目的:臨床治療中許多疾病的產(chǎn)生和發(fā)展都與腸黏膜屏障功能有關(guān),腸黏膜上皮細(xì)胞之間的連接方式是主要緊密連接,對(duì)維持腸黏膜屏障機(jī)械結(jié)構(gòu)完整和正常功能發(fā)揮起重要作用。腸道黏膜屏障機(jī)理十分復(fù)雜,主要由四個(gè)部分化學(xué)屏障,生物屏障,機(jī)械屏障,及免疫屏障組成。腸上皮細(xì)胞與細(xì)胞間形成的完整連接構(gòu)成了機(jī)械屏障的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)腸道機(jī)械屏障在各種類型的炎癥性腸道疾病的發(fā)病的過程和原因都有關(guān)鍵的作用,如果炎癥反應(yīng)得到控制同時(shí)腸道屏障損傷也會(huì)有所緩解,最終會(huì)使得腸道通透性的改善。本試驗(yàn)旨在探討維生素E及其衍生物對(duì)緊密連接中結(jié)構(gòu)蛋白以及脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的損傷后緊密連接中結(jié)構(gòu)蛋白的影響。方法:本實(shí)驗(yàn)選用豬小腸上皮細(xì)胞系ipec-j2細(xì)胞系和結(jié)構(gòu)與生化特點(diǎn)類似于人類小腸上皮細(xì)胞的caco2細(xì)胞系,用不同濃度的維生素E處理正常組細(xì)胞和LPS組細(xì)胞,進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。本試驗(yàn)探討了維生素E衍生物Tocofersolan對(duì)ipec-j2細(xì)胞系中緊密連接蛋白的影響以及衍生物與維生素的作用的對(duì)比。同時(shí)還研究了,用斷奶仔豬作為動(dòng)物模型,將斷奶兩周的仔豬經(jīng)過添加不同濃度的維生素E喂養(yǎng)2周,檢測(cè)仔豬的體重及血樣指標(biāo)的變化,分析腸道粘... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１：維生素Ｅ上調(diào)對(duì)ｉｐｅｃ－ｊ２細(xì)胞系和ｃａｃｏ２細(xì)胞系結(jié)構(gòu)蛋白的表迗：１Ａ：在ｉｐｅｃ－ｊ２??細(xì)胞系中，不同濃度維生素Ｅ處理后緊密連接的結(jié)構(gòu)蛋白ｏｃ?

?§??ｌｉｋｉｉｌ?�。海祝恚椋�??圖３－２：維生素Ｅ能夠抑制脂多糖誘導(dǎo)炎癥因子的高表達(dá)：２Ａ：在ｉｐｅｃ－ｊ２和ｃａｃｏ２細(xì)??胞系中，不同濃度維生素Ｅ處理后ｐ?ＮＦ－ｋＢ的蛋白表達(dá)；２Ｂ：在ｃａｃｏ２細(xì)胞系中，用維生素Ｅ??和ＬＰＳ處理細(xì)胞，將細(xì)胞分為對(duì)照組（未處理組），ＶＥ組，ＬＰＳ組，ＶＥ＋ＬＰＳ組，ＬＰＳ組相對(duì)于??對(duì)照組，炎癥因子ＩＬ－６和ｐ?ＮＦ－ｋＢ的蛋白表達(dá)升高，而ＶＥ＋ＬＰＳ組相對(duì)于ＬＰＳ組炎癥因子蛋白??表達(dá)明顯降低，ＶＥ組相對(duì)于對(duì)照組沒有明顯變化（Ｐ＊＜０．０５，Ｐ＝ｍ＝＜０．０１）?；?２Ｃ：在ｉｐｅｃ－ｊ２??細(xì)胞系中，同上分組，ＬＰＳ組相對(duì)于對(duì)照組，炎癥因子ＩＬ－６和ｐ?ＮＦ－ｋＢ的蛋白表達(dá)升高，而??ＶＥ＋ＬＰＳ組相對(duì)于ＬＰＳ組炎癥因子蛋白表達(dá)明顯降低，ＶＥ組相對(duì)于對(duì)照組沒有明顯變化（Ｐ＊＜??０．０５，Ｐ＊＊＜０．０１）?；?２Ｄ：用ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ｉｐｅｃ－ｊ２細(xì)胞中炎癥因子的基因水平表達(dá)，同樣ＬＰＳ??組相對(duì)于對(duì)照組

３－１Ｃ：用ＲＴ－ＰＣＲ驗(yàn)證ｉｐｅｃ－ｊ２細(xì)胞系中，ＶＥ組，ＬＰＳ組，ＶＥ＋ＬＰＳ組對(duì)結(jié)構(gòu)蛋白的影響。（Ｐ＊＜??０．?０５，?Ｐ＊?dú)?＜?０．?０１）??３．?３．?２通過免疫熒光技術(shù)檢測(cè)維生素Ｅ對(duì)結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)和定位??用２０｜〇＿Ｍ維生素Ｅ處理ｉｐｅｃ－ｊ２細(xì)胞，ＶＥ組相對(duì)于對(duì)照組，結(jié)構(gòu)蛋白ｃｌａｕｄｉｎ－１??的熒光強(qiáng)度和完整性都有明顯的提高。ＬＰＳ組對(duì)結(jié)構(gòu)蛋白破壞明顯，不僅熒光強(qiáng)??度降低，而且蛋白間的連接完整性也收到了破壞。維生素Ｅ＋ＬＰＳ組中，ｄａｕｄｉｎ－１??相對(duì)于ＬＰＳ組表達(dá)量明顯上升，網(wǎng)狀的破壞也得到了改善（圖Ａ）。同樣對(duì)結(jié)??構(gòu)蛋白ｚｏ－１也進(jìn)行了檢測(cè)，ＶＥ組相對(duì)于對(duì)照組，結(jié)構(gòu)蛋白ｚｏ－１的熒光強(qiáng)度和??完整性都有明顯的提高。ＬＰＳ組對(duì)結(jié)構(gòu)蛋白破壞明顯，不僅熒光強(qiáng)度降低，而且??蛋白間的連接完整性也收到了破壞。維生素Ｅ＋ＬＰＳ組中，ｚｏ－１相對(duì)于ＬＰＳ組表??達(dá)量明顯上升，網(wǎng)狀的破壞也得到了改善（圖Ｂ）。??

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：2986944