過敏性疾病是機(jī)體受到抗原刺激引起的組織功能紊亂的病理性免疫反應(yīng),最終導(dǎo)致炎癥以及組織損傷,具有發(fā)作迅速、反應(yīng)強(qiáng)烈等特點(diǎn)。肥大細(xì)胞在過敏性疾病的發(fā)生中發(fā)揮著重要的作用,當(dāng)抗原重復(fù)攻擊機(jī)體時(shí),抗原被抗原遞呈細(xì)胞處理后遞呈給B細(xì)胞,促使B細(xì)胞分泌抗原特異性IgE抗體,其能夠與肥大細(xì)胞表面的受體FCεRI結(jié)合,導(dǎo)致過敏反應(yīng)發(fā)生。目的:探究雙去甲氧基姜黃素對(duì)DNP-IgE/HSA誘導(dǎo)的肥大細(xì)胞系RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒的影響;對(duì)OVA誘導(dǎo)的小鼠過敏性鼻炎模型、Compound 48/80誘導(dǎo)的小鼠過敏性休克模型、OVA誘導(dǎo)的小鼠主動(dòng)性系統(tǒng)免疫性疾病模型的影響。方法:體外實(shí)驗(yàn):1.建立DNP-IgE/HSA誘導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒模型探究不同細(xì)胞密度、DNP-IgE濃度、DNP-IgE刺激時(shí)間、DNP-HSA濃度對(duì)RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒模型建立的影響。2.探究姜黃素類化合物對(duì)RBL-2H3脫顆粒模型的細(xì)胞活力的影響使用上述步驟確定的最佳刺激條件,確定姜黃素類化合物(姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素)各劑量組對(duì)DNP-IgE/HSA誘導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒模型細(xì)胞增殖能力的影響。3.探究姜黃素類化合物對(duì)RBL-2H3脫顆粒模型脫顆粒程度的影響(1)使用上述步驟確定的最佳刺激條件,確定姜黃素類化合物(姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素)各劑量組對(duì)DNP-IgE/HSA誘導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒模型釋放脫顆粒標(biāo)志物β-氨基己糖苷酶(β-HEX)的影響。(2)使用甲苯胺藍(lán)染色法觀察上述受試物對(duì)細(xì)胞脫顆粒程度的影響。(3)使用鬼筆環(huán)肽對(duì)細(xì)胞膜進(jìn)行染色,觀察受試物對(duì)細(xì)胞膜重構(gòu)的影響。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):1.對(duì)OVA誘導(dǎo)的小鼠過敏性鼻炎模型的影響(1)觀察每天攻擊后小鼠的抓鼻次數(shù)。(2)收集血清,測(cè)定其中OVA特異性IgE水平。(3)制作病理切片,分別使用HE、甲苯胺藍(lán)染色,觀察鼻黏膜組織學(xué)改變及肥大細(xì)胞脫顆粒程度。2.對(duì)Compound 48/80誘導(dǎo)的小鼠過敏性休克模型的影響腹腔給予Compound 48/80后,觀察75min內(nèi)各組別小鼠的存活率。3.對(duì)OVA誘導(dǎo)的小鼠主動(dòng)性系統(tǒng)免疫疾病模型的影響最后一次攻擊后,測(cè)定80min內(nèi)各組別小鼠直腸溫度變化。結(jié)果:體外實(shí)驗(yàn):1.DNP-IgE/HSA誘導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒模型的建立最終確定實(shí)驗(yàn)條件為:將RBL-2H3以6×10~5個(gè)/mL鋪于48孔板,貼壁過夜后,棄去上清,加入100ng/mL的DNP-IgE刺激12h后,棄去上清,加入250ng/mL的DNP-HSA激發(fā)1h后,冰浴10min終止反應(yīng),300×g離心10min后,吸取上清50μL加入底物50μL作用1.5h后,測(cè)定405nmOD值。2.對(duì)RBL-2H3脫顆粒模型的細(xì)胞活力的影響姜黃素類化合物(姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素)的各劑量組(6.3μM~73μM)均未降低DNP-IgE/HSA誘導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒模型的細(xì)胞活力。3.對(duì)RBL-2H3脫顆粒模型脫顆粒程度的影響(1)對(duì)肥大細(xì)胞脫顆粒標(biāo)志物β-HEX水平的影響姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素各劑量組均能夠一定程度的降低β-HEX釋放率(OD405nm)。經(jīng)計(jì)算,抑制RBL-2H3細(xì)胞釋放β-HEX IC50分別為姜黃素99.47μM、去甲氧基姜黃素30.15μM、雙去甲氧基姜黃素19.27μM。(2)對(duì)肥大細(xì)胞脫顆粒程度的影響雙去甲氧基姜黃素能夠抑制DNP-IgE/HSA誘導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞形狀的改變,并能夠降低紫色顆粒的釋放。(3)對(duì)肥大細(xì)胞膜重構(gòu)的影響雙去甲氧基姜黃素能夠抑制DNP-IgE/HSA誘導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞膜重構(gòu),進(jìn)而抑制肥大細(xì)胞脫顆粒。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):1.對(duì)OVA誘導(dǎo)的小鼠過敏性鼻炎模型的影響(1)雙去甲氧基姜黃素能夠顯著抑制OVA誘導(dǎo)的過敏性鼻炎小鼠抓鼻次數(shù)(P0.05)。(2)雙去甲氧基姜黃素能夠顯著降低OVA誘導(dǎo)的過敏性鼻炎小鼠血清中OVA特異性IgE水平(P0.05)。(3)雙去甲氧基姜黃素能夠顯著抑制OVA誘導(dǎo)的過敏性鼻炎小鼠鼻黏膜組織學(xué)改變,及肥大細(xì)胞脫顆粒。2.對(duì)Compound 48/80誘導(dǎo)的小鼠過敏性休克模型的影響雙去甲氧基姜黃素能夠顯著增加Compound 48/80誘導(dǎo)的過敏性休克模型小鼠的存活率(P0.05)。3.對(duì)OVA誘導(dǎo)的小鼠主動(dòng)性系統(tǒng)免疫疾病模型的影響雙去甲氧基姜黃素顯著抑制OVA誘導(dǎo)的主動(dòng)性系統(tǒng)免疫疾病小鼠的直腸溫度降低(P0.05)。結(jié)論:1.姜黃素類化合物中,雙去甲氧基姜黃素對(duì)IgE誘導(dǎo)的肥大細(xì)胞激活抑制作用最強(qiáng),其能夠顯著降低肥大細(xì)胞的脫顆粒程度。2.雙去甲氧基姜黃素抑制肥大細(xì)胞介導(dǎo)的過敏性疾病,包括OVA誘導(dǎo)的小鼠過敏性鼻炎、Compound 48/80誘導(dǎo)的小鼠過敏性休克以及抑制OVA誘導(dǎo)的小鼠主動(dòng)性系統(tǒng)免疫疾病。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R96
【文章目錄】：
中文摘要
abstract
縮略詞表
第1章 前言
    1.1 過敏性疾病概述
    1.2 肥大細(xì)胞與過敏性疾病
        1.2.1 肥大細(xì)胞的發(fā)育與分化
        1.2.2 肥大細(xì)胞的激活
        1.2.3 IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞激活的分子機(jī)制
    1.3 抗過敏藥物研究進(jìn)展
        1.3.1 抗組胺藥物
        1.3.2 肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑
        1.3.3 鈣劑
        1.3.4 免疫抑制劑
        1.3.5 天然化合物
    1.4 姜黃素類化合物的研究進(jìn)展
        1.4.1 抗腫瘤作用
        1.4.2 抗炎作用
        1.4.3 抗氧化作用
        1.4.4 神經(jīng)保護(hù)作用
        1.4.5 保護(hù)肺損傷
        1.4.6 抗代謝性疾病
        1.4.7 肝保護(hù)作用
        1.4.8 抗過敏作用
第2章 DNP-IgE/HSA誘導(dǎo)RBL-2H3脫顆粒模型的建立
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞
        2.1.2 試劑及藥物
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 細(xì)胞濃度的確定
        2.2.2 DNP-IgE致敏條件的確定
        2.2.3 DNP-HSA攻擊條件的確定
        2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 DNP-IgE致敏條件的確定
        2.3.2 DNP-HSA致敏條件的確定
第3章 姜黃素類化合物對(duì)DNP-IgE/HSA誘導(dǎo)RBL-2H3脫顆粒模型的影響
    3.1 材料
        3.1.1 細(xì)胞
        3.1.2 試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)藥品
    3.2 方法
        3.2.1 對(duì)脫顆粒模型的細(xì)胞活性的影響
        3.2.2 對(duì)細(xì)胞脫顆粒模型β-HEX釋放率的影響
        3.2.3 對(duì)細(xì)胞脫顆粒模型脫顆粒程度的影響。
        3.2.4 對(duì)細(xì)胞膜重構(gòu)的影響
        3.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 對(duì)脫顆粒模型的細(xì)胞活性的影響
        3.3.2 對(duì)脫顆粒模型β-HEX釋放率的影響
        3.3.3 對(duì)細(xì)胞脫顆粒模型脫顆粒程度的影響。
        3.3.4 對(duì)細(xì)胞膜骨架F-actin重構(gòu)的影響
第4章 雙去甲氧基姜黃素對(duì)肥大細(xì)胞介導(dǎo)的過敏性疾病的影響
    4.1 材料
        4.1.1 動(dòng)物
        4.1.2 試劑
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)藥品
    4.2 方法
        4.2.1 OVA誘導(dǎo)的過敏性鼻炎
        4.2.2 Compound48/80誘導(dǎo)過敏性休克
        4.2.3 OVA誘導(dǎo)的主動(dòng)性系統(tǒng)免疫疾病
        4.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 對(duì)OVA誘導(dǎo)的過敏性鼻炎的影響
        4.3.2 對(duì)Compound48/80誘導(dǎo)過敏性休克的影響
        4.3.3 對(duì)OVA誘導(dǎo)的主動(dòng)性系統(tǒng)免疫疾病的影響
    結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝

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相關(guān)期刊論文 前2條

1 王化龍;李振虎;徐硯通;;中藥治療過敏性疾病的藥理作用研究進(jìn)展[J];中草藥;2015年10期

2 Masashi Kanai;;Therapeutic applications of curcumin for patients with pancreatic cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2014年28期

本文編號(hào)：2870857