鏈霉菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)豐富,活性廣泛,常具有抗菌、抗腫瘤、抗病毒、免疫抑制等生物活性,是微生物藥物的重要來源。人們從土壤鏈霉菌中發(fā)現(xiàn)新穎結(jié)構(gòu)及活性物質(zhì)的幾率越來越小,昆蟲共生微生物一般存在于昆蟲腸道、外骨骼、特殊器官或者細胞中,這種特殊的生境為結(jié)構(gòu)獨特、活性多樣的代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生提供了可能。因此,對昆蟲鏈霉菌化學(xué)成分的研究可以為研發(fā)新藥提供潛在的先導(dǎo)化合物,具有一定的研究價值。黃柄壁泥蜂膜翅目、泥蜂科昆蟲,多獨棲、捕食蜘蛛與其它昆蟲幼蟲。采用稀釋涂布平板法從黃柄壁泥蜂幼蜂體內(nèi)外共分離得到22株放線菌。經(jīng)16S rDNA的序列分析,結(jié)果表明大多數(shù)菌株屬于鏈霉菌屬。采用濾紙片法和平板對峙法抗菌活性檢測,發(fā)現(xiàn)2株對枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌有良好的抑菌效果,其他的菌株活性很弱或者無活性。本論文對兩株具有較強抗菌活性的鏈霉菌菌株1512-3和1510-2的次級代謝產(chǎn)物進行了初步研究。鏈霉菌1512-3基因組測序,通過antiSMASH軟件分析,發(fā)現(xiàn)其含有23個次級代謝產(chǎn)物生物合成基因簇,并對基因簇合成的次級代謝產(chǎn)物進行了預(yù)測,包括萘啶霉素、淺內(nèi)紅霉素、拒霉素等,采用柱色譜等分離技術(shù)從發(fā)酵液中分離得到4個化合物,采用HR-ESI-MS及NMR等波譜數(shù)據(jù)分析鑒定其結(jié)構(gòu)為resistomycin(拒霉素)、genistein(染料木素)、daidzein(大豆甙元)和 pyrrole-2-carboxylic acid。Resistomycin對銅綠假單胞,金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌都沒有活性,pyrrole-2-carboxylicacid對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞都有良好的抗菌活性,其抑菌圈分別為9 mm、10.5 mm、11mm。采用MTT法對細胞細胞毒性進行檢測。Resistomycin 對 MCF-7、MCF-10A、MDA-MB-231 這三株人乳腺癌細胞的增殖都具有較好的抑制作用,IC50分別為1.32 μM、2.47 μM、0.64μM。鏈霉菌1510-2基因組測序,通過antiSMASH分析,發(fā)現(xiàn)含有32個次級代謝產(chǎn)物的生物合成基因簇,并對基因簇合成的次級代謝產(chǎn)物進行了預(yù)測,包括抗霉素A、噻可拉林和放線菌素等。采用柱色譜等分離技術(shù)從發(fā)酵液中分離得到7個化合物,HR-ESI-MS及NMR、X-RAY等數(shù)據(jù)分析鑒定其結(jié)構(gòu)為三個新的三聯(lián)苯化合物SGr-02、SGr-06、SGr-07、放線菌素V、放線菌素D及兩個酸性化合物pyrrole-2-carboxylic acid、(E)-3-甲硫基丙烯酸。采用濾紙片法活性檢測,放線菌素V對革蘭氏陽性菌銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌有抑菌效果,抑菌圈分別為42 mm、30 mm、38 mm;其MIC分別為0.976 μg/mL、3.906 μg/mL、1.953 μg/mL。而對大腸桿菌沒有活性,放線菌V還對多種致病真菌都有活性。又對SGr-02、SGr-06、SGr-07這三個測試了已糖激酶Ⅱ活和人肝癌細胞系(HEPG-2、SMMC-7721、PLC-PRF-5)活性,發(fā)現(xiàn)這三個化合物對已糖激酶Ⅱ和人肝癌細胞都有抑制作用。化合物SGr-02對已糖激酶Ⅱ和PLC-PRF-5肝癌細胞抑制作用活性最強(IC50分別為7.959 μM、1.944 μM)。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R915
【部分圖文】：

這些產(chǎn)物是基因簇所編碼的，這些基因簇一旦能夠在菌體細胞中表達，那么??該基因所表達的產(chǎn)物就可以通過搖瓶大批量的發(fā)酵生產(chǎn)萃取粗提物，并利用ＨＰＬＣ－ＭＳ??分析，完成對物質(zhì)的結(jié)構(gòu)進一步鑒定（圖１）［１９］?＿??ｐｒｅｄｉｃｔ８〇ｎ?＞??ｘ?Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ??人??圖１生物信息學(xué)輔助分析過程來自參考文獻１９??在確定基因序列后，用生物信息學(xué)分析基因組序列進行功能挖掘，盡可能地預(yù)測酶的??結(jié)構(gòu)。生物信息學(xué)軟件主要包括?ＢＬＡＳＴ［３１＿３２丨?ＧｅｎｏｍｅＴｈｒｅａｄｅｒ［３３＿３４］，?ＨＭＭＥＲ［３＇?ＮＯＲ??ＩＮＥ［３６］，ＳＢＳＰＫＳ［３＇?ａｎｔｉＳＭＡＳＨ［３８］，ＮＲＰＳｓｐ［３９］，ＮＲＰＳｐｒｅｄｉｃｔｏｒ２［４０］，ＰＫＳ／ＮＲＰＳ?Ａｎａｌｙｓ??ｉｓ［４１］，這些數(shù)據(jù)庫和分析軟件在基因組挖掘的過程中有著很重要的作用，比如對發(fā)現(xiàn)生??３??

息分析的前體）加入培養(yǎng)基中，從而能夠識別天然產(chǎn)物。通過同位素標記技術(shù)發(fā)現(xiàn)熒假單胞菌通過生物代謝產(chǎn)生具有生物活性的ｏｒｆａｍｉｄｅｓ?Ａ－Ｃ化合物，利用生物信息學(xué)件預(yù)測出ｏｒｆａｍｉｄｅ?Ａ的結(jié)構(gòu)，然后在發(fā)酵液中添加用同位素標記好的亮氨酸，最終測發(fā)現(xiàn)目標產(chǎn)物，是從ＰＦ－５的培養(yǎng)中分離出來的，稱為ｏｒｆａｍｉｄｅＡ，它被證明在產(chǎn)細菌的活動中起作用，并顯示出抗菌活性［４４］。如下圖２??

ｎ．圖３異源表達的方法??基因敲除技術(shù)方法很直觀的分析預(yù)測基因功能，避免了生物信息學(xué)預(yù)測結(jié)果的不定性，利用基因敲除技術(shù)把生物體特定功能的本來就有的基因失活缺失，表達產(chǎn)物無產(chǎn)生，與野生型相比，利用色譜法分析無法檢測基因敲除突變體的目標產(chǎn)物，從而對
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王磊;方玉春;劉紅兵;朱天驕;顧謙群;朱偉明;;海綿共附生微生物活性次級代謝產(chǎn)物的研究進展[J];中國海洋藥物;2005年06期

2 王海強;安向向;侯淑芬;郝盼龍;張秀敏;;39株內(nèi)生放線菌次級代謝產(chǎn)物的合成潛能[J];河北大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2017年03期

3 韋洪娟;林貞建;李德海;顧謙群;朱天驕;;單菌多次級代謝產(chǎn)物方法及其在微生物代謝產(chǎn)物研究中的應(yīng)用[J];微生物學(xué)報;2010年06期

4 王金翠;孫寶盛;;污水生物處理中微生物次級代謝產(chǎn)物的研究進展[J];給水排水;2007年S1期

5 宋琦;;你了解次級代謝產(chǎn)物嗎?[J];消費指南;2011年07期

6 潘園園;李二偉;車永勝;劉鋼;;絲狀真菌次級代謝產(chǎn)物的研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢[J];菌物學(xué)報;2015年05期

7 雷秀清;李力;黃建忠;;提高放線菌次級代謝產(chǎn)物產(chǎn)量方法的研究進展[J];生物技術(shù)通報;2014年05期

8 ;微生物的次級代謝產(chǎn)物——質(zhì)體控制與各種結(jié)構(gòu)產(chǎn)物[J];抗菌素;1976年03期

9 王淑霞;朱天驕;盧圳域;顧謙群;朱偉明;;海洋新放線菌及其次級代謝產(chǎn)物研究進展[J];中國抗生素雜志;2007年09期

10 張慶榮;;關(guān)于次級代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的遺傳機制的研究[J];國外藥學(xué)(抗生素分冊);1980年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 楊遂群;五株海藻及紅樹林來源真菌次級代謝產(chǎn)物的分子多樣性挖掘與生物活性研究[D];中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院海洋研究所);2018年

2 劉呈雄;真菌Paraconiothyrium brasiliense次級代謝產(chǎn)物及其代謝調(diào)控研究[D];武漢大學(xué);2015年

3 張海龍;海洋微生物次級代謝產(chǎn)物的研究[D];沈陽藥科大學(xué);2004年

4 黃永富;六種海洋微生物次級代謝產(chǎn)物的研究[D];沈陽藥科大學(xué);2006年

5 姚遙;五種海洋微生物次級代謝產(chǎn)物的研究[D];沈陽藥科大學(xué);2007年

6 季乃云;凹頂藻次級代謝產(chǎn)物及其生物活性和化學(xué)分類學(xué)研究[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2008年

7 丁玲;八株海洋微生物次級代謝產(chǎn)物的研究[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2008年

8 趙薇;鏈霉菌產(chǎn)生的除草霉素新組分發(fā)現(xiàn)及其他活性次級代謝產(chǎn)物研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

9 丁輝;三株海洋微生物活性次級代謝產(chǎn)物研究[D];浙江大學(xué);2017年

10 吳廣畏;三株不同海洋生境來源真菌次級代謝產(chǎn)物及生物活性研究[D];中國海洋大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊麗;三株放線菌次級代謝產(chǎn)物的研究[D];南京大學(xué);2018年

2 王儉雄;四株放線菌次級代謝產(chǎn)物的研究[D];山東大學(xué);2018年

3 宋亞潔;兩株泥蜂共生鏈霉菌次級代謝產(chǎn)物及其生物活性研究[D];山東大學(xué);2018年

4 余志銀;四株藥用植物相關(guān)放線菌次級代謝產(chǎn)物及活性研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2017年

5 周玥;兩株南極海洋真菌次級代謝產(chǎn)物的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

6 劉叢叢;兩株植物病原真菌的次級代謝產(chǎn)物化學(xué)及生物活性研究[D];河北大學(xué);2017年

7 巫崇婷;海藻內(nèi)生真菌CCH-1農(nóng)用生物活性物質(zhì)的研究[D];青島理工大學(xué);2018年

8 陳正焜;兩株真菌的次級代謝產(chǎn)物研究[D];中國地質(zhì)大學(xué)(北京);2017年

9 周丹;土壤真菌Stachybotrys parvispora HS-FG-843次級代謝產(chǎn)物及其抗腫瘤活性的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 夏麗娟;紅樹林活性真菌的篩選及兩株內(nèi)生真菌次級代謝產(chǎn)物的研究[D];廣東工業(yè)大學(xué);2013年

本文編號：2874358