前言:惡性腫瘤是一類嚴(yán)重危害人類健康的疾病。盡管隨著惡性腫瘤發(fā)病機(jī)制的逐步闡明,越來越多的治療手段和治療靶點(diǎn)被應(yīng)用到臨床,但是惡性腫瘤總的治療效果還是差強(qiáng)人意,5年總生存率不足20%。而且存在單一用藥效果差,療效不持久,單一分子靶向治療存在脫靶效應(yīng)等缺點(diǎn),臨床上亟需開發(fā)新的治療方法,尤其是聯(lián)合用藥的治療方案。溶瘤病毒(OVs)于上個(gè)世紀(jì)中期首次被報(bào)道,是一類自然存在的或人工編輯的病毒,對腫瘤細(xì)胞能特異性殺傷。我校特聘教授劉濱磊自主研發(fā)的溶瘤病毒oHSV2就是這樣一種OVs。臨床前研究表明,oHSV2能特異性地殺滅幾乎所有腫瘤細(xì)胞,有望成為一種廣譜抗癌藥物,但是對于其聯(lián)合用藥方案目前研究較少。氯丙嗪是第一代吩噻嗪類抗精神病藥物,是一種多巴胺受體阻斷劑。本課題旨在探討II型單純皰疹溶瘤病毒oHSV2聯(lián)合多巴胺受體阻滯劑氯丙嗪作用惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的體外協(xié)同效應(yīng),并探討其可能的作用機(jī)制,為聯(lián)合應(yīng)用這兩種藥物治療惡性膠質(zhì)瘤提供前期實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的:研究oHSV2聯(lián)合氯丙嗪對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251惡性生物學(xué)行為的抑制作用。方法:1、采用MTT法測定oHSV2、氯丙嗪單獨(dú)應(yīng)用及二者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251增殖能力的抑制作用。2、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測oHSV2、氯丙嗪單獨(dú)應(yīng)用及二者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251離體克隆形成能力的影響。3、Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測oHSV2、氯丙嗪單獨(dú)應(yīng)用及二者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251侵襲、遷移能力的影響。4、依據(jù)Chou-Talalay中效原理,以聯(lián)合給藥分析軟件CalcuSyn 2.1計(jì)算協(xié)同作用指數(shù)(CI)值,評價(jià)聯(lián)合作用效果。結(jié)果:1、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示oHSV2、氯丙嗪單藥對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251的抑制作用具有濃度依賴性。二者聯(lián)合作用72 h后,增殖抑制率明顯升高,抑制作用顯著增強(qiáng)。應(yīng)用CalcuSyn 2.1軟件分析協(xié)同效果,二者在很大范圍內(nèi)具有協(xié)同增強(qiáng)作用。2、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示oHSV2、氯丙嗪單藥都能降低惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251的離體克隆形成能力,而聯(lián)合用藥顯著降低惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251的離體克隆形成能力,兩者有協(xié)同增強(qiáng)作用。3、Transwell小室遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)顯示oHSV2、氯丙嗪單藥都能降低惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251的侵襲和遷移能力,而聯(lián)合用藥顯著降低惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251的侵襲和遷移能力,兩者有協(xié)同增強(qiáng)作用。結(jié)論:oHSV2和氯丙嗪聯(lián)合給藥對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251的惡性生物學(xué)行為有協(xié)同抑制作用。
【學(xué)位單位】：湖北科技學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

p53 蛋白表達(dá)水平[26,27]，研究發(fā)現(xiàn)吩噻嗪類抗蛋白激酶 1(PDKl)活性，從而導(dǎo)致蛋白激酶 Akt 的激酶的活性而抑制人卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞酰肌醇 3-激酶(P13K)，表皮生長因子受體(EG2)的活化。更重要的是有研究發(fā)現(xiàn)氯丙嗪等抗母細(xì)胞瘤、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌等腫瘤細(xì)胞毒效應(yīng)，而對正常細(xì)胞無細(xì)胞毒效應(yīng)[25,30]提供了有力證據(jù)。

oHSV2 CPZ oHSV2+CPZc (MOI) fac (μM) fa C(MOI+μΜ) fa CI0.01 0.151 5 0.152 0.01+5 0.424 1.2750.1 0.431 10 0.334 0.1+10 0.682 1.0131 0.579 20 0.459 1+20 0.904 0.97510 0.663 40 0.548 10+40 0.98 0.410100 0.75 80 0.89 100+80 0.991 0.710

圖 3-2 oHSV2 與氯丙嗪聯(lián)合用藥對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U251 的協(xié)同效應(yīng)Fig.3-2 The synergistic effects of oHSV2 and chlorpromazine onU251 cells3.2 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果平板集落形成試驗(yàn)（PCF），在非常低的細(xì)胞密度的情況下，單個(gè)細(xì)胞接種后單個(gè)細(xì)胞附著于上述平板上得以生存，以形成克隆細(xì)胞集落，最后檢測根據(jù)該細(xì)的增殖能力和數(shù)量以及集落形成的大小。在正常情況下，僅腫瘤細(xì)胞可增殖形成隆，但是最終形成的克隆細(xì)胞必須是貼壁細(xì)胞和增殖細(xì)胞�？寺⌒纬蓪�(shí)驗(yàn)已經(jīng)主體現(xiàn)在許多文獻(xiàn)[55-56]中，體現(xiàn)了個(gè)體細(xì)胞的生存能力和增殖能力兩個(gè)重要特征。該本實(shí)驗(yàn)操作方便�？傊寺⌒纬蓪�(shí)驗(yàn)是研究腫瘤細(xì)胞增殖能力的重要研究方法常常被應(yīng)用于藥物篩查。通過細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)，如(Fig.3-3)所示，經(jīng) oHSV2 和氯丙嗪處理過的 U251它的克隆形成的數(shù)量與未經(jīng) oHSV2 和氯丙嗪處理 U251 的對照組相比要低的多，
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本文編號：2874800