癌癥作為一種全球性疾病,無論其發(fā)病機制還是治療作用的研究一直是生物醫(yī)學的研究熱點。癌細胞轉(zhuǎn)移是很多惡性腫瘤難以治愈和復發(fā)的關(guān)鍵一步,其中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)賦予細胞轉(zhuǎn)移和入侵的能力,被普遍認為是腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移過程的第一步。已有的研究報道了維生素C(VC)對胰腺癌、前列腺癌、肺癌等有一定的治療作用,但是其作用機制存在廣泛爭議,在乳腺癌中的作用也不甚明確。因此,本課題擬探究不同劑量VC對腫瘤的治療作用,并著重在乳腺癌并研究其發(fā)揮作用的機制。目的:觀察腫瘤細胞系在不同劑量VC作用后,其增殖、凋亡、遷移和侵襲能力及相關(guān)信號通路的改變,并進一步探索VC發(fā)揮作用的機制。方法:以人乳腺癌細胞Bcap37、MDA-MB-453、前列腺癌細胞PC3、胃癌細胞MGC803和小鼠路易斯肺癌LLC及人正常乳腺上皮細胞MCF 10A為體外研究對象,分別給予低(0.01mM)、中(0.1mM)、高(2mM)劑量的VC。采用CCK8法檢測細胞增殖,劃痕愈合實驗和transwell小室實驗分別評價細胞遷移和侵襲能力;蛋白免疫印記法和細胞免疫熒光檢測上皮和間質(zhì)蛋白表達情況。體內(nèi)實驗以裸鼠為研究對象,測量荷瘤小鼠的腫瘤大小和轉(zhuǎn)移程度,使用高效液相測量轉(zhuǎn)基因小鼠Gulo-/-小鼠在不同劑量VC作用下血清和組織中VC含量。結(jié)果:在細胞上,高劑量VC作用下,多種腫瘤細胞增殖受到抑制。以Bcap37和MDA-MB-453為例,與VC完全剝奪組相比,細胞增殖受到顯著抑制(Relative cell viability=28.4±0.3%;26.6±0.2%),而人正常乳腺上皮細胞增殖無顯著性改變。在中劑量VC作用下,多種腫瘤細胞增殖得以促進。進一步結(jié)果顯示高劑量VC可下調(diào)Bcap37細胞和MDA-MB-453細胞中Glut1轉(zhuǎn)運蛋白表達和mTOR信號通路活性,且在Bcap37細胞乳酸分泌量明顯減少。然而,在MCF 10A細胞中,并未觀察到Glut1轉(zhuǎn)運體表達量、mTOR信號通路活性以及乳酸分泌含量的改變。另外,乳腺癌細胞Bcap3 7和MDA-MB-453在高劑量VC作用下細胞遷移和侵襲均受到明顯抑制。TGF-β1誘導的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化中,高劑量VC可顯著緩解其誘導作用,且增加上皮細胞標志物E-cadherin表達并減少間質(zhì)細胞標志物Vimentin表達。并且在細胞功能實驗中,劃痕愈合和transwell小室遷移結(jié)果同樣證明高劑量VC對TGF-β1誘導作用的挽救能力。在動物水平上,Gulo-/-小鼠在接種Bcap37細胞后,高劑量VC顯著地減小了腫瘤體積,并具有維持荷瘤小鼠體重的作用。通過高效液相色譜法測得的VC含量進一步說明在細胞實驗部分VC劑量設置的合理性。接種了 Bcap37細胞的裸鼠在接受腹腔注射高劑量維生素C后,腫瘤重量明顯減小,肺轉(zhuǎn)移率顯著下降,且免疫組化結(jié)果顯示,間質(zhì)標志物Vimentin在VC治療組較未給予VC組顯著減少。結(jié)論:高劑量維生素C抑制細胞增殖并促進其凋亡,這一作用可能與抑制細胞能量攝取有關(guān);高劑量維生素C還能抑制乳腺癌細胞轉(zhuǎn)移,其機制可能與抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化有關(guān)。因此,日常攝取的水溶性維生素C在高劑量下可能作為抗腫瘤治療的潛在治療藥物。
【學位單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

浙狀學碩士學位論文?引言??胞可以克服重重“屏障”，最終形成遠端腫瘤位點。發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳腺癌病人??普遍存活的壽命是５－１０年，并且這一數(shù)字在過去的近三十年的研究中并沒有隨著??醫(yī)療水平的進步有明顯提高ＰＬ乳腺癌復發(fā)常見的形式有兩種：一，遠端轉(zhuǎn)移，??通常轉(zhuǎn)移部位是肺、肝、骨頭等［１３＿１５］。二，局部區(qū)域復發(fā)，如胸、胸壁、區(qū)域淋??巴結(jié)。其中，因乳腺癌復發(fā)而死亡的病人中９０％是由于遠端轉(zhuǎn)移［１６】。因此，與此??相關(guān)的機制引起了科研人員的極大興趣，與之相關(guān)的研究也層出不窮（圖１）。目??前，已產(chǎn)生了很多解釋此現(xiàn)象的可能機制，如包括免疫細胞、癌癥相關(guān)成纖維細??胞（ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＣＡＦｓ）、周細胞和間充質(zhì)干細胞在內(nèi)的基質(zhì)細??胞的作用；分泌生長因子、細胞因子、趨化因子和外泌體等生物活性分子的腫瘤??和基質(zhì)細胞的作用；淋巴管和血管系統(tǒng)的作用；上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化??（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，?ＥＭＴ）等［１４：１７肩。??Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ?ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ??

３．２．１?ＶＣ量１?（Ｇｌｕｔｌ）??根據(jù)前面的結(jié)果，可知ＶＣ劑量對細胞增殖能力高低有很大影響。為了探究其??作用的機制，我們按照上述實驗設置同樣的分組，檢測人正常乳腺上皮細胞ＭＣＦ??１０Ａ、乳腺癌細胞Ｂｃａｐ３７和ＭＤＡ－ＭＢ－４５３中葡萄糖轉(zhuǎn)運體１?（Ｇｌｕｔｌ?）在ＶＣ作用??下的表達量變化。??如圖４所示，在高劑量ＶＣ作用下，乳腺癌Ｂｃａｐ３７和ＭＤＡ－ＭＢ－４５３中Ｇｌｕｔｌ??表達量明顯降低（Ｐ＜０．０５），且在Ｂｃａｐ３７中，中等劑量ＶＣ具有促進Ｇｌｕｔｌ表迖??量增加的作用（Ｐ＜〇．〇５）。ＭＣＦ１０Ａ細胞在各種ＶＣ劑量下，Ｇｌｕｔｌ表達量沒有顯??著性差異。由于在體外培養(yǎng)細胞時，添加的ＶＣ在培養(yǎng)基中具有２ｈ左右的半衰期，??大部分ＶＣ以氧化型被細胞攝取，其中Ｇｌｕｔｌ是轉(zhuǎn)運氧化型ＶＣ的主要轉(zhuǎn)運蛋白［３６］。??此外，Ｇｌｕｔｌ還是細胞所需的能量供應者葡萄糖的轉(zhuǎn)運體，高劑量ＶＣ抑制Ｇｌｕｔｌ??的表達，在一定程度上抑制了細胞對葡萄糖的攝取，即從能量上減少對癌細胞供??應。??Ａ?ＭＣＦ１０Ａ?ｃ?Ｂｃａｐ３７?Ｅ?ＭＤＡ－ＭＢ－４５３??

不同劑圈
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本文編號：2865613