本文關(guān)鍵詞：肝素及低分子肝素質(zhì)量控制相關(guān)對照品及標(biāo)準(zhǔn)試劑的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝素是廣泛應(yīng)用于心腦血管疾病和血液透析臨床治療的最有效抗凝藥物,除具有抗凝作用外,還有許多其他的生物活性及臨床用途。低分子肝素是由肝素為原料進(jìn)一步加工而成的一大類抗血栓藥物,臨床用途更為廣泛,已成為治療急性靜脈血栓和急性慣性冠脈綜合癥等疾病的首選藥物,占抗栓類藥物的市場份額不斷增大。我國擁有全球最豐富的肝素原料資源,是肝素鈉原料藥生產(chǎn)和出口的大國。而隨著對低分子肝素的深入研究,國內(nèi)低分子肝素類產(chǎn)品的生產(chǎn)廠家也在不斷增加。肝素及低分子肝素的質(zhì)量直接影響到這兩個品種的產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程,關(guān)系到人民群眾的用藥安全�？刂坪酶嗡丶暗头肿痈嗡氐馁|(zhì)量至關(guān)重要。2015年版《中國藥典》對肝素鈉進(jìn)行了修訂,增加了分子量及分子量分布測定項目,并把活性測定方法由凝血法改為生色底物法。而新版國家標(biāo)準(zhǔn)也依據(jù)品種的不同對低分子肝素進(jìn)行了分類提高。細(xì)化了分子量與分子量分布、活性測定等項目的限度和操作過程,并增加了鑒別、雜質(zhì)檢查等項目。這些檢驗項目中需用到的對照品、標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)準(zhǔn)試劑等目前只能依靠國外進(jìn)口,實驗成本很高,質(zhì)量難以控制,急需國產(chǎn)化。本文旨在對肝素及低分子肝素重要質(zhì)量控制項目中使用到的對照品及標(biāo)準(zhǔn)試劑進(jìn)行研究,通過前期的原料篩選,建立合適的標(biāo)定方法,制備標(biāo)定肝素及低分子肝素的國家對照品及標(biāo)準(zhǔn)試劑,用以規(guī)范檢驗部門及生產(chǎn)企業(yè)的實驗操作,提高國內(nèi)肝素及低分子肝素的質(zhì)量,增強(qiáng)國產(chǎn)肝素及低分子肝素在國際市場上的競爭力。本文共分為以下三個部分的內(nèi)容:第一部分針對分子量及分子量分布檢測項目,建立肝素及低分子肝素的分子量測定用對照品的標(biāo)定方法,對兩個品種的分子量測定用待標(biāo)品進(jìn)行標(biāo)定。肝素及低分子肝素的分子量與分子量分布與其抗凝活性有著密切關(guān)系。目前常用的分子量測定方法為高效凝膠色譜法,需使用分子量對照品。本文分別溯源到USP肝素分子量對照品與WHO低分子肝素分子量對照品,采用高效凝膠色譜法對這兩個品種的分子量待標(biāo)品進(jìn)了標(biāo)定賦值。并使用這兩個品種的待標(biāo)品與國際對照品,對國內(nèi)主要生產(chǎn)廠家的肝素及低分子肝素樣品的分子量及分子量分布進(jìn)行了測定,結(jié)果一致,無顯著差異。肝素及低分子肝素分子量待標(biāo)品可作為分子量測定首批國家對照品使用。第二部分針對活性測定項目中使用的兩個生色底物進(jìn)行標(biāo)定。2015版《中國藥典》中的肝素活性測定項目及新版國家標(biāo)準(zhǔn)中的低分子肝素活性測定項目均收錄了抗Ⅹa因子及抗Ⅱa因子效價測定方法。該方法需要使用兩個小肽類生色底物,分別為S-2765及S-2238。本文根據(jù)底物的性質(zhì)及用途分別設(shè)置了鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定、低分子肝素活性測定等項目,并與進(jìn)口底物實驗結(jié)果進(jìn)行了對比研究。結(jié)果表明,待標(biāo)底物與進(jìn)口底物結(jié)構(gòu)一致,活性測定結(jié)果無顯著性差異。待標(biāo)底物的雜質(zhì)含量在可控范圍內(nèi)。待標(biāo)底物可作為活性測定用標(biāo)準(zhǔn)試劑使用。第三部分針對依諾肝素鈉的特征結(jié)構(gòu)—非還原端的1,6-脫水衍生物含量測定項目中使用的肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ進(jìn)行標(biāo)化。肝素酶對依諾肝素鈉的酶解效果對本實驗的結(jié)果影響較大。本文針對肝素酶的性質(zhì)、使用特點及用途,分別設(shè)置項目對蛋白濃度、分子量、純度及酶活進(jìn)行了研究,建立了標(biāo)化方法并賦值,結(jié)果符合要求,標(biāo)化的三個肝素酶可以作為依諾肝素鈉1,6-脫水衍生物含量測定的標(biāo)準(zhǔn)試劑使用。本文對肝素及低分子肝素重要質(zhì)量控制項目中需要使用的對照品以及標(biāo)準(zhǔn)試劑進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化研究。標(biāo)定出肝素及低分子肝素分子量測定用首批國家對照品,填補(bǔ)了我國這兩個品種的分子量測定用對照品的空白。標(biāo)定出肝素及低分子肝素活性測定用生色底物標(biāo)準(zhǔn)試劑及依諾肝素鈉1,6-脫水衍生物含量測定用肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)試劑,改善了依賴進(jìn)口試劑的現(xiàn)狀。本文標(biāo)定的對照品及標(biāo)準(zhǔn)試劑可用于肝素及低分子肝素的生產(chǎn)質(zhì)量控制,有助于這兩個品種的規(guī)范管理,同時也為其他類似品種的對照品標(biāo)定以及標(biāo)準(zhǔn)試劑的制備標(biāo)化提供了研究思路和啟示。
【關(guān)鍵詞】：肝素 低分子肝素 對照品 分子量 生色底物 肝素酶
【學(xué)位授予單位】：中國食品藥品檢定研究院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R927
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略詞對照表11-13
• 第一章 前言13-18
• 一、課題研究背景及立題依據(jù)13-16
• 1.肝素簡介13-14
• 2.低分子肝素簡介14-15
• 3.肝素及低分子肝素的質(zhì)控現(xiàn)狀15-16
• 二、課題研究目標(biāo)16
• 三、課題難點及創(chuàng)新點16-18
• 第二章 肝素及低分子肝素分子量及分子量分布首批國家對照品的標(biāo)定18-41
• 1.概述及標(biāo)定思路18-19
• 2.相對法標(biāo)定LMWH分子量及分子量分布首批國家對照品19-28
• 3.絕對法標(biāo)定LMWH分子量及分子量分布首批國家對照品28-33
• 4.肝素分子量與分子量分布首批國家對照品的標(biāo)定33-39
• 5.本章小結(jié)39-41
• 第三章 肝素與低分子肝素抗FⅩa活性測定用底物S-2765 及抗FⅡa活性測定用底物S-2238 的標(biāo)化41-64
• 1.概述與標(biāo)定思路41-43
• 2.活性測定用底物的最大吸收波長測定43-45
• 3.活性測定用底物氨基酸序列的測定45-47
• 4.MALDI-TOF-MS法測生色底物的分子量47-48
• 5.活性測定用底物游離pNA基團(tuán)及純度測定48-53
• 6.活性測定用底物米氏常數(shù)Km的測定53-59
• 7.使用待標(biāo)底物與進(jìn)口底物測定低分子肝素活性結(jié)果對比59-63
• 8.含量測定63
• 9.本章小結(jié)63-64
• 第四章 依諾肝素鈉 1,6-脫水衍生物含量測定用肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)試劑的標(biāo)化 6264-82
• 1.概述及標(biāo)定思路64-66
• 2.SDS-PAGE法測定肝素酶分子量及純度66-68
• 3.MALDI-TOF-MS法測定肝素酶分子量68-71
• 4.肝素酶蛋白含量測定71-73
• 5.肝素酶活力的測定73-75
• 6.使用待標(biāo)肝素酶試劑測定依諾肝素鈉 1,6-脫水衍生物含量75-79
• 7.穩(wěn)定性考察79-81
• 8.本章小結(jié)81-82
• 論文總結(jié)82-84
• 參考文獻(xiàn)84-87
• 致謝87

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 李京,范慧紅,徐康森;低分子肝素藥用現(xiàn)狀及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)概況[J];中國生化藥物雜志;2004年01期

2 李京;范慧紅;;微量生色底物法測定肝素鈉抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性[J];中國生化藥物雜志;2010年01期

3 高寧國,程秀蘭,楊敬,張樹政;肝素結(jié)構(gòu)與功能的研究進(jìn)展[J];生物工程進(jìn)展;1999年05期

4 李曄;吳敬君;葉逢春;蘇楠;張

本文編號：296280