目的:索拉菲尼是肝癌靶向治療的首選藥物,但耐藥性的產(chǎn)生限制其臨床療效。雖然目前對索拉菲尼的耐藥研究有一定進展,然而其機制尚未完全闡明。通過在分子、細胞層面上闡明MEF2D促進索拉非尼耐藥的分子機制,確定MEF2D通過SPRY4/RAS/ERK通路影響肝癌的索拉非尼療效。方法:首先,通過間歇誘導(dǎo)法建立索拉非尼肝癌耐藥株,通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化;MTT法檢測耐藥株的耐藥指數(shù)。Western Blot檢測索拉非尼耐藥株與敏感株中MEK、p-MEK、ERK、p-ERK、MEF2D的蛋白表達量的差異;為了探索MEF2D索拉非尼耐藥中的角色,先在肝癌的索拉非尼耐藥株中沉默MEF2D或者在肝癌的索拉非尼敏感株中過表達MEF2D,然后通過CCK-8細胞增殖實驗評價肝癌細胞對索拉非尼敏感性的變化;通過實時熒光定量PCR和Western Blot分別檢測肝癌細胞中SPRY4 m RNA和蛋白水平的變化。結(jié)果:通過倒置顯微鏡以及MTT結(jié)果顯示,索拉非尼耐藥株建成;MEF2D、p-MEK、p-ERK的蛋白表達量在索拉非尼耐藥株中的表達量明顯高于索拉非尼敏感株;在耐藥株中沉默MEF2D,肝癌耐藥株p-ERK和p-MEK表達下降,導(dǎo)致耐藥株對索拉非尼的耐藥性降低;而在敏感株細胞中過表達MEF2D后,肝癌細胞p-ERK和p-MEK表達上升,同時細胞對索拉非尼的耐藥性隨之升高。另外,經(jīng)相同的實驗處理之后,RAS/ERK通路的負調(diào)控因子SPRY4的m RNA和蛋白水平變化趨勢與MEF2D相反。結(jié)論:MEF2D通過抑制SPRY4的表達,使ERK通路的活性增強,促進了索拉非尼耐藥性的產(chǎn)生。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

實驗結(jié)果實驗結(jié)果藥的肝癌細胞株的建立 檢測肝癌細胞的生存率，如圖 1 所示，隨著藥物濃低。通過 SPSS 軟件計算得出，48h 后 PLC/PRF/5M，Huh7 的 IC50值為（11.28±0.02）μM。在篩選成非尼耐藥株的細胞形態(tài)變化，并對索拉非尼敏感組（圖 2）。如圖 3 所示利用 CCK8 檢測索拉非尼耐非尼敏感組，并且具有差異性（p<0.05）。耐藥株M，耐藥指數(shù)為 3。實驗結(jié)果證明 PLC/PRF/5 的索PLC/PRF/5

A B圖 2 倒置顯微鏡觀察 PLC/PRF/5（a）及其耐藥細胞(b)的形態(tài)學(xué)變化(X40)。利用倒置顯微鏡攝 PLC/PRF/5 細胞以及經(jīng)索拉非尼處理后的 PLC/PRF/5-DR3 細胞，觀察細胞的形態(tài)變化PLC/PRF/5-DR3

12 3 CCK8 法檢測索拉非尼對 PLC/PRF/5-DR3 細胞增殖抑制作用。在 PLC/P拉非尼（0，2，4，8，16，32μM）分別處理 48h 后，用 CCK8 實驗檢測吸用 SPSS 軟件分析 PLC/PRF/5-DR3 細胞的 IC50值。
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號：2863244