發(fā)布時間：2021-01-04 14:28

　　目的建立檢測地特胰島素原料中宿主DNA殘留量的熒光定量核酸擴(kuò)增（Real-time PCR）方法并進(jìn)行驗(yàn)證,用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。方法選擇釀酒酵母5s RNA作為靶基因設(shè)計引物,提取地特胰島素原料中的殘留宿主DNA,采用Real-time PCR SYBRGreen染料法對標(biāo)準(zhǔn)DNA和樣品進(jìn)行測定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并分析樣品中的DNA殘留量。對建立的方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證,并測定3批地特胰島素原料中的殘留宿主DNA。結(jié)果釀酒酵母基因組DNA質(zhì)量濃度在0.18～180000ng/mL線性良好（r²=0.998 5）;回收率均在80.0%～106.3%,檢測3批地特胰島素原料的宿主DNA殘留量均低于進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)限度。結(jié)論該方法可用于釀酒酵母生產(chǎn)的地特胰島素原料中殘留宿主DNA的定量測定。 

【文章來源】：現(xiàn)代藥物與臨床. 2020年07期

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

熔解曲線分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Real-time PCR法檢測注射用門冬酰胺酶制劑中大腸桿菌核苷酸殘留[J]. 孫允芳,謝育媛,郭江紅.  藥物分析雜志. 2017(02)
[2]甘精胰島素對比地特胰島素治療2型糖尿病的Meta分析[J]. 范崢,郭桂明,李文喆,薛穎,王宏蕾,李璐暘,肖薇.  中國藥房. 2016(18)
[3]熒光定量PCR法測定重組人干擾素α2b原液中宿主DNA的殘留[J]. 蘇喆,周朝東,黃哲甦,尉然.  中國生化藥物雜志. 2016(04)
[4]地特胰島素治療兒童和青少年1型糖尿病的療效觀察[J]. 楊萍,魏祎,陳艷霞.  中華實(shí)用兒科臨床雜志. 2014 (15)
[5]熒光定量PCR檢測重組新蛭素中畢赤酵母基因組DNA的殘留量[J]. 劉晶晶,郭瑩瑩,李艷琪,王文文,吳祖澤,靳繼德.  生物技術(shù)通訊. 2014(03)
[6]應(yīng)用SYBR GreenⅠ溶解曲線檢測食源性單增李斯特菌[J]. 王昊宇,張公亮,侯紅漫.  食品工業(yè)科技. 2013(10)
[7]中國倉鼠卵巢細(xì)胞DNA國家標(biāo)準(zhǔn)品的研制[J]. 王蘭,高凱,范文紅,畢華,付志浩,李永紅,饒春明.  中國藥學(xué)雜志. 2013(01)
[8]回到基礎(chǔ)——地特胰島素的安全性評價[J]. 陸菊明.  中國糖尿病雜志. 2012(08)
[9]關(guān)于生物制品殘余DNA質(zhì)量控制問題[J]. 王蘭,王軍志.  中國新藥雜志. 2011(08)
[10]大量Pichia pastoris酵母基因組DNA的提取[J]. 劉曉志,高健,韓柱,王志明,陳偉斌.  生物技術(shù)通報. 2011(04)



本文編號：2956925