本文運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)、RNA干擾、熒光染色成像分析、免疫組化、Western blotting等細(xì)胞學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)和方法,以PC12細(xì)胞、SH-SY5Y細(xì)胞和原代神經(jīng)元細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,系統(tǒng)研究了雷帕霉素在抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用；雷帕霉素靶向mTORC1mTORC2通路抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡機(jī)理；雷帕霉素抑制鎘激活神經(jīng)細(xì)胞JNK和Erk1/2通路抗凋亡機(jī)理；雷帕霉素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞線粒體ROS介導(dǎo)JNK和Erk1/2通路激活機(jī)理；雷帕霉素靶向PTEN/PP2A信號(hào)網(wǎng)絡(luò)抑制鎘激活神經(jīng)細(xì)胞Erk1/2通路抗凋亡機(jī)理；雷帕霉素抑制鎘激活神經(jīng)細(xì)胞JNK通路干預(yù)自噬機(jī)理。結(jié)果如下：1雷帕霉素抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡采用PC12細(xì)胞、SH-SY5Y細(xì)胞和小鼠原代神經(jīng)元在雷帕霉素（0.2μg/ml）預(yù)處理48 h后暴露10和20μM鎘4h或24h。然后,觀察細(xì)胞形態(tài)、臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)量、DAPI和TUNEL染色評(píng)估細(xì)胞凋亡表現(xiàn),檢測(cè)Caspase-3/7活性、Western blot分析細(xì)胞Caspase-3激活表現(xiàn)。結(jié)果顯示,鎘以濃度依賴的方式誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞活性下降和形態(tài)改變,核濃縮和斷裂細(xì)胞及... 

【文章來(lái)源】：南京師范大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：176 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
縮略詞
摘要
Abstract
引言
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 鎘對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的危害及雷帕霉素神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)
        1 鎘的特性及鎘污染
        2 鎘污染對(duì)人類健康的危害
        3 鎘的神經(jīng)毒性
        4 鎘的神經(jīng)毒性機(jī)制
            4.1 鎘與氧化應(yīng)激
            4.2 鎘與鈣
            4.3 鎘與神經(jīng)遞質(zhì)
            4.4 鎘與基因
            4.5 鎘與金屬硫蛋白
            4.6 鎘與細(xì)胞凋亡機(jī)制
        5 雷帕霉素的性質(zhì)
        6 雷帕霉素的生物學(xué)作用
        7 雷帕霉素對(duì)神經(jīng)調(diào)控與保護(hù)作用
            7.1 雷帕霉素與阿爾茲海默癥
            7.2 雷帕霉素與帕金森病
            7.3 雷帕霉素與亨廷頓氏舞蹈病
        8 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第二章 氧化應(yīng)激ROS和線粒體損傷與神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病
        1 ROS的特性
        2 ROS與線粒體
        3 ROS對(duì)生物分子的損傷
            3.1 ROS與脂類
            3.2 ROS與DNA
            3.3 ROS與蛋白質(zhì)
        4 ROS和線粒體損傷與神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病
            4.1 ROS和線粒體損傷在AD中作用及機(jī)制
            4.2 ROS與線粒體損傷在PD中作用與機(jī)制
        5 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第三章 mTORC1/2和MAPKs通路與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的關(guān)系進(jìn)展
        1 mTOR信號(hào)通路
            1.1 mTORC1和mTORC2（mTORC1/2）
            1.2 mTORC1通路
            1.3 mTORC2通路
        2 mTORC 1/2通路與神經(jīng)變性疾病
        3 MAPKs信號(hào)通路
        4 MAPKs信號(hào)通路與神經(jīng)變性疾病的關(guān)系
            4.1 MAPKs與AD
            4.2 MAPKs與PD
            4.3 MPAKS與ALS
        5 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第四章 細(xì)胞自噬與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的關(guān)系進(jìn)展
        1 自噬的性質(zhì)
        2 自噬的機(jī)制及調(diào)控
        3 自噬與凋亡
        4 自噬與神經(jīng)變性疾病
            4.1 自噬與AD
            4.2 自噬與PD
            4.3 自噬與HD
            4.4 自噬與ALS
        5 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
第二部分 實(shí)驗(yàn)研究
    第五章 雷帕霉素在抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用研究
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 主要藥品與試劑
            1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.4 大腦皮質(zhì)神經(jīng)元分離和培養(yǎng)
            1.5 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            1.6 細(xì)胞活性檢測(cè)
            1.7 DAPI染色分析
            1.8 TUNEL染色分析
            1.9 Caspase-3活性分析
            1.10 免疫印跡（Western blot）分析
            1.11 數(shù)據(jù)處理
        2 結(jié)果
            2.1 雷帕霉素削弱鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞活性下降和形態(tài)改變
            2.2 雷帕霉素抵抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡
            2.3 雷帕霉素抑制鎘激活神經(jīng)細(xì)胞Caspase-3通路
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第六章 雷帕霉素靶向mTORC1和mTORC2通路抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡機(jī)理研究
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 主要藥品與試劑
            1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.4 小鼠大腦皮質(zhì)原代神經(jīng)元的分離及培養(yǎng)
            1.5 重組腺病毒構(gòu)建和細(xì)胞感染
            1.6 慢病毒構(gòu)建和細(xì)胞感染
            1.7 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            1.8 細(xì)胞活性檢測(cè)
            1.9 DAPI染色分析
            1.10 免疫印跡（Western blot）分析
            1.11 數(shù)據(jù)處理
        2 結(jié)果
            2.1 雷帕霉素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡是mTOR激酶活性依賴的
            2.2 雷帕霉素靶向mTORC1和mTORC2抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡
            2.3 雷帕霉素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞mTORC1介導(dǎo)S6K1和4E-BP1通路激活抗凋亡
            2.4 特異性抑制或鈍化Akt活性增強(qiáng)雷帕霉素抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第七章 雷帕霉素抑制鎘激活神經(jīng)細(xì)胞JNK和Erk1/2通路抗凋亡機(jī)理研究
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 主要藥品與試劑
            1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.4 小鼠大腦皮質(zhì)原代神經(jīng)元的分離及培養(yǎng)
            1.5 重組腺病毒構(gòu)建和細(xì)胞感染
            1.6 慢病毒構(gòu)建和細(xì)胞感染
            1.7 細(xì)胞活性檢測(cè)
            1.8 DAPI染色分析
            1.9 免疫印跡（Western blot）分析
            1.10 數(shù)據(jù)處理
        2 結(jié)果
            2.1 雷帕霉素抑制鎘激活神經(jīng)細(xì)胞JNK、Erk1/2和p38通路
            2.2 雷帕霉素通路抑制JNK通路抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡
            2.3 雷帕霉素通過(guò)抑制Erk1/2通路抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第八章 雷帕霉素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞線粒體ROS介導(dǎo),JNK和Erk1/2通路激活機(jī)理研究
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 主要藥品與試劑
            1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.4 小鼠大腦皮質(zhì)原代神經(jīng)元的分離及培養(yǎng)
            1.5 重組腺病毒構(gòu)建和細(xì)胞感染
            1.6 胞內(nèi)ROS成像分析
            1.7 免疫印跡（Western blot）分析
            1.8 數(shù)據(jù)處理
        2 結(jié)果
            2.1 雷帕霉素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞ROS產(chǎn)生
            2.2 雷帕霉素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞線粒體ROS產(chǎn)生
            2.3 雷帕霉素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞線粒體ROS涉及JNK和Erk1/2通路激活
            2.4 特異性抑制或鈍化JNK和Erk1/2活性增強(qiáng)雷帕霉素阻止鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞線粒體ROS產(chǎn)生
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第九章 雷帕霉素靶向PTEN/PP2A信號(hào)網(wǎng)絡(luò)抑制鎘激活神經(jīng)細(xì)胞Erk1/2通路抗凋亡機(jī)理研究
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 主要藥品與試劑
            1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.4 小鼠大腦皮質(zhì)原代神經(jīng)元的分離及培養(yǎng)
            1.5 腺病毒構(gòu)建和感染細(xì)胞
            1.6 慢病毒構(gòu)建和細(xì)胞感染
            1.7 免疫細(xì)胞化學(xué)
            1.8 細(xì)胞活性檢測(cè)
            1.9 DAPI染色分析
            1.10 免疫印跡（Western blot）分析
            1.11 數(shù)據(jù)處理
        2 結(jié)果
            2.1 雷帕霉素抑制神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鎘激活Erk1/2通路及細(xì)胞凋亡
            2.2 雷帕霉素削弱鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞PP2A活性抑制
            2.3 特異性抑制PP2A抵抗雷帕霉素阻滯鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞Erk1/2激活和凋亡
            2.4 異位表達(dá)鈍化PP2A活性或過(guò)表達(dá)PP2A影響雷帕霉素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞Erk1/2激活及凋亡
            2.5 雷帕霉素通過(guò)PTEN和Akt抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞Erk1/2激活和凋亡
            2.6 雷帕霉素以mTOR激酶活性依賴的機(jī)制激活PP2A、上調(diào)PTEN和失活A(yù)kt進(jìn)而抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞Erk1/2和和凋亡
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第十章 雷帕霉素抑制鎘激活神經(jīng)細(xì)胞JNK通路干預(yù)自噬機(jī)理初探
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 主要藥品與試劑
            1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.3 重組腺病毒構(gòu)建和細(xì)胞感染
            1.4 免疫印跡（Western blot）分析
            1.5 數(shù)據(jù)處理
        2 結(jié)果
            2.1 JNK通路參與雷帕霉素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞LC3-Ⅱ表達(dá)
            2.2 異位表達(dá)鈍化c-Jun增強(qiáng)雷帕霉素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞LC3-Ⅱ表達(dá)
            2.3 雷帕霉素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞JNK激活干預(yù)自噬不依賴PP5
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
第三部分 全文結(jié)論
附1：攻讀博士學(xué)位期間研究成果及獲獎(jiǎng)情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Autophagy and neurodegenerative disorders[J]. Evangelia Kesidou,Roza Lagoudaki,Olga Touloumi,Kyriaki-Nefeli Poulatsidou,Constantina Simeonidou.  Neural Regeneration Research. 2013(24)



本文編號(hào)：3033518