為獲得高純度糖化蛋白人腸堿性磷酸酶（IAP）并研究其新生物活性和藥學(xué)意義,采用黑曲菌和中國倉鼠卵巢細胞（CHO）表達嵌合人腸堿性磷酸酶（recAP）,獲得穩(wěn)定表達細胞株和高純度recAP。recAP呈劑量依賴型滅活內(nèi)毒素（LPS）,使致炎物質(zhì)ATP脫磷產(chǎn)生終產(chǎn)物腺苷。利用新鮮提取的人類白細胞和臍靜脈內(nèi)皮細胞系（HUVECs）建立抗炎生物活性模型。ELISA結(jié)果表明,recAP在LPS存在或不存在情況下均明顯抑制TNF-α分泌,ATP脫磷終產(chǎn)物腺苷明顯抑制TNF-α分泌。非LPS依賴的recAP抑制人類白細胞TNF-α分泌是一種堿性磷酸酶新活性測定方法。 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2020,51(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

蛋白HPLC檢測

以pMD 19T-AP質(zhì)粒為模板基因片段。連接轉(zhuǎn)化后，大腸桿菌轉(zhuǎn)化子雙酶切鑒定。測序正確質(zhì)粒命名為p MD 19T-ChimAP（見圖1）。2.1.2 堿性磷酸酶表達載體構(gòu)建

用XbaⅠ和HindⅢ鑒定黑曲霉表達載體pSZH-ChimAP時，電泳結(jié)果顯示1 500 bp,15 000 bp片段，下一步通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)入黑曲霉鑒定，如圖2A所示。同理，用Eco RⅠ和NotⅠ鑒定CHO表達載體pMH3-ChimAP時，電泳結(jié)果顯示出1 500、8 453 bp片段，下一步轉(zhuǎn)入CHO細胞中篩選，如圖2B所示。2.1.3 重組黑曲霉菌株篩選及鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
[1]多拷貝脂肪酶基因在黑曲霉中表達研究[J]. 李杰,張賀,王欣,黃超群,徐玥,張會,劉天奇.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2018(04)
[2]樂復(fù)能對LPS介導(dǎo)的健康人外周血單核細胞分泌TNF-α的影響及其機制[J]. 李富軍,薛梅,盧放根,鄒益友.  中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2013(01)



本文編號：2988702