本文關鍵詞：海洋微生物生物活性菌株的篩選及菌株01299次級代謝產物的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本文選取自中國南海及印度洋深海沉積物中分離鑒定的放線菌為研究對象,通過高通量發(fā)酵及活性和化學篩選,發(fā)現代謝產物豐富,抑菌活性良好的目標菌株。結合不同模式的活性檢測,對目標菌株進行進一步發(fā)酵、提取、分離和純化其次級代謝產物,利用NMR、MS等現代波譜技術分析其分子結構,闡明目標微生物的活性來源,為開發(fā)和利用新的藥用微生物資源提供理論依據。方法:①中科院海洋微生物研究中心微生物庫選取的26株放線菌進行高通量發(fā)酵,以薄層色譜法(TLC)和高效液相色譜法(HPLC)確定次級代謝產物豐富的菌株;以抑菌試驗為活性導向初步篩選出有活性的菌株;②將篩選出的目標菌株進行發(fā)酵,將粗浸膏依次以常壓柱層析(正相硅膠、反相Rp-18硅膠)、中壓制備色譜(MPLC)以及制備型高效液相色譜法(HPLC)分離純化;③用MS、NMR等現代光譜學方法鑒定單體化合物的結構;④測定單體化合物的抑菌活性、1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH·)自由基清除活性和血管緊張素轉化酶抑制活性。結果:菌株的生物活性篩選發(fā)現放線菌Pseudonocardia sp.SCSIO 01299能產生豐富且有活性的次級代謝產物,將其確定為目標菌株,進行次級代謝產物的分離純化和結構鑒定,共分離鑒定13個化合物,其中五個環(huán)二肽類:環(huán)(L-脯-L-酪)二肽(1)、環(huán)(L-脯-L-纈)二肽(2)、環(huán)(L-脯-L-苯丙)二肽(3)、環(huán)(L-纈-L-苯丙)二肽(4)、環(huán)(L-脯-L-亮)二肽(5);一個二氮蒽醌類:Deoxynyboquinone(6);一個酯類:鄰苯二甲酸二乙二醇酯(7);三個酸類:十四碳烷酸(豆蔻酸)(8)、4-羥基-3-甲氧基苯甲酸(香草酸)(9)、3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸(丁香酸)(10);一個醇類:吐葉醇(11)和兩個苯并惡唑啉酮類:6-羥基-2-苯并惡唑啉酮(12)、2-苯并惡唑啉酮(13)�；衔�1~10的活性測試表明,化合物3和5具有1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH·)自由基清除活性,IC50值分別為:9.48μmol·mL-1和2.85μmol·mL-1;化合物4具有血管緊張素轉化酶抑制活性,IC50值為0.72μmol·mL-1;化合物6對金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、枯草芽孢桿菌有抑制作用,最小抑菌濃度分別為:0.025mmol·L-1,0.05mmol·L-1,0.05mmol·L-1。結論:本研究對海洋來源放線菌的次級代謝產物及其活性進行探索,發(fā)現了兩株具有豐富代謝產物和良好活性的菌株,并以菌株01299為對象分離的單體化合物顯示較好的活性,為這個菌株的進一步開發(fā)利用提供了科學理論基礎。
【關鍵詞】：放線菌 次級代謝產物 生物活性
【學位授予單位】：湖南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R915
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-13
• 1 引言13-17
• 1.1 研究背景13-14
• 1.2 本論文的研究目的和意義14
• 1.3 主要研究內容14-16
• 1.4 技術路線16-17
• 2 26株海洋放線菌的活性篩選和目標菌株的確定17-27
• 2.1 菌株的發(fā)酵與次級代謝產物的提取17-18
• 2.1.1 樣品來源17
• 2.1.2 菌株的活化與發(fā)酵17-18
• 2.1.3 次級代謝產物的提取18
• 2.2 菌株的篩選模型18-19
• 2.2.1 篩選方法18
• 2.2.2 抑菌活性篩選18-19
• 2.2.3 化學篩選19
• 2.3 目標菌株的確定和發(fā)酵條件優(yōu)化19-20
• 2.3.1 培養(yǎng)基選擇試驗19-20
• 2.3.2 培養(yǎng)方式選擇試驗20
• 2.3.3 發(fā)酵時間的考察20
• 2.4 結果與分析20-26
• 2.4.1 菌株抑菌活性篩選結果20-23
• 2.4.2 TLC篩選結果23-24
• 2.4.3 HPLC篩選結果24-25
• 2.4.4 目標菌株的確定25-26
• 2.5 小結與討論26-27
• 3 放線菌01299菌株的化學成分研究27-46
• 3.1 材料和方法27-31
• 3.1.1 儀器和試劑27
• 3.1.2 菌株來源及保藏27-28
• 3.1.3 菌株的發(fā)酵和萃取28
• 3.1.4 分離純化28-30
• 3.1.5 結構鑒定30-31
• 3.2 結果與討論31-42
• 3.3 化合物波譜數據42-45
• 3.4 小結與討論45-46
• 4 次級代謝產物生物活性的研究46-54
• 4.1 抑菌活性試驗46-47
• 4.1.1 試劑和儀器46
• 4.1.2 測定方法46-47
• 4.2 自由基清除活性試驗47-48
• 4.2.1 原理47
• 4.2.2 試劑和儀器47
• 4.2.3 測定方法47-48
• 4.3 血管緊張素轉化酶抑制活性實驗48-49
• 4.3.1 原理48
• 4.3.2 試劑和儀器：48
• 4.3.3 試劑的配制48-49
• 4.3.4 試驗方法49
• 4.4 結果與討論49-53
• 4.4.1 抑菌活性49-50
• 4.4.2（DPPH·）自由基清除活性50-52
• 4.4.3 血管緊張素轉化酶抑制活性52-53
• 4.5 小結與討論53-54
• 5 結論與展望54-56
• 5.1 結論54-55
• 5.2 展望55-56
• 參考文獻56-59
• 附錄59-68
• 綜述68-84
• 1 海洋放線菌次級代謝產物的主要化學成分研究69-76
• 1.1 生物堿69-70
• 1.2 萜類70-71
• 1.3 大環(huán)內脂類71-73
• 1.4 環(huán)肽73-74
• 1.5 醌類74-75
• 1.6 其他75-76
• 2 海洋放線菌次級代謝產物的生物活性研究76-80
• 2.1 抗腫瘤活性76-77
• 2.2 抗菌活性77-78
• 2.3 酶抑制活性78-80
• 2.4 免疫抑制活性80
• 3 結論與展望80-81
• 參考文獻81-84
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文84-85
• 致謝85

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1 楊燁;王e，

本文編號：284997