本文關(guān)鍵詞：人源LXRα的酵母重組表達(dá)與純化及活性鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過(guò)對(duì)人源LXRα基因進(jìn)行畢赤酵母系統(tǒng)重組表達(dá),研究LXRα與相關(guān)配體的生物結(jié)合活性,為今后靶向藥物設(shè)計(jì)奠定基礎(chǔ)。方法:以THP-1細(xì)胞提取總RNA后,再通過(guò)PCR擴(kuò)增得到LXRα基因,構(gòu)建pPICZαA-LXRα表達(dá)載體,并電轉(zhuǎn)化至畢赤酵母X-33。經(jīng)甲醇誘導(dǎo)表達(dá),鎳離子親和層析柱純化獲得重組蛋白,采用ELISA方法鑒定了重組蛋白的活性與功能。結(jié)果:LXRα基因片段成功克隆至表達(dá)載體pPICZαA,通過(guò)畢赤酵母X-33的甲醇誘導(dǎo)及鎳離子親和層析純化得到P.rLXRα蛋白。ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示P.rLXRα能夠很好的與羥基膽固醇結(jié)合。結(jié)論:成功構(gòu)建了pPICZαA-LXRα表達(dá)載體,并在畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)了分泌表達(dá),表達(dá)純化的LXRα重組蛋白具有良好的結(jié)合羥基膽固醇活性,為今后靶向藥物設(shè)計(jì)奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：動(dòng)脈粥樣硬化 LXRα 酵母重組表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q78;R91
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 前言8-22
• 1.1 動(dòng)脈粥樣硬化治病機(jī)制8-12
• 1.1.1 炎癥細(xì)胞與動(dòng)脈粥樣硬化8-10
• 1.1.2 血管壁細(xì)胞與動(dòng)脈粥樣硬化10-12
• 1.2 動(dòng)脈粥樣硬化治療策略12-14
• 1.3 膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的研究現(xiàn)狀14-15
• 1.4 ABCA1研究進(jìn)展15-19
• 1.4.1 ABCA1的結(jié)構(gòu)和功能15-17
• 1.4.2 ABCA1的表達(dá)調(diào)節(jié)17-18
• 1.4.3 ABCA1的功能18-19
• 1.5 LXRΑ研究進(jìn)展19-21
• 1.5.1 LXRs ( Liver X Receptor a/β)概述19-20
• 1.5.2 LXRα的功能與調(diào)控20-21
• 1.6 結(jié)束語(yǔ)21-22
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法22-35
• 2.1 儀器22
• 2.2 試劑與配制22-23
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法23-35
• 2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)及凍存23-24
• 2.3.2 基因調(diào)取24-25
• 2.3.3 LXRα酵母表達(dá)載體的構(gòu)建25-30
• 2.3.4 LXRα酵母表達(dá)菌的構(gòu)建30-32
• 2.3.5 目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化32-33
• 2.3.6 ELISA法鑒定P.r LXRα重組蛋白生物學(xué)活性33-35
• 第三章 結(jié)果與討論35-41
• 3.1 總RNA純度分析35
• 3.2 LXRΑ基因片段的獲得35-36
• 3.3 PCR及雙酶切方法鑒定目的基因與T載體連接情況36-37
• 3.4 重組T載體測(cè)序鑒定37
• 3.5 PCR及雙酶切鑒定目的基因與PPICZΑA表達(dá)載體連接情況37
• 3.6 原位雙膜法快速篩選陽(yáng)性表達(dá)菌株37-38
• 3.7 P.RLXRΑ重組蛋白在畢赤酵母X-33 中的誘導(dǎo)表達(dá)及純化38-39
• 3.8 ELISA方法檢測(cè)P.RLXRΑ蛋白與羥基膽固醇的結(jié)合活性39-40
• 3.9 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 論文作者簡(jiǎn)歷45-46
• 致謝46

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本文編號(hào)：296801