長(zhǎng)期以來,人們一直在研究新陳代謝在致癌過程中的作用。Warburg等人觀察發(fā)現(xiàn),無論是否有氧氣存在,癌細(xì)胞都是通過將葡萄糖代謝成乳酸來產(chǎn)生能量。他在近100年前就預(yù)測(cè)到了癌細(xì)胞與非癌細(xì)胞之間的代謝差異,并在近年來,代謝差異已被人們確定為在致癌過程中發(fā)揮重要作用,可作為潛在的治療靶點(diǎn)。作為三羧酸循環(huán)的主要酶之一,異檸檬酸脫氫酶（IDH）的突變對(duì)細(xì)胞代謝造成顯著的影響。IDH1基因的突變已在許多惡性腫瘤中被發(fā)現(xiàn),IDH蛋白的改變和由于突變產(chǎn)生的異常的2-羥戊二酸（2-HG）活性是不同惡性腫瘤發(fā)生的新途徑,與多種紊亂的生物學(xué)過程相關(guān),在腫瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用,已成為一個(gè)重要的治療靶點(diǎn)。在本篇文章中,我們首先建立了靶向IDH1突變體蛋白的基于NADPH的高通量篩選平臺(tái),并且優(yōu)化了其反應(yīng)溫度、金屬離子濃度等理化條件,通過測(cè)定Z factor值和陽性化合物AGI-5198的IC50曲線,確證該方法的穩(wěn)定性和可靠性,可用于發(fā)現(xiàn)靶向IDH1突變體的小分子抑制劑;其次,通過該篩選方法,對(duì)含有2,5000個(gè)不同結(jié)構(gòu)化合物的化合物庫(kù)進(jìn)行大規(guī)模的初步篩選,并挑選出其中具有濃度依賴抑制活性和對(duì)野生型IDH1有選... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

三種IDH同功酶的突變熱點(diǎn)(Dang,Jin,&Su2010)

圖 2 IDH 的在不同代謝通路中的功能(H. Yang, Ye, Guan, & Xiong 2012)Figure 2 Functions of IDH in separate pathways(H. Yang, Ye, Guan, & Xiong 2012)IDH 在線粒體內(nèi)外利用 NAD+/NADP+產(chǎn)生 NADH/NADPH 是用于能源生重要途徑，是三羧酸(TCA)循環(huán)中起到關(guān)鍵作用的脫羧酶。因此，IDH 在線粒細(xì)胞質(zhì)溶質(zhì)之間的關(guān)鍵代謝物交換和電子傳遞中起著重要作用，如 脂肪酸合核酸和蛋白質(zhì)的羥基化以及無絲分裂等（如圖 2）。除了合成 TCA 循環(huán)中的代謝產(chǎn)物外，IDH1/2 是大多數(shù)組織細(xì)胞中生成 NADPH 的一個(gè)主要途徑。IDH化一分子的異檸檬酸氧化脫羧生成α-KG 的同時(shí)生成一分子的 NADPH，而 NA作為還原劑，可通過還原谷胱甘肽和硫氧還蛋白(Koehler & Van Noorden 2003)形成活化過氧化氫酶抵御細(xì)胞的氧化損傷(Mailloux et al. 2009)。因此，癌細(xì)IDH 突變?cè)斐傻墓δ艿膿p傷會(huì)嚴(yán)重地干擾細(xì)胞的解毒機(jī)制，最終造成基因組的定以及 DNA的損傷。1.2 IDH 突變以及其介導(dǎo)疾病的機(jī)制

4圖 3 D-2HG 干擾多種依賴α-KG 雙加氧酶細(xì)胞過程(L, Boulay, Topisirovic, Huot, & Mallette2017)Figure 3 Different cellular process interfered by (D-2HG)-mediated regulation of (α-KG)-dependent dioxygenases (L, Boulay, Topisirovic, Huot, & Mallette 2017)


本文編號(hào)：3014120