發(fā)布時(shí)間：2021-01-19 11:57

　　目的:臨床治療中許多疾病的產(chǎn)生和發(fā)展都與腸黏膜屏障功能有關(guān),腸黏膜上皮細(xì)胞之間的連接方式是主要緊密連接,對維持腸黏膜屏障機(jī)械結(jié)構(gòu)完整和正常功能發(fā)揮起重要作用。腸道黏膜屏障機(jī)理十分復(fù)雜,主要由四個(gè)部分化學(xué)屏障,生物屏障,機(jī)械屏障,及免疫屏障組成。腸上皮細(xì)胞與細(xì)胞間形成的完整連接構(gòu)成了機(jī)械屏障的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)腸道機(jī)械屏障在各種類型的炎癥性腸道疾病的發(fā)病的過程和原因都有關(guān)鍵的作用,如果炎癥反應(yīng)得到控制同時(shí)腸道屏障損傷也會(huì)有所緩解,最終會(huì)使得腸道通透性的改善。本試驗(yàn)旨在探討維生素E及其衍生物對緊密連接中結(jié)構(gòu)蛋白以及脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的損傷后緊密連接中結(jié)構(gòu)蛋白的影響。方法:本實(shí)驗(yàn)選用豬小腸上皮細(xì)胞系ipec-j2細(xì)胞系和結(jié)構(gòu)與生化特點(diǎn)類似于人類小腸上皮細(xì)胞的caco2細(xì)胞系,用不同濃度的維生素E處理正常組細(xì)胞和LPS組細(xì)胞,進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。本試驗(yàn)探討了維生素E衍生物Tocofersolan對ipec-j2細(xì)胞系中緊密連接蛋白的影響以及衍生物與維生素的作用的對比。同時(shí)還研究了,用斷奶仔豬作為動(dòng)物模型,將斷奶兩周的仔豬經(jīng)過添加不同濃度的維生素E喂養(yǎng)2周,檢測仔豬的體重及血樣指標(biāo)的變化,分析腸道粘... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１：維生素Ｅ上調(diào)對ｉｐｅｃ－ｊ２細(xì)胞系和ｃａｃｏ２細(xì)胞系結(jié)構(gòu)蛋白的表迗：１Ａ：在ｉｐｅｃ－ｊ２??細(xì)胞系中，不同濃度維生素Ｅ處理后緊密連接的結(jié)構(gòu)蛋白ｏｃ?

?§??ｌｉｋｉｉｌ?�。海祝恚椋�??圖３－２：維生素Ｅ能夠抑制脂多糖誘導(dǎo)炎癥因子的高表達(dá)：２Ａ：在ｉｐｅｃ－ｊ２和ｃａｃｏ２細(xì)??胞系中，不同濃度維生素Ｅ處理后ｐ?ＮＦ－ｋＢ的蛋白表達(dá)；２Ｂ：在ｃａｃｏ２細(xì)胞系中，用維生素Ｅ??和ＬＰＳ處理細(xì)胞，將細(xì)胞分為對照組（未處理組），ＶＥ組，ＬＰＳ組，ＶＥ＋ＬＰＳ組，ＬＰＳ組相對于??對照組，炎癥因子ＩＬ－６和ｐ?ＮＦ－ｋＢ的蛋白表達(dá)升高，而ＶＥ＋ＬＰＳ組相對于ＬＰＳ組炎癥因子蛋白??表達(dá)明顯降低，ＶＥ組相對于對照組沒有明顯變化（Ｐ＊＜０．０５，Ｐ＝ｍ＝＜０．０１）?；?２Ｃ：在ｉｐｅｃ－ｊ２??細(xì)胞系中，同上分組，ＬＰＳ組相對于對照組，炎癥因子ＩＬ－６和ｐ?ＮＦ－ｋＢ的蛋白表達(dá)升高，而??ＶＥ＋ＬＰＳ組相對于ＬＰＳ組炎癥因子蛋白表達(dá)明顯降低，ＶＥ組相對于對照組沒有明顯變化（Ｐ＊＜??０．０５，Ｐ＊＊＜０．０１）?；?２Ｄ：用ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ｉｐｅｃ－ｊ２細(xì)胞中炎癥因子的基因水平表達(dá)，同樣ＬＰＳ??組相對于對照組

３－１Ｃ：用ＲＴ－ＰＣＲ驗(yàn)證ｉｐｅｃ－ｊ２細(xì)胞系中，ＶＥ組，ＬＰＳ組，ＶＥ＋ＬＰＳ組對結(jié)構(gòu)蛋白的影響。（Ｐ＊＜??０．?０５，?Ｐ＊?dú)?＜?０．?０１）??３．?３．?２通過免疫熒光技術(shù)檢測維生素Ｅ對結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)和定位??用２０｜〇＿Ｍ維生素Ｅ處理ｉｐｅｃ－ｊ２細(xì)胞，ＶＥ組相對于對照組，結(jié)構(gòu)蛋白ｃｌａｕｄｉｎ－１??的熒光強(qiáng)度和完整性都有明顯的提高。ＬＰＳ組對結(jié)構(gòu)蛋白破壞明顯，不僅熒光強(qiáng)??度降低，而且蛋白間的連接完整性也收到了破壞。維生素Ｅ＋ＬＰＳ組中，ｄａｕｄｉｎ－１??相對于ＬＰＳ組表達(dá)量明顯上升，網(wǎng)狀的破壞也得到了改善（圖Ａ）。同樣對結(jié)??構(gòu)蛋白ｚｏ－１也進(jìn)行了檢測，ＶＥ組相對于對照組，結(jié)構(gòu)蛋白ｚｏ－１的熒光強(qiáng)度和??完整性都有明顯的提高。ＬＰＳ組對結(jié)構(gòu)蛋白破壞明顯，不僅熒光強(qiáng)度降低，而且??蛋白間的連接完整性也收到了破壞。維生素Ｅ＋ＬＰＳ組中，ｚｏ－１相對于ＬＰＳ組表??達(dá)量明顯上升，網(wǎng)狀的破壞也得到了改善（圖Ｂ）。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]緊密連接蛋白與腸黏膜屏障損傷研究進(jìn)展[J]. 馬軍宏,于向陽,張楠,周振理.  中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志. 2015(01)
[2]精氨酸對仔豬腸道機(jī)械屏障的影響及相關(guān)機(jī)理[J]. 姜海龍,秦貴信,車東升,谷琳琳,張海全,趙金波.  吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(01)
[3]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合維生素E對急性腎損傷炎癥反應(yīng)的抑制作用[J]. 趙雷,馮業(yè)童,董超,周余來,劉朋飛.  中國病理生理雜志. 2014(10)
[4]維生素E對急行軍后外周血細(xì)胞因子濃度的影響[J]. 張文,楊光,朱紅霞,趙躍萍,崔雪元,邰賀.  武警后勤學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2014(09)
[5]Bovine immunoglobulin protein isolates for the nutritional management of enteropathy[J]. Bryon W Petschow,Anthony T Blikslager,Eric M Weaver,Joy M Campbell,Javier Polo,Audrey L Shaw,Bruce P Burnett,Gerald L Klein,J Marc Rhoads.  World Journal of Gastroenterology. 2014(33)
[6]維生素E對LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷中氧化應(yīng)激的影響[J]. 張?zhí)旖?李雪飛.  湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2013(01)
[7]Intestinal mucosal atrophy and adaptation[J]. Darcy Shaw,Kartik Gohil,Marc D Basson.  World Journal of Gastroenterology. 2012(44)
[8]腸道屏障功能與細(xì)菌移位[J]. 何桂珍.  協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志. 2012(03)
[9]維生素E對育成金定鴨生長及免疫和抗氧化指標(biāo)的影響[J]. 武江利,王安,張養(yǎng)東.  動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào). 2008(06)
[10]維生素E對氧化應(yīng)激及相關(guān)慢性病的影響[J]. 汪求真,馬愛國.  國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊). 2008(06)

博士論文
[1]色氨酸調(diào)節(jié)慢性不可預(yù)知應(yīng)激動(dòng)物腸道屏障及免疫功能的機(jī)制研究[D]. 岳云雙.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]HO-1/CO通過調(diào)控TLR4/NF-κB修復(fù)膽汁淤積肝損傷腸屏障破壞的研究[D]. 張麗靜.大連醫(yī)科大學(xué) 2017
[3]水通道蛋白3和緊密連接蛋白的表達(dá)測定及在腸道屏障中的作用[D]. 栗鳳霞.山西大學(xué) 2016



本文編號：2986944