狀態(tài)。待萌發(fā)至一定大小時，選取菌絲粗壯濃密、無污染的菌落，從中切取小部分菌塊接種到新的斜面培養(yǎng)基上，于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。重復(fù)培養(yǎng)5代，選取生長勢最佳留存菌種。經(jīng)二十次以上的傳代后，菌種遺傳性狀穩(wěn)定，且4℃保存一個月亦無變異。即獲得紫色馬勃的純菌株（菌株編號ZSTMB001號，現(xiàn)保存于吉林省菌物藥生物技術(shù)工程實驗室），可用于后續(xù)實驗。2.2生物學(xué)特性考察2.2.1培養(yǎng)方法根據(jù)各培養(yǎng)基組成制備溶液，加熱攪拌使其充分溶解混勻后，趁熱分裝于試管中，每支試管裝15mL，塞上自制的棉塞，每組試驗平行制作3支試管，捆扎好放入高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃滅菌30分鐘，滅菌完成后，制成斜面培養(yǎng)基；

長春中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文7對采集的紫色馬勃進(jìn)行拍照和顯微鑒別，結(jié)果如圖1-3。紫色馬勃的子實體中型至較大，呈球狀或陀螺狀，寬度為5~12cm，不孕基部較為發(fā)達(dá)[46]。紫色馬勃的孢子呈紫色，孢子直徑為4~5.5μm，表面有小刺；孢絲較長，有橫隔，有分枝，相互交織，粗為2~5μm[47]。圖1紫色馬勃子實體圖2紫色馬勃菌孢子（×10000）圖3紫色馬勃菌孢絲（×2000）2.方法與結(jié)果2.1紫色馬勃菌種的分離純化取采集的紫色馬勃子實體，在無菌條件下，用75%乙醇擦拭表面，然后分離適當(dāng)大小組織，迅速接入斜面培養(yǎng)基中，在28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，記錄萌發(fā)時間及生長狀態(tài)。待萌發(fā)至一定大小時，選取菌絲粗壯濃密、無污染的菌落，從中切取小部分菌塊接種到新的斜面培養(yǎng)基上，于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。重復(fù)培養(yǎng)5代，選取生長勢最佳留存菌種。經(jīng)二十次以上的傳代后，菌種遺傳性狀穩(wěn)定，且4℃保存一個月亦無變異。即獲得紫色馬勃的純菌株（菌株編號ZSTMB001號，現(xiàn)保存于吉林省菌物藥生物技術(shù)工程實驗室），可用于后續(xù)實驗。2.2生物學(xué)特性考察2.2.1培養(yǎng)方法根據(jù)各培養(yǎng)基組成制備溶液，加熱攪拌使其充分溶解混勻后，趁熱分裝于試管中，每支試管裝15mL，塞上自制的棉塞，每組試驗平行制作3支試管，捆扎好放入高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃滅菌30分鐘，滅菌完成后，制成斜面培養(yǎng)基；

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鹽酸度洛西汀對大鼠應(yīng)激性胃潰瘍保護(hù)作用機(jī)制的初步探究[J]. 朱宏亮,姜劍偉,張建軍.  中國新藥雜志. 2019(13)
[2]HPLC雙波長法測定小柄馬勃子實體、液體發(fā)酵菌絲中麥角甾醇和麥角甾酮含量[J]. 楊秀璐,孟佳啟,李婷,王淑敏.  中國食用菌. 2018(05)
[3]小柄馬勃對慢性肺損傷的治療及機(jī)理研究[J]. 宮詩林,徐祉臨,張慧潔,單文欣,趙丞,顏天華,王淑敏.  藥學(xué)研究. 2017(08)
[4]玉米黑粉菌的生物學(xué)特性研究[J]. 翟璐,于琦,侯朵朵,劉馨晨,步洪石,孟佳啟,王淑敏.  中國食用菌. 2017(04)
[5]大馬勃及大口靜灰球的抗炎鎮(zhèn)痛作用比較研究[J]. 相聰坤,關(guān)勝江,馬娟娟.  天津中醫(yī)藥. 2016(07)
[6]黃硬皮馬勃子實體提取物抑菌活性[J]. 周會明,張焱珍,柴紅梅,張小雷,劉璇,孔令艦,和嬌嬌.  食用菌學(xué)報. 2016(02)
[7]馬勃多糖對荷瘤模型小鼠抑瘤作用及生命延長率的影響[J]. 姜明華,田易玲,徐凌川.  山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2014(02)
[8]大馬勃抗炎鎮(zhèn)痛及體外抑菌作用的研究[J]. 張帆,王大可,李愛欣,王淑敏.  中國食用菌. 2014(02)
[9]吉林省食藥用真菌馬勃的資源及鑒別研究[J]. 宮詩林,曹玉峰,王淑敏.  亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥. 2013(12)
[10]四氯化碳對HL-7702肝細(xì)胞甘油三酯含量影響[J]. 白劍英,雷佩玉,王幼萍,閆丹丹,梁瑞峰,王祝欣.  中國公共衛(wèi)生. 2014(01)

碩士論文
[1]兩種高等真菌及一種內(nèi)生真菌化學(xué)成分[D]. 鄧慧穎.河北大學(xué) 2011
[2]馬勃化學(xué)成分的分離、鑒別及對組織蛋白酶L抑制作用研究[D]. 李小麗.湘潭大學(xué) 2011
[3]脫皮馬勃化學(xué)成分及抗腫瘤活性研究[D]. 崔磊.山東大學(xué) 2006



本文編號：3044333