癌癥作為一種全球性疾病,無(wú)論其發(fā)病機(jī)制還是治療作用的研究一直是生物醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)。癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移是很多惡性腫瘤難以治愈和復(fù)發(fā)的關(guān)鍵一步,其中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)賦予細(xì)胞轉(zhuǎn)移和入侵的能力,被普遍認(rèn)為是腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移過(guò)程的第一步。已有的研究報(bào)道了維生素C(VC)對(duì)胰腺癌、前列腺癌、肺癌等有一定的治療作用,但是其作用機(jī)制存在廣泛爭(zhēng)議,在乳腺癌中的作用也不甚明確。因此,本課題擬探究不同劑量VC對(duì)腫瘤的治療作用,并著重在乳腺癌并研究其發(fā)揮作用的機(jī)制。目的:觀察腫瘤細(xì)胞系在不同劑量VC作用后,其增殖、凋亡、遷移和侵襲能力及相關(guān)信號(hào)通路的改變,并進(jìn)一步探索VC發(fā)揮作用的機(jī)制。方法:以人乳腺癌細(xì)胞Bcap37、MDA-MB-453、前列腺癌細(xì)胞PC3、胃癌細(xì)胞MGC803和小鼠路易斯肺癌LLC及人正常乳腺上皮細(xì)胞MCF 10A為體外研究對(duì)象,分別給予低(0.01mM)、中(0.1mM)、高(2mM)劑量的VC。采用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖,劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和transwell小室實(shí)驗(yàn)分別評(píng)價(jià)細(xì)胞遷移和侵襲能力;蛋白免疫印記法和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)上皮和間質(zhì)蛋白表達(dá)情況。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以裸鼠為研究對(duì)象,測(cè)量荷瘤小鼠的腫瘤大小和轉(zhuǎn)移程度,使用高效液相測(cè)量轉(zhuǎn)基因小鼠Gulo-/-小鼠在不同劑量VC作用下血清和組織中VC含量。結(jié)果:在細(xì)胞上,高劑量VC作用下,多種腫瘤細(xì)胞增殖受到抑制。以Bcap37和MDA-MB-453為例,與VC完全剝奪組相比,細(xì)胞增殖受到顯著抑制(Relative cell viability=28.4±0.3%;26.6±0.2%),而人正常乳腺上皮細(xì)胞增殖無(wú)顯著性改變。在中劑量VC作用下,多種腫瘤細(xì)胞增殖得以促進(jìn)。進(jìn)一步結(jié)果顯示高劑量VC可下調(diào)Bcap37細(xì)胞和MDA-MB-453細(xì)胞中Glut1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)和mTOR信號(hào)通路活性,且在Bcap37細(xì)胞乳酸分泌量明顯減少。然而,在MCF 10A細(xì)胞中,并未觀察到Glut1轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)量、mTOR信號(hào)通路活性以及乳酸分泌含量的改變。另外,乳腺癌細(xì)胞Bcap3 7和MDA-MB-453在高劑量VC作用下細(xì)胞遷移和侵襲均受到明顯抑制。TGF-β1誘導(dǎo)的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化中,高劑量VC可顯著緩解其誘導(dǎo)作用,且增加上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)并減少間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin表達(dá)。并且在細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)中,劃痕愈合和transwell小室遷移結(jié)果同樣證明高劑量VC對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)作用的挽救能力。在動(dòng)物水平上,Gulo-/-小鼠在接種Bcap37細(xì)胞后,高劑量VC顯著地減小了腫瘤體積,并具有維持荷瘤小鼠體重的作用。通過(guò)高效液相色譜法測(cè)得的VC含量進(jìn)一步說(shuō)明在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分VC劑量設(shè)置的合理性。接種了 Bcap37細(xì)胞的裸鼠在接受腹腔注射高劑量維生素C后,腫瘤重量明顯減小,肺轉(zhuǎn)移率顯著下降,且免疫組化結(jié)果顯示,間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin在VC治療組較未給予VC組顯著減少。結(jié)論:高劑量維生素C抑制細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡,這一作用可能與抑制細(xì)胞能量攝取有關(guān);高劑量維生素C還能抑制乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移,其機(jī)制可能與抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化有關(guān)。因此,日常攝取的水溶性維生素C在高劑量下可能作為抗腫瘤治療的潛在治療藥物。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

浙狀學(xué)碩士學(xué)位論文?引言??胞可以克服重重“屏障”，最終形成遠(yuǎn)端腫瘤位點(diǎn)。發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳腺癌病人??普遍存活的壽命是５－１０年，并且這一數(shù)字在過(guò)去的近三十年的研究中并沒(méi)有隨著??醫(yī)療水平的進(jìn)步有明顯提高ＰＬ乳腺癌復(fù)發(fā)常見(jiàn)的形式有兩種：一，遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，??通常轉(zhuǎn)移部位是肺、肝、骨頭等［１３＿１５］。二，局部區(qū)域復(fù)發(fā)，如胸、胸壁、區(qū)域淋??巴結(jié)。其中，因乳腺癌復(fù)發(fā)而死亡的病人中９０％是由于遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移［１６】。因此，與此??相關(guān)的機(jī)制引起了科研人員的極大興趣，與之相關(guān)的研究也層出不窮（圖１）。目??前，已產(chǎn)生了很多解釋此現(xiàn)象的可能機(jī)制，如包括免疫細(xì)胞、癌癥相關(guān)成纖維細(xì)??胞（ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＣＡＦｓ）、周細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞在內(nèi)的基質(zhì)細(xì)??胞的作用；分泌生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、趨化因子和外泌體等生物活性分子的腫瘤??和基質(zhì)細(xì)胞的作用；淋巴管和血管系統(tǒng)的作用；上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化??（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，?ＥＭＴ）等［１４：１７肩。??Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ?ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ??

３．２．１?ＶＣ量１?（Ｇｌｕｔｌ）??根據(jù)前面的結(jié)果，可知ＶＣ劑量對(duì)細(xì)胞增殖能力高低有很大影響。為了探究其??作用的機(jī)制，我們按照上述實(shí)驗(yàn)設(shè)置同樣的分組，檢測(cè)人正常乳腺上皮細(xì)胞ＭＣＦ??１０Ａ、乳腺癌細(xì)胞Ｂｃａｐ３７和ＭＤＡ－ＭＢ－４５３中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體１?（Ｇｌｕｔｌ?）在ＶＣ作用??下的表達(dá)量變化。??如圖４所示，在高劑量ＶＣ作用下，乳腺癌Ｂｃａｐ３７和ＭＤＡ－ＭＢ－４５３中Ｇｌｕｔｌ??表達(dá)量明顯降低（Ｐ＜０．０５），且在Ｂｃａｐ３７中，中等劑量ＶＣ具有促進(jìn)Ｇｌｕｔｌ表迖??量增加的作用（Ｐ＜〇．〇５）。ＭＣＦ１０Ａ細(xì)胞在各種ＶＣ劑量下，Ｇｌｕｔｌ表達(dá)量沒(méi)有顯??著性差異。由于在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，添加的ＶＣ在培養(yǎng)基中具有２ｈ左右的半衰期，??大部分ＶＣ以氧化型被細(xì)胞攝取，其中Ｇｌｕｔｌ是轉(zhuǎn)運(yùn)氧化型ＶＣ的主要轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白［３６］。??此外，Ｇｌｕｔｌ還是細(xì)胞所需的能量供應(yīng)者葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)體，高劑量ＶＣ抑制Ｇｌｕｔｌ??的表達(dá)，在一定程度上抑制了細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取，即從能量上減少對(duì)癌細(xì)胞供??應(yīng)。??Ａ?ＭＣＦ１０Ａ?ｃ?Ｂｃａｐ３７?Ｅ?ＭＤＡ－ＭＢ－４５３??

不同劑圈
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本文編號(hào)：2865613