目的:索拉菲尼是肝癌靶向治療的首選藥物,但耐藥性的產(chǎn)生限制其臨床療效。雖然目前對(duì)索拉菲尼的耐藥研究有一定進(jìn)展,然而其機(jī)制尚未完全闡明。通過(guò)在分子、細(xì)胞層面上闡明MEF2D促進(jìn)索拉非尼耐藥的分子機(jī)制,確定MEF2D通過(guò)SPRY4/RAS/ERK通路影響肝癌的索拉非尼療效。方法:首先,通過(guò)間歇誘導(dǎo)法建立索拉非尼肝癌耐藥株,通過(guò)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化;MTT法檢測(cè)耐藥株的耐藥指數(shù)。Western Blot檢測(cè)索拉非尼耐藥株與敏感株中MEK、p-MEK、ERK、p-ERK、MEF2D的蛋白表達(dá)量的差異;為了探索MEF2D索拉非尼耐藥中的角色,先在肝癌的索拉非尼耐藥株中沉默MEF2D或者在肝癌的索拉非尼敏感株中過(guò)表達(dá)MEF2D,然后通過(guò)CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)肝癌細(xì)胞對(duì)索拉非尼敏感性的變化;通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot分別檢測(cè)肝癌細(xì)胞中SPRY4 m RNA和蛋白水平的變化。結(jié)果:通過(guò)倒置顯微鏡以及MTT結(jié)果顯示,索拉非尼耐藥株建成;MEF2D、p-MEK、p-ERK的蛋白表達(dá)量在索拉非尼耐藥株中的表達(dá)量明顯高于索拉非尼敏感株;在耐藥株中沉默MEF2D,肝癌耐藥株p-ERK和p-MEK表達(dá)下降,導(dǎo)致耐藥株對(duì)索拉非尼的耐藥性降低;而在敏感株細(xì)胞中過(guò)表達(dá)MEF2D后,肝癌細(xì)胞p-ERK和p-MEK表達(dá)上升,同時(shí)細(xì)胞對(duì)索拉非尼的耐藥性隨之升高。另外,經(jīng)相同的實(shí)驗(yàn)處理之后,RAS/ERK通路的負(fù)調(diào)控因子SPRY4的m RNA和蛋白水平變化趨勢(shì)與MEF2D相反。結(jié)論:MEF2D通過(guò)抑制SPRY4的表達(dá),使ERK通路的活性增強(qiáng),促進(jìn)了索拉非尼耐藥性的產(chǎn)生。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果藥的肝癌細(xì)胞株的建立 檢測(cè)肝癌細(xì)胞的生存率，如圖 1 所示，隨著藥物濃低。通過(guò) SPSS 軟件計(jì)算得出，48h 后 PLC/PRF/5M，Huh7 的 IC50值為（11.28±0.02）μM。在篩選成非尼耐藥株的細(xì)胞形態(tài)變化，并對(duì)索拉非尼敏感組（圖 2）。如圖 3 所示利用 CCK8 檢測(cè)索拉非尼耐非尼敏感組，并且具有差異性（p<0.05）。耐藥株M，耐藥指數(shù)為 3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明 PLC/PRF/5 的索PLC/PRF/5

A B圖 2 倒置顯微鏡觀察 PLC/PRF/5（a）及其耐藥細(xì)胞(b)的形態(tài)學(xué)變化(X40)。利用倒置顯微鏡攝 PLC/PRF/5 細(xì)胞以及經(jīng)索拉非尼處理后的 PLC/PRF/5-DR3 細(xì)胞，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化PLC/PRF/5-DR3

12 3 CCK8 法檢測(cè)索拉非尼對(duì) PLC/PRF/5-DR3 細(xì)胞增殖抑制作用。在 PLC/P拉非尼（0，2，4，8，16，32μM）分別處理 48h 后，用 CCK8 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)吸用 SPSS 軟件分析 PLC/PRF/5-DR3 細(xì)胞的 IC50值。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2863244