【背景】原發(fā)性肝細胞癌是全球普遍存在的惡性腫瘤,因其起病急、診斷率低,手術治療有極大的局限性。藥物治療是肝癌晚期患者治療的主要手段,臨床各項研究表明多藥物的聯(lián)合治療對肝癌具有一定的療效。5-氟尿嘧啶是一種經(jīng)典的抗癌藥物,然而臨床應用發(fā)現(xiàn)其存在耐藥性和細胞毒性等問題,使得其抗癌功效有限。近年來,5-FU（5-fluorouracil）與其他藥物聯(lián)合使用已被廣泛用于各種癌癥的臨床治療�？Х纫蚴且环N結構明確,作用廣泛的甲基黃嘌呤類精神藥物,近年來越來越多的報道表明,咖啡因除了傳統(tǒng)意義上的致興奮作用,還能降低各類癌癥的風險,如膠質母細胞瘤、結腸直腸癌、肝癌等。有研究表明,咖啡因聯(lián)合順鉑及阿糖胞苷不僅能顯著抑制裸鼠皮下成瘤模型中胰腺腫瘤的生長,還能增加順鉑對肝癌細胞的抑增殖和促凋亡作用,該實驗證實咖啡因可以通過促進腫瘤對化療藥物的敏感性而改善患者的耐受性、延長生存期。以上研究為5-FU和咖啡因的新組合提供了理論依據(jù)。因此,我們研究5-FU和咖啡因聯(lián)合應用協(xié)同抗肝癌作用和機制。【目的】探討咖啡因和5-氟尿嘧啶聯(lián)合應用的抗肝癌作用及分子機制�！狙芯糠椒ā�1.MTS實驗檢測咖啡因和5-FU單獨處理對肝... 

【文章來源】：廣州醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

FU和咖啡因對SMMC-7721、Hep3B的生長抑制率曲線和IC50（A）不同濃度的咖啡因作用細胞48h后采用MTS法檢測細胞活性；咖啡因劑量依賴性地抑制肝癌細胞SMMC-7721、Hep3B的活性

廣州醫(yī)科大學碩士學位論文24(A)Aftertreatmentwithdifferentconcentrationsofcaffeinefor48h,theviabilityofcellswereassessedbyMTSassay.Caffeinedose-dependentlyinhibitstheactivityofhepatomacellsSMMC-7721andHep3B.(B)Aftertreatmentwithdifferentconcentrationsof5-FUfor48h,theviabilityofcellswereassessedbyMTSassay.5-FUdose-dependentlyinhibitstheactivityofhepatomacellsSMMC-7721andHep3B.2.咖啡因協(xié)同5-FU增強對肝癌細胞的抑增殖作用為了探討咖啡因對5-FU的協(xié)同作用，我們單獨或聯(lián)合使用不同濃度的咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）處理肝癌細胞48h后，采用MTS法檢測咖啡因和5-FU聯(lián)合使用及單獨使用對肝癌細胞活性的影響。根據(jù)OD值繪制柱狀圖和計算聯(lián)合指數(shù)CI值。MTS結果顯示，與單獨使用咖啡因或5-FU相比，咖啡因（0.5mM，1mM）和5-FU（25，50μM）聯(lián)合治療抑制肝癌的增殖作用更強（圖2-A,C）。咖啡因和5-FU聯(lián)合組的聯(lián)合指數(shù)（CI）值小于1（圖2B，D）。這些結果表明，在SMMC-7721和Hep3B細胞中，咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）之間存在協(xié)同作用。圖2咖啡因聯(lián)合5-FU對SMMC-7721、Hep3B增殖的影響（A）咖啡因（0.5，1mM）劑量依賴地增強5-FU（0，25，50μM）對肝癌細胞SMMC-7721的抑增殖作用。（B）根據(jù)不同濃度咖啡因聯(lián)合5-FU用藥后對肝癌細胞SMMC-7721增殖的抑制情況，計算CI值并繪制點狀圖。（C）咖啡因（0.5，1mM）劑量依賴地增強5-FU（0，25，

廣州醫(yī)科大學碩士學位論文26圖3咖啡因聯(lián)合5-FU對肝癌細胞凋亡蛋白的影響（A）咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）處理SMMC-7721后，通過WesternBlot檢測PARP，Bcl-2和Bcl-xL的表達。（B）咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）處理Hep3B后，通過WesternBlot檢測PARP，Bcl-2和Bcl-xL的表達。Figure3Effectofcaffeinecombinedwith5-FUonapoptoticproteinsoflivercancercells（A）AftertreatmentwithCaffeine(0,0.5,1mM)and5-FU(0,25,50μM)inSMMC-7721,theexpressionofPARP,Bcl-2andBcl-xLweredetectedbywesternBlot.（B）AftertreatmentwithCaffeine(0,0.5,1mM)and5-FU(0,25,50μM)inHep3B,theexpressionofPARP,Bcl-2andBcl-xLweredetectedbywesternBlot.4.5-FU聯(lián)合咖啡因明顯抑制肝癌細胞的增殖為了進一步驗證咖啡因聯(lián)合5-FU共同作用后對肝癌細胞增殖作用的影響，我們選取25μM5-FU與1mM咖啡因檢測肝癌細胞活性。25μM5-FU和1mM咖啡因聯(lián)合處理兩種肝癌細胞株24h、48h、72h，采用MTS實驗方法檢測肝癌細胞活性，根據(jù)OD值繪制柱狀圖，結果顯示，隨著藥物處理時間的延長，咖啡因與5-FU聯(lián)合作用對肝癌細胞抑增殖作用更加明顯（圖4A，B）。接著，我們采用結晶紫染色法觀察藥物聯(lián)合作用后細胞的增殖情況，結果發(fā)現(xiàn)，與單藥組相比，聯(lián)合組細胞數(shù)量明顯減少，均有統(tǒng)計學差異。Hep3B有相似的現(xiàn)象（圖4C，D）。另外，


本文編號：2990495