發(fā)布時(shí)間：2020-10-22 12:53

　　 第一部分殼聚糖修飾的多粘菌素B脂質(zhì)體及脂質(zhì)微泡的制備及性能檢測(cè)目的制備微泡及殼聚糖修飾的多粘菌素B脂質(zhì)體,并測(cè)定其一般特性。方法采用注入法制備殼聚糖修飾的多粘菌素B脂質(zhì)體(c-PMB-Lip),并觀察其形態(tài),檢測(cè)其粒徑、電位、包封率、載藥量及體外釋放率等一般特性;采用機(jī)械震蕩法制備脂質(zhì)微泡(MB),并檢測(cè)粒徑、電位及其形態(tài)分布;隨后通過靜電吸附法制備微泡-殼聚糖修飾的多粘菌素B脂質(zhì)體耦聯(lián)體(MB-c-PMB-Lip),并用熒光顯微鏡檢測(cè)其連接情況。結(jié)果制備的c-PMB-Lip粒徑分布均勻,平均粒徑為(215.2±5.03)nm,Zeta電位為(12.64±1.44)m V,包封率為(90.31±2.84)%,載藥量為(15.62±1.97)%,且在24h內(nèi)能夠完全釋放出抗菌藥物,具有一定的緩釋作用;MB粒徑為(4.54±0.8)μm,電位為(-2.42±0.43)m V。熒光顯微鏡觀察兩者連接情況顯示制備的攜帶正電電荷的載藥脂質(zhì)體均勻的分布在帶負(fù)電的脂質(zhì)微泡周圍,形成帶有紅色熒光的花環(huán)樣結(jié)構(gòu)。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功的制備了殼聚糖修飾的多粘菌素B脂質(zhì)體,并將其與脂質(zhì)微泡相連接,形成微泡-載藥脂質(zhì)體耦聯(lián)體。熒光顯微鏡觀察得出該耦聯(lián)體粒徑分布均勻,結(jié)合率高,提示其可作為體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的藥物研究基礎(chǔ)。第二部分超聲微泡聯(lián)合殼聚糖修飾的多粘菌素B脂質(zhì)體對(duì)生物膜態(tài)鮑曼不動(dòng)桿菌的體外抗菌實(shí)驗(yàn)研究目的探究超聲微泡聯(lián)合殼聚糖修飾的多粘菌素B脂質(zhì)體對(duì)生物膜態(tài)鮑曼不動(dòng)桿菌的協(xié)同抗菌作用;探討二者聯(lián)合對(duì)細(xì)菌生物膜結(jié)構(gòu)的影響。方法采用96孔板法培養(yǎng)細(xì)菌生物膜,微量肉湯稀釋法測(cè)定不同多粘菌素制劑對(duì)臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌(AB)的最小生物膜抑制濃度(MBIC);采用結(jié)晶紫染色法及Alamar Blue法分別評(píng)價(jià)殼聚糖修飾的多粘菌素B脂質(zhì)體組(c-PMB-Lip)、超聲微泡+多粘菌素B組(USMB+PMB)、超聲微泡+殼聚糖修飾的多粘菌素B脂質(zhì)體組(USMB+c-PMB-Lip)對(duì)生物膜態(tài)AB的抗菌作用,并分析其抗菌效應(yīng)的量效關(guān)系;采用24孔板法培養(yǎng)細(xì)菌生物膜,通過掃描電鏡評(píng)價(jià)不同制劑對(duì)AB生物膜結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果c-PMB-Lip對(duì)生物膜態(tài)AB的MBIC為(8.0±2.0)μg·m L-1;;超聲微泡能增強(qiáng)抗菌藥物多黏菌素B對(duì)生物膜態(tài)AB的抑制作用;而超聲微泡聯(lián)合脂質(zhì)體制劑可得到更為顯著的抗生物膜態(tài)AB效應(yīng),甚至可以完全清除生物膜態(tài)AB;各組隨著藥物濃度的增加,在一定范圍內(nèi)與其抗菌作用呈現(xiàn)量效關(guān)系;同無菌空白對(duì)照組相比,USMB+c-PMB-Lip在2μg/m L時(shí)幾乎能夠完全清除細(xì)菌生物膜并達(dá)到最大抗菌效應(yīng)(P0.05);掃描電鏡顯示經(jīng)超聲微泡處理后AB生物膜表面形成由空化作用導(dǎo)致的散在小孔;多粘菌素B處理后仍可見大量生物膜結(jié)構(gòu),USMB+c-PMB-Lip處理后,生物膜清除十分明顯,僅存散在個(gè)別細(xì)菌。結(jié)論超聲微泡聯(lián)合殼聚糖修飾的多黏菌素B脂質(zhì)體對(duì)生物膜態(tài)AB具有顯著的協(xié)同抗菌作用。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

圖 1.1 c-PMB-Lip 的粒徑與 Zeta 電位分布（a. 粒徑圖 b. Zeta 電位）Figure 1.1 The size distribution and Zeta potential of c-PMB-Lip (a. size distribution b. Zetapotential)2.2 c-PMB-Lip 的包封率、載藥量及體外釋放率對(duì)硫酸多粘菌素 B 溶液在 200nm-400nm 的波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)本品僅有末端吸收，而在 215nm 處，PMB 在 10～100 μg mL-1濃度范圍內(nèi)，線性良好，回歸方程為 A=0.0095c+0.0022（r2=0.9993，n=6）（圖 1.2），因此選擇該波長為檢測(cè)波長。而由于在該波長處，其他材料同樣有吸收，因此預(yù)先采用超濾法濾去未結(jié)合的材料，再進(jìn)行含量測(cè)定。由此，得到制備的載藥脂質(zhì)體包封率為（90.31±2.84）%，載藥量為（15.62±1.97）%。由 PMB 及 c-PMB-Lip 體外釋放結(jié)果顯示，游離藥物在 12h 以內(nèi)能全部從透析介質(zhì)中釋放出來；而載藥脂質(zhì)體至 24h完全釋放出抗菌藥物，具有一定的緩釋作用（圖 1.3）。

圖 1.3 PMB 及 c-PMB-Lip 累積體外釋放結(jié)果（n=3）Figure 1.3 Drug cumulative release curves of PMB and c-PMB-Lip（ 脂質(zhì)微泡的粒徑電位及形態(tài)觀察由機(jī)械震蕩法制備的脂質(zhì)微泡呈圓環(huán)狀，外層為磷脂層包裹，中空泡狀，分布較均勻，無聚集現(xiàn)象（圖 2）。平均粒徑為（4.54 （-2.42 0.43）mV（表 1.1）。 MB-c-PMB-Lip 的性質(zhì)檢測(cè)普通光學(xué)顯微鏡下觀察微泡-脂質(zhì)體耦聯(lián)體因二者粒徑相差較大要呈現(xiàn)微泡的圓環(huán)樣結(jié)構(gòu)，形態(tài)與普通微泡無明顯差異（圖 3）鏡視野下，Dil 標(biāo)記的載藥脂質(zhì)體呈現(xiàn)紅色熒光�？梢姶罅恐|(zhì)記的微泡周圍，形成紅色花環(huán)樣結(jié)構(gòu)，除少數(shù)聚集外，其余均勻

100μL LB 培養(yǎng)基，隨即加入 10μLAlamar Blue 試劑，混勻恒溫培養(yǎng) 1h，多功能酶標(biāo)儀測(cè)定每孔在 570nm 及 600nm 處式計(jì)算 Alamar Blue 還原率（%），以評(píng)價(jià)孔板內(nèi)細(xì)菌存活率Alamar Blue 還原率（%）=（ 600 570）－（ 570 600）( 570′ 600) ( 600′ 570)100化型 Alamar Blue 在 570nm 波長的消光系數(shù)=80586化型 Alamar Blue 在 600nm 波長的消光系數(shù)=117216測(cè)孔在 570nm 波長的吸光度測(cè)孔在 600nm 波長的吸光度=還原型 Alamar Blue 在 570nm 波長的消光系數(shù)=155677=還原型 Alamar Blue 在 600nm 波長的消光系數(shù)=14652性對(duì)照孔在 570nm 波長的吸光度（培養(yǎng)基，Alamar Blue，性對(duì)照孔在 600nm 波長的吸光度（培養(yǎng)基，Alamar Blue，
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 朱婷;李永吉;;提高水溶性藥物脂質(zhì)體包封率制備方法的研究[J];黑龍江科技信息;2015年21期

本文編號(hào)：2851626