長期以來,人們一直在研究新陳代謝在致癌過程中的作用。Warburg等人觀察發(fā)現(xiàn),無論是否有氧氣存在,癌細胞都是通過將葡萄糖代謝成乳酸來產生能量。他在近100年前就預測到了癌細胞與非癌細胞之間的代謝差異,并在近年來,代謝差異已被人們確定為在致癌過程中發(fā)揮重要作用,可作為潛在的治療靶點。作為三羧酸循環(huán)的主要酶之一,異檸檬酸脫氫酶（IDH）的突變對細胞代謝造成顯著的影響。IDH1基因的突變已在許多惡性腫瘤中被發(fā)現(xiàn),IDH蛋白的改變和由于突變產生的異常的2-羥戊二酸（2-HG）活性是不同惡性腫瘤發(fā)生的新途徑,與多種紊亂的生物學過程相關,在腫瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用,已成為一個重要的治療靶點。在本篇文章中,我們首先建立了靶向IDH1突變體蛋白的基于NADPH的高通量篩選平臺,并且優(yōu)化了其反應溫度、金屬離子濃度等理化條件,通過測定Z factor值和陽性化合物AGI-5198的IC50曲線,確證該方法的穩(wěn)定性和可靠性,可用于發(fā)現(xiàn)靶向IDH1突變體的小分子抑制劑;其次,通過該篩選方法,對含有2,5000個不同結構化合物的化合物庫進行大規(guī)模的初步篩選,并挑選出其中具有濃度依賴抑制活性和對野生型IDH1有選... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

三種IDH同功酶的突變熱點(Dang,Jin,&Su2010)

圖 2 IDH 的在不同代謝通路中的功能(H. Yang, Ye, Guan, & Xiong 2012)Figure 2 Functions of IDH in separate pathways(H. Yang, Ye, Guan, & Xiong 2012)IDH 在線粒體內外利用 NAD+/NADP+產生 NADH/NADPH 是用于能源生重要途徑，是三羧酸(TCA)循環(huán)中起到關鍵作用的脫羧酶。因此，IDH 在線粒細胞質溶質之間的關鍵代謝物交換和電子傳遞中起著重要作用，如 脂肪酸合核酸和蛋白質的羥基化以及無絲分裂等（如圖 2）。除了合成 TCA 循環(huán)中的代謝產物外，IDH1/2 是大多數(shù)組織細胞中生成 NADPH 的一個主要途徑。IDH化一分子的異檸檬酸氧化脫羧生成α-KG 的同時生成一分子的 NADPH，而 NA作為還原劑，可通過還原谷胱甘肽和硫氧還蛋白(Koehler & Van Noorden 2003)形成活化過氧化氫酶抵御細胞的氧化損傷(Mailloux et al. 2009)。因此，癌細IDH 突變造成的功能的損傷會嚴重地干擾細胞的解毒機制，最終造成基因組的定以及 DNA的損傷。1.2 IDH 突變以及其介導疾病的機制

4圖 3 D-2HG 干擾多種依賴α-KG 雙加氧酶細胞過程(L, Boulay, Topisirovic, Huot, & Mallette2017)Figure 3 Different cellular process interfered by (D-2HG)-mediated regulation of (α-KG)-dependent dioxygenases (L, Boulay, Topisirovic, Huot, & Mallette 2017)


本文編號：3014120